دستورالعمل تشخيص آزمايشگاهی باکتریهای مولد اسهال

صفحه 1:
بنام خدا 

صفحه 2:
دستورالعمل #عخیص آزمانشگامی باکتریهای مولد اسهال 

صفحه 3:
نمونه گيري اولین قدم در راه تشخیص صحیح آزمايشگاهي » نمونه گيري دقیق و درست در زمان بروز بيماري است. #نمونه گيري مدفوع بايستي در مراحل اولیه بيماري (حداکثر ظرف 4 تا 6 روز که عامل بيماري زا به تعداد بيشتري در مدفوع وجود دارد) و قبل از درمان با آنتي بيوتيك صورت پذیرد. #نمونه مدفوع (در صورت قوام دار بودن حداقل 5 گرم و یادر صورت کاملا آبکی بودن معادل 0 سی سی) نسبت به سواب برتری دارد وحداقل باید دو نمونه سوآب مقعدي یا سوآب از مدفوع تازه براي هر بیمارجمع آوري و در محیط انتقال5۱1۲ 0۵۲۷ تلقیح شود. 

صفحه 4:
تهیه نمونه مدفوع و سوآب از مدفوع براي نمونه مدفوع » از يك ظرف درپیچدار تمیز با اندازه مناسب استفاده نمایید . هنگامي که نمونه به آزمایشگاه مي رسد لازم است به سرعت آزمايش بر روي آن انجام شود . ( بیشتر از 0 ساعت از زمان نمونه گيري نگذشته باشد.) اگر ناچار به نگهداري نمونه ها بیشتر از 60 ساعت هستید » سو آب را درون نمونه مدفواع قرار داده و پس از حرکت چرخشي ؛ آن رادر يك محیط انتفالي اگر مدفوع حالت مخاطي دارد سعي کنید نمونه را همراه مخاط در محیط ترانسپورت تلقیح نمایید. 

صفحه 5:
سوآب مقعدی © براي نمونه گيري از سوآب پنبه اي سالم استفاده کنیدو دقت کنید که پنبه سر آن کنده نشده باشد. ء ابتدا سوب را با فرو کردن در محیط ترانسپورت استریل مرطوب کرده و سپس به اندازه0/0تا ©/2سانتى متر داخل اسفنكتر ركتوم نموده و بچرخانید و بیرون بکشید . با توجه به تغییر رنگ پنبه ي سر سوب مطمتن شوید سوب به مدفوع آغشته است .تعداد سوآب مورد نياز بستكي به تعداد عوامل پاتوژن مورد مطالعه دارد.معمولاحداقل © سوآ ب بايد تلقیح شود . 

صفحه 6:
دستورالعمل عمومی برای جمع آوری نمونه 0 نمونه را قبل از درمان آنتی بیوتیکی جمع آوری ‎YS‏ لا امکان آلوده شدن نمونه را با عوامل داخلی وخارجی را به حداقل برسانید. se ep sigalg a Deel eo Say 0 ‏و شماره أن را بنويسيد.‎ 1 نمونه بايد به اندازه ‎cats ls‏ مقادير ناكافى نمونه باعث جواب منفی کاذب می گردد درخواست كشت وبرر كردديدرغيراينصورت ارعايتكاة كت وورسم ‎alc‏ کدی شیر اا نمونه را دريك ظرف درب دار با درب محكم جمع آورى كنيد 

صفحه 7:
۰ نمونه مدفوع را خنک نگهدارید و آن را انکوبه نکنید. ‎٠‏ اگر نمونه مدفوع را نمی توان در,عرض یک یا دو ساعت بعد ازجمع آوری. کشت داد» آن را باید به محيط ترانسپورت (برای مثال کاری-بار یا بافر نمکی گلیسرول) انتقال داد. ‏۰ ازکاغذ توالت برای جمع آوری مدفوع استفاده نکنید. کاغذ توالت ممکن است حاوی نمکهای باریم باشد که بربای بعضی پاتوژنهای مدفوعی مهارکننده رشد هستند 

صفحه 8:
نمونه های مدفوع قابل پذیرش برای کشت دستورالعمل کلی: 1 با ادرار آلوده نشده باشد. قسمتى از مدقوع را که حاوی چرک» خون یا موگوس است برای کشت انتخاب کنید. 1 حدود 5 گرم مدفوع برای کشت کافی است.بعضی ظروف مدفوع دارای خطوطی هستند که مقادیر را نشان می دهد. | ارسال نمونه درح‌تا 0 روزجداگانه امکان جداسازی یک پاتوژن را افزایش می دهد. 

صفحه 9:
* مدفوع باید تازه باشد وا تا 6ساعت بعد از نمونه برداری به آزمایشگاه برسد. * _ درمحیط نگهدارنده ] بافرنمکی گلیسیروله ] ترانسپورت کاری-بلر حرارت ‎٩‏ تا 0 درجه سانتیگراد به آزمایشگاه ارسال شود. ۶ سواب رکتال حتما" باید درمحیط ترانسپورت ارسال شود. 

صفحه 10:
تلقیح به محیط انتقال ‎٠»‏ در صورتي که ناچار به تلقیح نمونه پس از 0 ساعت باشیم لازم است نمونه ها را در یخچال و یا در محیط هاي انتقالي جهت بقا بیشتر قرار دهیم . محیط انتقالي تلقیح شده نیز باید در ری نگهداري شود . زیرا این شرایط براي پاتوژن هايي مانند ‏شیگلا و اکمپیاو ناکتر بستار مهم اننت.. البته بيجت ‎Vallee‏ ‏پاتوژن به تا این دو ارگتیسم قبلیت زنده ماندن براي مدتي در محیط انتقالي » دردماي محیط را دارند (حداکثر يك هفته ). هنگامي که نمونه ها در محیط انتقالي قرار داده شده و نیاز به نگهداري آنها براي مدت بيشتري مي باشد لازم است که در یخچال یا فریزر نگهداري شوند. 

صفحه 11:
محیطلنتقلل] 5۱1 03۲۳۷ ۰ براي نگهداري و انتقال سالمونلا ؛ شیگلاءویبریو کلره»اشریشیاکلی و یرسینیا انتروکولیتیکا بسیار مورد استفاده قرار مي گيرد. ۶ این محیط به میزان 6 سی سی(۴۳۱<8.4) در لوله در پیچدار با اندازه متوسط ريخته مي شود و بايد قبل از استفاده و بعد از تلقیح نمونه به آن در یخچال نگهداری شود. ۰ این محبط انتقالي پس از آماده سازي حداکثر) ماه قابل استفاده است به شرطي ‎AS‏ حجم آن کاهش پیدا نکرده و هیچگونه علائم آلودگي و تغییر رنگ در آن مشاهده نشود. 

صفحه 12:
مراحل تلقیح نمونه در محیط انتقالی حداقل 0 سوآب مدفوع یا مقعدي را به ته لوله حاوي محیط وارد كنيد. يس از قرار دادن سوآب در لوله قسمت جوبي بيرون از لوله را ‎ee‏ در لوله را محکم ببندید. نمونه ها را داخل یخچال نگهداري کنید و اگر امکان نگهداري در یخچال وجود نداردمحیط اننقال حاوي سوآ ب را در مكاني خنك و دور از نور جهت پایین نگه داشتن دما قرار دهید. 

صفحه 13:
محیطهای کشت محیطهای انتفال نمونه ۰ محیطهای کشت اولیه ۰ محیطهای شناسانی ۰ 

صفحه 14:
a7 PrUa ‏ثیاز به محیط مغذی؛ افترآقی:وانتخابی‎ هرج ها م ‎٠‏ محيط روده حاوى باكتريهاى هوازی-بی هوازی * - عدم رشد باکتریهای بیهوازی بعلت انکوباسیون هوازی * - وفور باکتریهای هوازی گرم منفی ومثبت * - تعداد کم عوامل پاتوژن نسبت به فلور » نیاز به محیط مغذی, افتراقی وانتخابی است تا امکان یافتن پاتوژن را افزایش دهیم 

صفحه 15:
محیطهای کشت اولیه محیط های کشت روتین برای سالمونلا وشیگلا به چهارگروه عمده تقسیم می شوند: ** آبگوشت مغذی © محیط افتراقی coh gad gla ‏محیط‎ 4 #* محیط های فوق العاده انتخابی 

صفحه 16:
استفاده ازاين محيط باعث جلوگیری از رشد فلورطبیعی درطی ساعت اولیه انکوباسیون می شود. با ساب کالچرازاین محیط شانس یافتن تعداد کم پاتوژن در .نمونه افزايش می یابد Gram negative (GN) Brotkhi!) S Fes) cule @ 

صفحه 17:
جداسازی شیگلا وسا لمونلا با کشت دراين آبگوشت بیش ازوقتی است که نمونه مدفوع بطورمستقیم برروی محیط اختصاصی کشت داده شود. لاروش عمل : *# تریپتوز دراین محیط بعنوان ماده مغذی عمل می کند. اسیترانت و تزواکسی کولانت بعتوان ماه انتخابی عمل اکرقه ورنونق باکتریهای گرم مثبت و بعضی کلی فرمها را مهار می کند. ** مانیتول موجود درمحیط رشد سالمونلا وشیگلاهای متابولیزه کننده مانیتول را افزایش می دهد. ** بافر فسفات ازکاهش 0۳ واسیدی شدن آن جلوگیری می کند 

صفحه 18:
محیط آبگوشت مغذی بعد از کشت نمونه درآبگوشت مغذی نمونه را از روی این محیط برروی محیط های افتراقی یا انتخابی کشت دهید. ا بعد از ‎.GN Gels 6 LP‏ لا 0۳01 5۴ بعد از 49 ساعتو بعد از آن‌هرچه سریعتر يليت ها را سپس در 6 تا 072 درجه انکوبه کنید 

صفحه 19:
محيط افتراقی باعث تمایز باکتریهای لاکتوز منفی از لاکتوزمثبت می شود .وجلوی رشد باکتریهای گرم مثبت رانیز می گیرد الف) مک کانکی آگار ‎EMB)‏ تسرد اف COB 

صفحه 20:
محیط های فوق العاده انتخابی ‎v‏ این محیطها بطور روتین استفاده نمی شود. ‏كران قيمت هستند. ‏”درموارد بررسى 010651621 توصيه مى شود. ‏۷برای سالمونلا مناسب هستند ولى براى شيكلا مناسب نيستند. الف) بريليانت كرين ‏براى سالمونلا بجز سالمونلا تيفى وسالمونلا ياراتيفى ‏ب) بيسموت سولفيت ‏برای سالموتلا مخصوصا" تیفی 

صفحه 21:
محیط های نسبتا" انتخابی * این محیط ها باعث جلوگیری از رشد اکثر اعضاء خانواده آنتروباکتریاسه می شود. » به سالمونلا وشیگلا اجازه رشد می دهند. تولید راا5 را معین می کند. ۶ الف) (۲۴) 29۲ 6۳۲6۲۱ ۲۱۵۱۲۵66 Xylose -lysine-desoxycholate(XLD) (© Salmonella-Shigella agar (SS) (¢ د) دزاکسی کلات ooo 

صفحه 22:
luxe XLD * سدیم دزوکسی کولات باعث مهار بعضی باکتریهای فلورطبیعی روده 0۳۲ ‏فنل رد معرف‎ ٠ » فلور طبیعی گزیلوز سوكروز ولاكتوز را تخمير [] كلنى هاى زرد (ناشی از اسید) ۰ شیگلا »|پرویدنسیا وبعضی گونه های پروتئوس این قندها را تخمیر نمی کنندا] کلنی های قرمز(ناشی از قلیا) * سالمونلا وادوارد سیلا گزیلوز را تخمیر می کند ولی سوکروز یا لاکتوز را تخمیر نمی کندو ایجاد اسید می کند ولی چون لیزین موجود درمحیط را دکربوکسیله می کند وقلیاایجاد می کند به اسید ایجاد شده برتری می یابد وکلنی های قرمز(ناشی ازفلیا) ایجاد می کند وراا5 ‎slay) Gel ak as‏ کلتین های با مرکزسیاه می شود 

صفحه 23:
)مه یاوق (0/0) جوا امروحویك ‎Xpbose beter‏ 

صفحه 24:
A B lactose-fermenting .A. Surface of MacConkey agar with 24-hour growth of red colonies . The diffuse red color in the agar surrounding the colonies is produced » by organisms that avidly ferment lactose . producing large quantites of mixed acids and cause precipitation of the bile salts in the medium surrounding the col- or. (e.g. Escherichia coli ) lactose-fermenting colonies .B. Surface of MacConkey agar 

صفحه 25:
CandD. Surface of EMB agar plates illustrating the green sheen produce by av- id lactose (or sucrose) fermenting members of the Enterobacteriaceae . Most st- and since E. coli rains of E. coli produce colonies with this appearance of EMB agar the appearance of , is among the most frequent isolates from clinical specimens « such colonies can often serve as presumptive identification of E. coli . however characterictice other than the nrodiiction of 3 areen cheen nn ۵ 

صفحه 26:
۰ بعد ازکشت پلیت ها را 26 06 ساعت دردمای 06 درجه انکوبه می کنیم * خوالنن بلیت ها ۰ الف) کلنی های زرد ] گونه های اشرشیاکلی »انتروباکتر» کلبسیلا و سراشیاء سیتروباکتر دیورسوس و یرسینیا آنتروکولیتکا * ب) كلنى زرد با مرکز سیا] سیتروباکتر فروندی 4 پروتنوس ولگاریس * ج) کلنی های قرمز شیگلا » پروید نیسیا » سالمونلا ‎cota SH,‏ * د) کلنی قرمز با مرکز سیاه[] گونه های سالمونلا و ادوارد سيلا ” 

صفحه 27:
نکات قابل توجه در مورد ساخت محیط ‎٠‏ محیط ۱0« باید قرمز روشن باشد. اگر محیط موقع ساختن زیاد حرارت ببیند» سبب رسوب سدیم دزاکسی کولات می گردد که باعث می شود کلنی ها کوچکت تبره تر ظاهر شوند. 

صفحه 28:
محیطهای شناسائی ۰ 5۱ ۰ یک محیط افتراقی برای باکتریها ی گرم منفی براساس تخمیرقندها گلوکزءلاکتوز و سوکروز وتولید «ل|5 است که باکتریها را به دو گروه لاکتوزمثبت ومنفی تقسیم می کند._ 

صفحه 29:
- با استفاده از یک آنس از مرکز یک کلنی ایزوله برداشت کنید. * نوک آنس را درداخل قسمت پائین لوله وارد کنید و بعد در سطح شیب دار کشت دهید. ۶ درب لوله را محکم نبندید. ۰ در 6 درجه بمدت 9تا ۴صاعت انکوبه کنیا مه دلجملا ‘ge lope for san) fer noc a be 

صفحه 30:
le J) cre TSI CK, Oe KO, OL C/O O+ P/OSCL, KO, OV.+ 5 ‏تا‎ 1 1 Control Red Slant Red Slant Yellow Slant Yellow Slant Red Slant Red Butt Yellow Butt Yellow Butt Yellow Butt Yellow Butt Nike Camm x er + Gas +Gas +G: NoH2S NoH2S ‏كنيد‎ 

صفحه 31:


صفحه 32:
آوره ۰ توانائی ارگانیسم به هیدرولیز اوره و تبدیل آن به آمونیاک و 2 باعث تغییر معرف فتل رید از رنگ نارنجی به رنگ صورتی می گردد روش کار: | یک کلنی کامل از باکتری یا مقداری از, کشت خالص را روی محیط مایع کشت دهید ودر دمای 99 درجه انکوبه کنید _ 

صفحه 33:
اندول اندول یکی از مواد حاصل از متابولیسم تریپتوفان است که در اثر ترکیب با آلدنید ها (معرف کواکس) رنگ ایجاد می کند. 1 روش کار % یک کلنی ایزوله درمحیط آبگوشت تریپتوفان (اندول) کشت دهید وبمدت 9-6 ساعت در 07 درجه انکوبه کنید. قطره معرف کواکس را به آن اضافه کنید. ۷" رنگ صورتی درسطح محیط نشانه مثبت بودن ۷ و رنگ زرد نشانه منفی بودن تست است. 

صفحه 34:
آزمايش متيل رد ميزان كاهش 11م بوسيله يك اركانيسم تخميركننده كلوكز ريا مشخص مى كند.اكركاهش 11م به © برسد باعث مى شود كه معرفه به رنگ قرمز درآید ولی اگر 8/5 0۳۱ باشد به رنگ زرد درمی آید. 

صفحه 35:
روش کار الف) در 0 میلی لیتر محیط ۱۸8-۷ کشت دهید وبمدت ‎Gels PO‏ در 00 درجه سانتی گراد انکوبه کنید. ب) 5/0 میلی لیتر آن را به لوله باریک منتقل کنید. ج) 6 قطره از معرف متیل رد را به آن اضافه کنید * .واکنش مثبت با رنگ قرمز ب * واکنش منفی با رنگ زرد مایل به نارنجی | | 

صفحه 36:
آزمون ۷۲ * دراثرمتابولیزه کردن گلوکزمتابولیتی به نام استوئین بوجود مى آيد كه درخضوراكسين و01 تؤليد كميلكين قرمزرنكى را مى كند لا .حساسيت تست با افزودن 0- نفتول قبل از 0۵۷ افزایش مى يابد 

صفحه 37:
روش کار > باکتری را در میلی لیترمحیط ۸۸8-۷ کشت دهید و درحرارت 00 درجه سانتی گراد بمدت 636 ساعت لنکوبه کنید > 2/5 میلی نیترازآن را به لوله دیگر انتقال دهید. سپس 0 قطره ازمعرف ۸ (0- نفتول) و 6 قطره از معرف (4096 80101۷ به آن بیفزائید. * بمدت 60 تا 16 دقیقه انکوبه کنید. 1 واکنش مثبت تشکیل رنگ صورتی مایل به قرمز 

صفحه 38:
il is بعضی باکتریها قادرند که سبترات را بعنوان تنها منبع کربن و نمك ‎cle‏ آمونیوم را بعنوان تنها منبع نیتروژن استفاده کنند که باعث ایجاد محیط قلیایی وتغییر رنگ معرف (بريم تیمول بلو) از سبز به آبی می گردد. 

صفحه 39:
تست سیمون سیترات ‎Otros virde agar stat (6/0)‏ - مش‌تاف و6 ‎Orne Brod‏ مسر ‎Poste Rest |‏ ‎Oses virrote os‏ ‎sie ‏سح ماو‎ Gtreck stoot oad stab but, ‏هه(‎ up 80 das. 

صفحه 40:
_: روش کار 1 باکتری را در روی سطح شیب دار محیط کشت دهید ودرب لوله را محکم نبندید. لا لوله را در 20 درجه سانتی گراد بمدا 1 00 ساعت تا 6 روز انکوبه کنید. 

صفحه 41:
آزمون حرکت . سويه های حرکت دار درسرتاسر محیط رشد خواهند داشت درحالیکه سویه های بی حرکت فقط درمسیر کشت آنس رشد می کند. ريبوش كار ‎ar‏ مهن 1۳0 << a 1 9 estan ‏تاوکتاآلش‎ 0 بطور عمودی کشت دهید و انکوبه کنید. 

صفحه 42:


صفحه 43:
62 دكربوكسيلاز ليزين ‎٠‏ توليد آنزيم دكربوكسيلاز با اثر برروى قسمت كربوكسى اسيدامينه ليزين توليد ماده اى به نام كاداورين 6 مى كنند.اين واكنش بى هوازى است بنابراين بايد روى محيط با يارافين مايع يوشانده شود. بعنوان شاهد ازمحيط يايه فاقد اسيدآمينه استفاده مى شود. ‏۰ اگر ارگانیسم درمحیط رشد کند»‌هم محيط كنترل (يايه) وهم محیط حاوی اسیدأمینه بعلت ت د تخمیر مقادیر کم گلوکر ز و تولید سید به رینگ زرد درمی آین. اک اسیدآمینه دکربوکسیله شود تولید شرایط قلیایی می کند ورنگ محیط را به رنگ اولیه (ار غوانی ) برمی گرداند 

صفحه 44:
روش کار © _بکتری را ابتدا درمحیط پایه وسپس درمحیط حاوی اسید آمینه کشت دهید. روی محیط را با پارافین مایع استریل ۱7۳۳۳ 1۱5 9 © در 00 درجه سانتی گراد انکوبه کنید. | واکتش مثبت درعرض ۱1 روز رخ میدهل9 

صفحه 45:
LIA left to right: K/K (+decarboxylation, without ۲۱25 ( , K/A H2S (- decarboxylation with H2S ), K/K H2S (+decarboxylation with H2S ),R/Y (- decarboxylation, + deamination, without H2S ) 

صفحه 46:
فنیل آلانین دآمیناز * جهت تمایز باکتری پروتنوس وپرویدنسیا از سایر التوباكترياسه ها ازانست ييوشيميايى فنيل'الانين. داميقا استفاده میگردد. » بعد از کشت باکتری برروی محیط فنیل آلانین وانکوباسیون به مدت “06 ساعته در *-6صرجه . ‎٠‏ بااستفاده از محلول كلرورفييىك07)ارصد بر روى كشت مذکور » در صورت ایجاد رنگ سبز. رنگ » نتیجه آزمایش فنیل آلانین مثبت بودن باکتری را مشخص می نماید. 

صفحه 47:
000 مومه روه 

صفحه 48:
* Positive: dark green color on slant > phenlyalanine metabolized to phenylpyruvic acid * Negative: no color change * Interpret immediately 3 ‏مه‎ eo 

صفحه 49:
مالونات ot ‏نات‎ ۰ ۰ اين محيط برای آزمایش مصرف سدیم مالونات بوسیله اعضای خانواده آنتروباکتریاسه مورد استفاده قرار می گیرد * .آزمایش مثبت بوسیله تغییر رنگ محیط ان سبز به آبی نیلی می گردد باکتری را درمحیط کشت دهید. # در 00 درجه سانتی گراد انکوبه کنید 

صفحه 50:
۰ جداسازي و تشخیص آزمایشگاهی 

صفحه 51:
بررسی ماکروسکوپی نمونه هاي مدفوع باید از نظر ظاهر بررسی گردند و از نظر وجود لخته خون؛ موکوس و قوام مدفوع مشاهدات ثبت شوند. بررسی میکروسکوپی با تهیه اسمیر نازك از مدفوع و رنگ آميزي گرم می توان وجود گلبولهاي سفیدء همچنین غالب بودن یک مورفولوژي باکتریایی» وجود سلولهاي مخمر یا عدم وجود باسيلهاي گرم منفی روده اي را در مدفوع تعیین نمود. 

صفحه 52:
انتخاب محیط های کشت ۰ محيطهاي پلیتی افتراقی و انتخابی: ‎٠‏ براي كشت روتين مدفوع؛ جهت جداسازي باكتريهاي بيماريزاي روده اي باید از محیط هاي افتراقی و انتخابی زیر استفاده شود: ‎٠‏ محيط؛ 803 ۱3660۳۱6۷ که همه باسيلهاي گرم منفی روده اي بتوانند روي آن رشد کنند ‎2۲۱0 ۷۱۵5۵-1۷5 ‏محيط افتراقی- انتخابی06‎ ٠ Decarboxylate) ‎Hektoen Enteric Agarh= 5) -‏ هم میتوان به جای ‎XLD‏ ‏استفاده نمود, 

صفحه 53:
تلقیح محیط هاي کشت و انکوباسیون تلقیح محیط هاي پلیتی: درصورتی که نمونه سوآب رکتال باشده سوآب را روي سطح پلیت به قطر حدود2/5 سانتیمتر مى چرخانيم. سپس سطح پلیت را با لوب استريل از منطقه تلقيح در تمامى بليت»| 2 ©5161 کرده به طوري که کلنی هاي جدا از هم بدست آید.» پلیت ها را به مدت *06 ساعت در 6 -60درجه انکوبه می کنیم در صورت عدم رشد یا رشد ضعیف انکوباسیون را تا 66 ساعت ادامه می براي هر بیمار استفاده از یک پلیت با قطر 63-160 برلی هر بیمار الزامیست و نباید از پلیت سانتی متر استفاده نموده زیرا احتمال جداسازي کاهش می یابد. در مواردي که نمونه مدفوع قوام دلر است توصیه می شود کشت از سوسپانسیون مدفوع در سرم فيزيولوژي انجام گردد. 

صفحه 54:
تلقیح محیط مایع غنی کننده * نمونه را با سواب ‎oy Gl: SF Gb Gl: GN bs dale‏ سواب را دور می اندازیم. * معمولا برای ‎SIGN‏ 2صاعت انکوباسیون و محیط 5۳ براث 12-8 ساعت انکوباسیون توصیه ميشود. ‎٠»‏ بعد از این زمان از سطح محیط براث بدون مخلوط کردن یک لوپ برداشته» روي يليت ‎MAC‏ و 2۱0 کشت می دهیم به طوري که كلنى هاي جدا از هم بدست آید. 

صفحه 55:
گر مخانه گذاری * پلیت ها را به صورت وارونه در ۲ + ۳۶ درجه سلسیوس به مدت24- ‎OQ‏ ساعت در گرم خانه قرار دهید 

صفحه 56:
‎٠‏ محیط 55 براي جداسازي سالمونلا به کار می رود اما باعث مهار رشد برخی از گونه هاي شیگلا می شود. ‎٠‏ محيط(] اا چون میزان مهار کنندگی كمتري روي رشد کلی فرمها دارد. براي جداسازي شیگلا مناسب تر )5 ‎HE‏ ‏است 

صفحه 57:
محیط های مایع غنی کننده استفاده از این محیط ها به منظور بازیافت مقادیر کم سالمونلا یا شیگلا در افراد بدون علامت ناقل » و بویژه در میان کارکنان داراي مشاغل حساس(مانند افراد شاغل در مهدهاي کودك؛ آشپزخانه ها و..) الزامیست. رايجترين اين محیط هالاات) براث و 5 براث میباشند. 5ب راشب اي‌جدلسازي‌ساامونلامناسباست ولیبرليبرخیاز گونه هي‌شیگلا دارلهاثر مهاركنندكىئيودى لذا بهتر لستدر موارد مشكوك به جدا سازی‌شیگلا از لین‌محیط لستفادم نشود. هنكام ساخت محيط 5۳ براث حرارت دادن بیش از اندازه باعث ایجاد نراتی در محیط می شود که در این صورت نمی توان از آن استفاده کرد. 

صفحه 58:
بررسی اولیه وجستجوی محیطهای کشت مدفوع برای سالموئلا و شیگلا ‎٠»‏ لاکتوز بعنوان اولین کلید شناسانی سالمونلا وشیگلا است. ۰ _کلنی های لاکتوز مثبت محیط های ] 55 ,2 قرمز تا صورتی محیط 1 201.0 زردرنگ ‎٠‏ کلنی های لاکتوزمنفی و یا تخمیرکننده های تاخیری لاکتوز, ‎(Late fermenters)‏ سالمونلا یا شیگلا و پروتئوس ‎Jha. oes‏ 95,ع3/تولید کلنی های بی رنگ ‎٠‏ روی محیط 0 ۱]0کلنی های قرمزرنگ 

صفحه 59:
توجة fe ‏كر كاذ شیگلا‎ ‏دی حي‎ : ‏ى فوق مذ ۱ تس‎ oes تسیب زوس ‎Su‏ ۱ ۲ دسد ء نكوبه كذ 1 كنيد 

صفحه 60:
سى يليت ها و جداسازی کلنی ها ‎Say ead plage aged Sale ۰‏ لاهن لني ها اشتباه کنند ‎٠‏ بنابراين توصیه می شود 6 کلنی مشخصه ازهرتیپ کلنی سالمونلا یا شیگلا را برداشت کرده و با تس برروی عمق و ‎TS] chu‏ کشت داده شود. ۶ از همان کلنی در محیط اوره کشت دهید 

صفحه 61:
151 بررسى وخواندن واكنش مالم * این ارگانیسم ها سالمونلا یا شیگلا نیستند. 

صفحه 62:
° A/A,SH2+ يتروباكتر؛ يروت سیتروباکتر» پروتنو: آريز س ولگاریس » آریزونا ۰ 

صفحه 63:
پروتئوس[] اورم مثبت ‏ *5۳2 , ۲/۸ ۰ 

صفحه 64:
تست اوره در مورد پروتئوس مثبت است 

صفحه 65:


صفحه 66:
۰ 5۲۱2 , ۲۸+ اوره منفی: احتمالا سالمونلا 

صفحه 67:
انجام آزمایشات. بیوشیمیایی (+)MR (-)VP Most salmonella are citrate positive, except S. typhi, (+ ‏حر کت(‎ S.paratyphi A, S. sendi, S. pullorum, S. gallinaurm and Citrate(+) (-) Malonate (-)Indole (+) LDC few other types. 

صفحه 68:
۸ (بدون‌گاز و (5۳/2 اوره منفی [ سالمونلا (تیفی)» شيكلاء ۸ (بدون كاز و ‎(SH2‏ ‏اوره مثبت باشدا] يروتئوس و يرويدنسيا 

صفحه 69:
سرولوژی سرولوژی] انتی سرم پلی والان ] مونووالان 0 از کلنی موجود برروی ا5آبرای اینکار استفاده کنید * .سویه ای که با آنتی سرم پلی والان] آگلوتیناسیون آنتی سرم مونووالان/0 آگلوتیناسیون > بعنوان سالمونلا گزارش کنید. * اگر با آنتی سرم پلی والان آگلوتینینه نشد ولی ازنظر بیوشیمیایی به سالمونلا تیفی می خورد باید با آنتی سرم | ۷ سرولوژی شود ۳ 

صفحه 70:
توصیه هایی دررابطه با بررسی اولیه کشت مدفوع تشخیص نهایی سالمونلا و شیگلا تنها براساس تست های بیوشیمیایی یا تنها با سرولوژی نمی تواند صورت بگیرد. اگر تشخیص بیوشیمیایی وسرولوژی با آنتی سرم پلی والان انجام گیرد وسالمونلا یا شيكلا بودن سويه تائيد شود. تعیین گونه وسروتیپ با آنتی سرمها صوررت گیرد. اگر بعضی سویه ها با آنتی سرم پلی والان آگلوتینه شود ولی ازنظر بیو شیمیایی نتایج گیج کننده بدهند.اين سویه ممکن است : یک سویه نادر سالمونلا باشد. آریزونا سیتروباکتر باشد. این سویه ها باید به آزمایشگاه مرجع فرستاده شود. اگر یک سویه ازنظر سالمونلا باشد و با آنتی سرم پلی والان آگلوتینه نشود. آزمایشات بیوشیمیا ى بايد صورت گیرد. اگر همچنان سالمونلا باشد. سویه باید به آزمایشگاه مرجع فرستاده شود. 

صفحه 71:


صفحه 72:
pale} va 

صفحه 73:
* کلنی هاي شیگلا بر روي محیط مک کانکی کلنیهای بیرنگ یا همرنگ محیط ۶ روي محیط]| سبز یا آبی سبز (سبزتر از کلنی سالمونلا) بدون مركز سياه ‎٠‏ روي محيط (] إلا قرمز يا صورتى بدون مركز سياه مى باشند 

صفحه 74:


صفحه 75:


صفحه 76:
* کلنی هاي مشکوك به شیگلا را می توان روي محیط |۲5 یا ۸ از نظر بیوشیمیایی و تعیین سروگروه» غربالگري نمود. ۰ اگر کلنی کاملاً ایزوله روي محیط وجود ندارد» می توانید از کلنی مشکوك برداشته روي پلیت ديگري |5۲۳6 نموده تا کلنی هاي خالص بدست آید. * در طی انکوباسیون محیط|5] باید در لوله يا پنبه آن براي تهویه شل باشد» در غیر اینصورت نتایج گمراه کننده اي بدست می آید. 

صفحه 77:
۰ سویه هاي شیگلا بر روي اين دو محیط منظره۸۱۲/۸:[0 بدون تولید گاز و۲!25 ایجاد میکنند. * سویه هاي شیگلا سونئی لاکتوز را در انکوباسیون طولانی تخمیر می کنند ۰ قبل از آزمایشات تعبین سروگروه از تستهاي ب ایی حرکت» اوره و لایزین دکربوکسیلاز که براي شیگلاها منفی هستناستفادهکنید.باكتري هایی که با تستهاي فوق واكنشهاي مشکوگ به شیگلا را ایجاد می کننه بید با تستهاي بیوشیمیایی تشخیص داده شود و سپس با آنتی سرم تعیین سروگروه شوند 

صفحه 78:
BIOCHEMICAL TEST S._ DYSENTERIAE S. FLEXNERI 5. BOYDIL S.SONNEL A B 8 ام ان ‎Sucrose‏ ‎Xylose‏ Indole produetion +. 9% or more siain psiives ~, 9% or more strains nextive;D, diferent strains posivemepative. 

صفحه 79:
‘ONPG +) جدول تست های افتراقی تشخیصی ۲.601 اتوليد كاز كلوكز ‎٠]‏ تخمير قن لاكتوز سول + ۴ oat E.col E.coli Inactive E.Vulneris c.ONPG 45% 

صفحه 80:
۰ شیگلاها بر روي ۸۵ , ا5آبه طور مشخص واکنش۸۸۱1/۸[0 بدون تولید گاز و ۲۱25 تولید میکنند. اما بعضی از سویه هاي شیگلا فلكسنري سروتايب©وسويه هاي نادري از شيكلا بوئيدي در اين دو محيط كاز توليد مى ۶ شیگلاها لاکتوز را تخمیر نمی کنند. اما شیگلا سوننی لاکتوز را در انکوباسیون طرلانی ‎PO II Gly)‏ ساعت) تخمیر کرده و اسید تولید می کنند. + شیگلا سونئی و 46 96 از شیگلا ديسانتري ها( سروتایپ ‏ )و 96 از ‎gag WS‏ ها(سروتایپ6) 00!۳6منبتند. سایر گونه هاي شیگلا 6 منفی میباشند. 

صفحه 81:
تعیین سروگروه انجام آزمایش با آنتی سرم براي تشخیص شیگلاها ضروري است. جنس شیگلا داراي 6۳ سروگروه یا زیر گروه می باشد: S.dysenteriae (Serogroup A), S. flexneri (Serogroup B), S. boydii (Serogroup C), S. sonnei (Serogroup D) سروگروه یا زیرگروه۸ دارای 16 سرو تایپ» هداراي © سروتایپ» 6 داراي ‎dO‏ سروتایپ و ه] فقط داراي یک سرو تایپ 

صفحه 82:
تعیین سروگروه به وسیله آگلوتیناسیون بر روي لام با آنتی سرمهاي سوماتیک) شامل ‎Poly C ,poly B ,poly A,:‏ 0 00۱۷ انجام می شود. از آنتی سرمهاي مونووالان براي تشخیص اختصاصی سروتایپ ها استفاده میشود. تعیین سروتایپ در آزمایشگاه هاي مرجع امکان پذیر است سروتایپ ) شیگلا ديسانتري همه گیریهای طولانی و شدید با مرگ و میر فراوان ایجاد می کند و شناسایی آن از اهمیت خاصی برخوردار است. 

صفحه 83:
تمام سویه هایی که از نظر بیوشیمیایی به عنوان شیگلا تشخیص داده می شوند اما با آزمایش با آنتی سرم منفی هستند.باید براي تشخیص قطعی به آزمایشگاه مرک بهداشت انتان و از آنجا به آژبایشگاه هعکار دانشکده بهداشث دانشگاه تهران پا استیتو پاستوز ازمال شوند, همه آنتی سرمها باید قبل از استفاده جهت اطمینان از واکنش هاي مورد انتظار مورد آزمون کنترل کیفی قرار گيرند. براي کنترل کیفی هر آنتی سرم باید از سوشهاي کنترل مثبت و منفی استفاده کرد. نتایج تمام واکنشها باید ثبت شود.. 

صفحه 84:


صفحه 85:
تشخیص آزمايشگاهي سالمونلا 

صفحه 86:
:مشخصات سالمونلا پاسیل گرم منفی بی هوازی اختیاری ,نا ی هه مأصعحواظ)) متحرک ‎serovar pullorud)‏ نویه لصحمولوق) تولید اسید و گاز از کربوهیدرات ها اکسیداز و کاتالاز منفی تولید هیدروژن سولفاید (دکربوکسیلاسیون لیزین 

صفحه 87:
خصوصیات جنس سالموئلا دو گونه در جنس سالموثلا وجود دارد : Salmonella enterica (6 sub species): Sal.enterica sub enterica _/ Sal enteriaca sb salamae _.!. Sal. enterica sub arizonae ./!/ Sal. enterica sub diarizonae ./Y Sal. enterrica sub houtenae .Y Sal.enterica sub indica /Y! Salmonela bongori (sub spv) 

صفحه 88:
Table 8.2. Species within of the Salmonella genus* Salmonella species and subspecies No. of serovars S. enterica subsp. enterica (I) 1,454 S. enterica subsp. salamae (II) 489 S. enterica subsp. arizonae (Ila) 94 S. enterica subsp. diarizonae (IIb) 324 S. enterica subsp. houtenae (IV) 70 S. enterica subsp. indica (V1) 12 5. bongori (V) 20 TOTAL 2,463 * From references 37 and 219. 

صفحه 89:
۳3 * کلنی سویه هاي سالمونلا بر ريوي محیطت)۱/۸ بیرنگ یا همرنگ محیط ع۳آبی یا سبز- آبی با مرکز سیاه و210 قرمز با مرکزسیاه میباشند. 

صفحه 90:


صفحه 91:
Shigella on HE agar 

صفحه 92:


صفحه 93:
Salmonella on XLD agar 

صفحه 94:
Salmonella (cont'd) * Salmonella on MacConkey Bismuth julphite ‏ع رماوا‎ lysine Hektoon Biimuth tulphite — Xylore lysine Hebtoen ‏و بيه‎ 7 om) (Bs) deroxycholate (HE) cap) 

صفحه 95:
ی #كلنى هاي مشكوك به سالمونلارا مى توان روي محيط |75 يا 1۱۸ از نظر بیوشیمیایی و تعیین سروگروه» غربالگري نمود. اگر کلنی کاملاً ایزوله روي محیط وجود ندارد» می توانید از کلنی مشکوك برداشته روي يليت ديكري 5762 نموده تا کلنی هاي خالص بدست آید. Alk/Acid , 6635+ , ‏اکثر سویه هاي سالمونلا بر روي اين دو محیط واکتش‎ ٩ ‏ایجاد مى کنند.‎ +۲25 ‎Salmonella Typhi®‏ ,| ق2۹۵۵ بدون‌تولید گاز و با مقدار ‎H2Sp-S‏ درخط تلقيح آنسليجاد ميكنن ‏#سويه هاي سالمونلا به استثناي1[/2/7/4 23/3 53/770/76//3 لايزين را دكربوكسيله كرده و اغلب5 ۲/2 تولید میکنند. 

صفحه 96:
7 

صفحه 97:
TABLE 4 Biochemical rests useful in differentiating Salmonella from other members of the family Enterobacteiaceae and identifying Salmonella serotypes Typhi and Paratyphi A* Nontyphoidal Salmonella Salmonella serotype Salmonella serotype subsp. I reaction, Typhi reaction Paratyphi A reaction 5 KiAg KIA ‏عدم‎ ‎HS (TS!) Indole Citrate (Simmons) Urea Lysine decarboxylase Asginine dihydrolase (Ornithine decarboxylase Motility سم Malonare LCF) Tartate (d-earsate™) Growth i KCN 5 Glucose Lactose Salicin Duleitol Sorbitol ONPG (o-ni Galacturonate Test perma 2 چا جچچبجوو ۳ حا اجججاا 000000 rophenyl-#-0-galactopyrancstde) " Reactions afer cation at 37°C. K, alain sng A aid g as +, 908 or more postive within I or 2 day (+). posve tection ae 3or more das ~ rection (80% ot more) in T days: dy fleet reactions +, (Fy —P Adapted fom Eine (37). See Table for reactions of the other subse Sodan potas tare (37), 

صفحه 98:
* سویه هایی که با تست غربالگري فوق واكنشهاي مشخص سالمونلا را ایجاد می کنند» باید با مجموعه اي از نستهاي بیوشیمیایی تشخیص داده شوند و با آنتی سرمهاي پلی0 ۰ گروه 0ا,) ,۸,5 مورد آزمون آنتی سرمی قرار گيرند. ‎٠‏ این سویه ها باید براي تایید به آزمایشگاه مرکز بهداشت استان و © آن به آزمایشگاه همکار .دانشکده بهداشت دانشگاه تهران ياانستيتوياستور ‎٠‏ ارسال شوند. 

صفحه 99:
مشکلات تشخیصی سالمونلا (۸-۳) 0 عدم آ گلوتیناسیون با آنتی سرم وجود۷1 وجود كلنى ‎Rough‏ ‏عدم تشخيص سالمونلا پاراتایفی ۸ 

صفحه 100:
تعیین سروگروه استفاده از آنتی سرم در تشخیص سالمونلاها ضروري است. تعیین سروگروه به وسیله آگلوتیناسیون بر روي لام با آنتی سرمهاي 0 سوماتيك انجام مى شود. آنتى سرمهاي يلى0 مورد استفاده در تعيين سروكروه سالمونلا شامل آنتى سرمهاي كروهع تا ميباشدء زيرا حدود 060 / از سویه هاي سالمونلا متعلق به اين كروههاست. براي مثال سالمونلاتايفى و انتريتيديس در ‎Dog Ss‏ © كلراسوئيس و نيويورت در سروكروه 0 » تايفى موريوم در سروكروه 8 قرار دارند. 

صفحه 101:
ازآنجاییکه آنتی سرم مورد استفاده در آزمايشگاههاي بهداشتی فقط آنتی سرمهاي پلی0 است» پس از تعیین اولیه سروگروه » سویه سالمونلا براي مراحل سروتایپینگ که نیاز به آنتی سرمهاي ۷ , ۲۱ اشدبه آزمایشگاه همکار دانشکده بهداشت دانشگاه تهران یا انستیتو پاستور ارسال میگردد. در مواجهه با موارد ذيل سویه باکتریایی مورد آزمون باید به آزمایشگاه مرکز بهداشت استان ارسال شود: اگر سویه مورد آزمون از نظر واكنشهاي بیو شیمیایی به طور مشخص شبیه سالمونلاها هستند» اما با آنتی سرمهاي سالمونلا آگلوتینه نمی دهند. اگر سویه مورد آزمون از نظر واكنشهاي بیوشیمیایی همه مشخصه هاي سالمونلا را ندارد» اما با آنتى ‎glen oe‏ 0۰سامونلا آلوینهاجادمیکند 

صفحه 102:
با تشكر از توجه شما