کشت بافت هابلویید

کشت بافت هابلویید

اسلاید 1: تولید گیاهان هاپلویید از طریق کشت بساک و دانه گرده 1

اسلاید 2: گیاهان هاپلویید:گیاهانی هستند که دارای نیمی از کروموزومهای گیاه دیپلویید می باشند. اهميت استفاده از گياهان هاپلوئيد در برنامه هاي بهنژادي از مد ت ها پيش براي دانشمندان مسلم گرديده است و يكي از موضوعات مهم تحقيقاتي در اين زمينه ،توليد لاين هاي هموزيگوس جهت توليد گياهان هيبريد در گونه هاي خودناسازگار مي باشد. با توليد لاين هاي كاملاً هموزيگوت از طریق کشت اندام های زایشی، سه تا پنج سال در زمان برنامه هاي اصلاحي وابسته به صفت مورد بررسي صرفه جويي مي شود2

اسلاید 3: آندروژنیاز گامتوفیت نر یک گیاه نهاندانه، یعنی میکروسپور(گرده نابالغ) برای تولید گیاه هاپلویید استفاده می شود.اساس این روش، متوقف کردن رشد و نمو سلول دانه گرده ای است که در جهت تبدیل شدن به یک گامت نر گام بر می داردیعنی رشد و نمو یک سلول جنسی و هدایت مراحل نمو آن به طور اجباری به سوی تولید یک گیاه کامل است.سلول های مادری دانه گرده با انجام تقسیم میوز، تتراد های دانه گرده را ایجاد می کنند و پس از هضم دیواره تتراد، 4 دانه گرده یا میکروسپور آزاد می شود.میکروسورهای تازه رها شده، تک هسته ای و دارای سیتوپلاسم غلیظ و متراکم بوده و هسته آن در مرکزشان می باشد پس از تولید واکوئل در آنها ، هسته به سمت دیواره کنار زده می شود. در اولین تقسیم میتوزی دانه گرده، هسته میکروسپور، یک هسته رویشی بزرگ و یک هسته زایشی کوچک به وجود می آورد.3

اسلاید 4: کشت بساکتکنیک کشت بساک، روشی نسبتا اسان، سریع و کارآیی است. جوانه های گل که محتوی بساک های نابالغ بوده و میکروسپورها درون کیسه های بساک محصورند، در مرحله مناسبی از نمو دانه گرده از گیاه جدا شده و پس از ضدعفونی سطحی، با آب مقطر استریل می شوند.4

اسلاید 5: 5

اسلاید 6: کشت بساکبر اساس تحقیقات انجام شده، جوانه های گل خیار به اندازه 0.8 تا 1.2 سانتی متر حاوی میکروسپوری است که در اواسط یا انتهای مراحل تک هسته ای می باشند. بمنظور تشخیص مرحله نموی میکروسپورها، از بساک های 3 الی 5 میلی متری و رنگ امیزی با استوکارمن استفاده می شود.جوانه های جمع آوری شده در ارلن حاوی 10 ml آب شهری نگه داری می کنیم.بشر را با فویل محکم پیچیده و در رطوبت بالا با دمای 4 درجه سانتیگراد برای 0 تا 10 روز نگه داری می شود و برای 1 روز در دمای 32 درجه، قبل از کشت بساک ها جوانه های گل را با لابولین 1% (detergent) و کاربندازیم 0.5% برای 10 دقیقه شست و شو داده و ضدعفونی سطحی با هیپوکلریت سدیم 5% برای 20 دقیقه انجام میشود.قدم اخر ضدعفونی با کلرید جیوهبساک ها را با اب تقطیر شده چندین بار شست و شو داده و در زیر هود لامینار بساک ها جدا و در محیط کشت جامد در کشت داده می شوند.6

اسلاید 7: 7