کشت بافت هابلویید

صفحه 1:
۱ ‏ل‎ INV EL Fro\ ES aN Oe 

صفحه 2:
گیاهان هاپلویید: گیاهانی هستند که درای نیمی از کرومو مهاى كياه ديبلوبيد مى باشند. اهمیت استفاده از گیاهان هاپلوئید در برنامه های بهنزادی از مد ت ها پیش یرای دانشمندان مسلم گردیده است و یکی از موضوعات مهم تحقیقاتی در این زمینه «تولید لاین های هموزیگوس جهت تولید گياهان هیبرید در گونه های خودناسازگار می باشد. با تولید لاین های کاملاً هموزیگوت از طریق کشت اندام های زایشی. سه تا پنج سال در زمان برنامه های اصلاحی وابسته به صفت مورد بررسی صرفه جویی می شود 

صفحه 3:
‎8١‏ از كامتوفيت نر يك كياه نهاندانه. يعنى ميكروسبورذكرده نابالغ) براى توليد كياه هابلوبيد استفاده ‎ ‏می شود. ‏شد و نمو سلول دانه گرده ای است که در جهت تبدیل شدن به ‎ ‏يعنى رشد و نمو يك سلول جنسى و هدایت مراحل نمو آن به طوراجباری به سوی تولید یک گیله ‎ ‏ری دانه گرده با انجام تقسیم میوز, تتراد های دانه گرده را ایجاد می کنند و پس از ‏۰۰ دائه گرده یا میکروسپور آزاد.می شود. ‎ ‎ ‎ ‏رها شده» تک هسته ای و دارای سیتوپلاسم غلیظ و ‎ ‏تولید واکوئل در آنها ؛ هسته به سمت دیواره کنار زده می ‎ ‏گرده. هسته میکروسپوره یک هسته رویشی بزرگ و یک هسته زایشی کوچک ‎ ‎ 

صفحه 4:
“ تکنیک کشت بساک. روشی نسبتا اسان. سریع و کارآیی است. جوانه های گل که محتوی بساک ها درون کیسه های بساک محصورند. در مرحله مناسبی از نمو دانه گرده از گیاه جدا شده و استریل مین شوند. 

صفحه 5:
Connective tissue Vascular bundle pldeemis Endotheciam ide lager Aco ۱ © مل 

صفحه 6:
بر اساس تحقیقات انجام شده. جوانه های گل خیار به اندازه ۰۸ تا ۱۲ سانتی متر حاوی میکروسپوری است که در اواسط ی التهای مراحل تک هسته ای می باشند. بمنظور تشخیص مرحله نموی میکروسپورهاء از بساک های ۳ الی ۵ میلی متری و رنگ امیزی با استوکارمن استفاده می شود. جوانه های جمع آوری شده در ارلن حاوی ۱۰ 1۷01 آب شهری نگه داری می کنیم. بشر را با فویل محکم پیچیده و در رطوبت بالا با دمای ۴ درجه سانتیگراد برای ۰ تا ۱۰ روز نگه داری می شود و برای ۱ روز در دمای ۳۲ درجه. قبل از کشت بساک ها جوانه های گل را با لابولین ۱ ‎Getergenty‏ 4 کاربندازيم ۰۸۵ ‎sly‏ ۱۰ دقيقه شست و شو داده و ضدعفونی سطحی با هیپوکلریت سدیم 1۵ برای ۲۰ دقیقه انجام ميشود. قدم اخر ضدعفولی با کلرید جیوه بساك ها را با اب تقطیر شده چندین بار شست و شو داده و در زیر هود لامینار بساک ها جدا و در محیط كشت جامد در کشت داده می شوند. 

صفحه 7:
> > > م محیط کشت پساک محیط کشت 85 با 1:۳۵ ساکارز و غلظتهای مختلف هورمونی برای کشت یساک استفاده گردید که حاوی هورمون هایی از قبیل: ‎BAP‏ ,۲۵2 ,لا ,2.4.0 ,۱88 ,شلا ,1۵۵ با غاظتهای متفر ۰۰۵ ۰۳۵۰۱ ۲۰۰۱۰ کالوس های چنین زاب جنین هایی که معمولامدور می باشتد به محیط کشت تمایززدایی حاوی نمک های 835 و وتامین ها با هورمون های ‎NAA‏ و 160 هرکدام به میزان ۰.۲۵ میکرومولار و .۰.۰۹ مولار متتقل گردیدند.برایادامه مسیر جنین های کوتیلدوتی درون محیط کشت حاوی ساکارز ‎1٩‏ مولار و ۵ میکرومولار ۵۱8/۸ كشت كرديدتد. برای بازایی جنین هاء جنین های بالغ درون محیط کشت پایه 35حاوی ۰.۰۹ مولار ساکارز کشت شدند. لازوبه ذکر است که ترکیبات ‎ube‏ به گرما شامل ۸۹8۸ ,۸ با فیلتر استریل شدند. محیط کشت ها در تاریکی در دمای ۲۴ درجه سانتی گراد و ۱۶ ساعت روشتابی انکوبه شدند. 

صفحه 8:
* بساک هلیی که پاسخ می دهند. بافت دیواره بساک هایه تدریج قهوه ای می شوند. و در مدت زمان ۳- ۸ هفته بساک ها به دلیل فشار وارده از طرف کالوس دانه گرده و یا گياهان هاپلویید در حال رشد. شکافته می شوند. وقتی که اندام به ارتفاع ۳- ۵ سانتی متر رسیدند.گیاهچه های منفرد یا ساقه های خارج شده از الوس را برداشته و به محیط جدیدی که امكان نمو بيشتر را فراهم می کند انتقال می دهند و ‎QUAL‏ ريشه دار به خاک استریل درون گلدان منتقل میکنند. ‎PP‏ کشت بساک مزیت هلیی بر کشت دلنه گرده دارد. از نظر علمی. لین روش بسیار سریع است. همچنین گاهی اوقات دیواره بساک بر رشد دانه گرده داخل خود اثر میگذارد و به عنوان فاکتوری مطلوب عمل می نماید. 

صفحه 9:


صفحه 10:
؟ ۲ ۲ ۲ ۲ ۲ روش های متعددی جهت تولیدگياهان هاپلوئید وبه دنبال آن گیاهان هاپلوئید مضاعف وجود دارد. یکی از لين روشهاء کشت ‎cal ye Sa‏ کشت نیکروسپوز:روشی است کهیه لحاظ رایای لن بز کست یساک: عوزد توچه قرار گرفته لست جر اين روش امکان بازیافت تعداد زیادی گیاهان هاپلوئید وجود دارد.یا وجود مشکلات تکنیکی که روش کشت میکروسپور روش در مقایسه با کشت بساک دارای مزایای زیر می باشد 26۷3 8۴0 ۳۱66۲۱9 کاهش باززایی گیاهان دیپلوئید به دلیل حذف بافت های دیپلوئید دیوارة بساک: حذف موارد ممائعت کننده رشد میکروسپورها که در کشت بساک ازدیواره بساک ترشح می شود . مشاهده دقیق تمام مراحل آندوژ نز در کشت میکروسپور. تماس مستقیم میکروسپورها با محیط کشت به منظور انتقا ل موادغذایی» تبدیل مستقیم اکثر میکروسپورها به جنین ۰ کاهش تولید شیمر به دلیل عدم تشکیل کالوس حاصل از بساک ها و میکروسپورها های ژنتیکی و انتقال ژن مواد مناسبی هنتند. ای مطالعات موتاسیون, دست ورز ی 

صفحه 11:
* رلیچ ترین روش کشت دانه كرده. بساك ها را از جولنه هاى گل استریل شده جدا تموده و در یک ایلن کوچک محتوی محیط کشت پایه ( مثلا ۵۰ بساک در 10۲0 محیط کشت) جمع می نمایند. لین بساک ها را با استفاده از یک میله شیشه ای خمیده بر روی جدار داخلی ارلن فشار می دهند. که در لثر این فشار ها دنه های گرده از بساک ها خارج می شوند.مواد زلئد بافت بساك با صاف كردن سوسبانسيون از خلال يك فيلتر نايلهنى كه قطر روزنه هاى آن اندكى از قطر دلنه گرده بیشتر است.(مثلا ۴۰ میکرون برای توتون و ۱۰۰ میکرون برای ذرت) از سوسيانسيون جدا مى شوند. از انجا كه دانه های گرده کوچک قدرت باززلیی ندارند بلید با استفاده از فیلتر کردن سوسپانسیون» تراکم میکروسپورهای بزرگتر خوب و با دوام را افزایش داد. سوسپانسیون نهایی با پیپت به پتری دیش های کوچک انتقال داده و برای جلوگیری از ارافیلم درز گیری شده و در انکوباتورقرر داده میشود میکروسپورهای پاسخ دهنده به تولید کالوس یا جنین پرداخته و با نتفال انها به محیط کشت مناسب می توان به نو بیشتر و گیاه کامل: رسیند 

صفحه 12:
بخش اول ازمايش: بعد از مراحل ضدعفونی و خارج كردن بساک ها . بساک ها را به مدت ۷ روز داخل محیط پیش تیمار در ناریکی در دمای ۳ درجه سانتیگراد قرار می دهیم بعد از ان بساک های متورم شده را در محیط ۱۷11-996 ساکاروز از فیلتر ها عبور داده و سانتریفوژ انجام می شود و میکروسپورهای خارج شده در در محیط پتری دیش قرار داده و در دمای ۲۸ درجه سانتیگراد با رطوبت 1۸۰ در تاریکی به مدت ۳ هفته قرار دهیم. استفاده از غلظتهای مختلف هورمونی و ذغال فعال: ‎Slat‏ در سطوح هورمنی 59۸ تایات معا در بیشتری روی رخ تورممیکروسپورداشثه و ۷ تثیر معنداری تا 

صفحه 13:
"able? ec of dierent conceuration of pare grow: regulars on the swollen a of 1۳ 07 (Comer!) miaogurs oie 3 1 0 a 05 5 2 02 02 0 ‎ms 4‏ افع بو و2 ‎a‏ 1 ‎ ‎and levels‏ دهد مت اهلد أ عق «صاهوت اه وید دج هدع بت ‎resol wicrospare for each fete an lee‏ لاه ددع هد مد و3 رز اب ‎He terangeof avaage ‏ز[ ز‎ 0- ‎ ‎Table ‎Hest of activated charcoal (AC) on emiryogensis of micospore culure in diferent serotypes of pepe. Genotype “retments Na. ol Esper dish 0 NING 073 ‏"طلم‎ ‎NUNS + AC 198 + 02a 0 NING 423 + ‏ها 29 > + دار‎ B ‏و‎ 150 + 03 NUNS + AC ‏تاه‎ + 04 0 ‏وا‎ 720 + 8b NING +AC 997 Ma » NING 133 + NIN + AC 320 £ 05a 6 NUNS 12 + 0066 NUNS + AC 027 ۵ ‎embryoiddike structures‏ > نک ‎Y Values represnt means 4 SEM. The means followed by she same letter do not‏ کاس ‎signfianty differ p = 0.05 avonding o pairwise‏ ‎ ‎ ‎ 

صفحه 14:


صفحه 15:
عوامل مختلفی در اندروژنز نقش دارند: وضعیت فیزیولوژیکی گیاه ولد موحله تم دنه گزده بيش تيمار بساك الف) پیش تمار سرما ب) تیمار گرما محیط کشت ج)بيش تيمار مواد شيميايى 

صفحه 16:
۲ ۲ ۲ ۲ ۲ ۲ ۲ ۲ ۲ ۲ 1# اهميت و موارد كاريرد هايلوئيد توليد لاين هاى هموزيكوس توليد هيبريد لقاه موتاسیون ایجاد تلوع ژنتیکی تولید گياهان منحصرا نر تحقیقات سینوزنتیکی اهمیت در آزاد سازی سریع واریته های جدید مقاومت به پیماری ها مقاومت به حشرات تحمل به تمک دال هاپلونید در ترسیم نقشه زنوم 

صفحه 17:
> > > > > توليد كياهان هابلوثيد از طريق كشت يافت به مديريت و تجربه فراوانى نياز دارد توليد كالوس جه خود يه خودى جه به صورت القاء با هورمون مضر است. هر جسی مهن اند گرجهوسیه آیمییم ی رای ویادی رعسی دمت عدم امکان گزینش صفات در طی تفکیک مواد گیاهی هاپلونید ديبلوئيدلسيون يك فرد هميشه به تولید یک فرد هموزیگوت منجر نمیشود