صفحه 1:
صفحه 2:
Cry 1 اع6
2 ااا Cer eee ee eed
ساکن در حال تعلیق و ا ينه ترم را
Ge) ۱ توان در يكى دستكاه شيشه أى دستى همكن ا و
oo 0 ا ل ee es Cuelobe ال ای
6 ا eae ces encore
{ONE 1s (-i BE ل regen CS
oe Sanat aie
aaa dell
a ae ۲-واضیح
yard گراترلیای تشاست
ا ل ل
AT: ا ا ie
ا 017
خودكفابى تور
٩ بالا بودن سطحهای پلوئیدی
صفحه 3:
کشتهای سوسپانسیونی سلولی را معمولا با متقل کردن قطعلتی از کالوس غیر متملیز به یک محیط کشک
مليع به وجود می آورند. محیط های ملیع مزبور بلید در طول زمان کشت تکامل داده شوند. کشتهای
سومپانسیونی را می توان با قرار دادن نمونه های گیاهی تشکیل یافته از بافتهای متمایز ( برای مثال
یک قطعه از هیپوکوتیل یا لپه) به وجود آورد. در لین مورد مدت زمان بیشتری جهت برقراری سیستم
لازم است. سلولهای تقسیم شونده به علت چرخش مداوم محیط مليع به تدریج خود را از توده ی
نمونه گیاهی اولیه آزد می کنند. یک کشت سومپانسیونی پس از مدت کوتاهی حاوی سلولهای تکی,
مجموعه های سلولی با حجمهای مختلف, تکه های باقی مانده از نمونه گیاهی اولیه و باقیمانده
خواهد بود. اصطلاح تردى 71318111637 را در مورد جدا شدن سلولها يس از تقسيم سلولى به كار
می برند. به وجود آوردن یک سوسپانسیون خوب ( یعنی کشت سلولیحاوی درصد بالایی از سلولهای
تکی و مجموعه ای سلولی کوچک) پیچیده تر از آن است که به دنبال پیدا کردن شرلیط محیطی بهینه
برای جدا شدن سلولهای تقسیم شونده می باشد. درجه تفکیک پا جدا شدن سلولها را در کشتهای
سلولی که از ویژگی تردی بالایی برخوردار می باشند می توان با تغیبر دادن محتویات محیط مغذی
تغفییر داد. گاهی اوقات زیاد کردن نسبت اکسین به سیتوکینین باعث افزلیش تردی کشت می گردد. از
طرفی برخحی از کشتها در شرلیط مختلف ازدرجه تردی کمی برخوردار است. برای به وجود آوردن
کشت سوسپانسیون سلولی مقدار نسبتاً زیادی از کالوس ( برای مثال حدود. ۲ تا ۳ گرم برای: ۱۰۰
میلی لیتر محیط کشت) مورد نیاز است.
صفحه 4:
دوار در اغلب Msi شگاه ها ao
ارلن باید ۲۵۰ میلی لیتری, ۱۰۰ الی ۱۲۰ دور در دقیقه است. تسیت حجم محیط کلت مایع به
فلاسکی که در آن قرار داده در امر تهویه محیطهای کشت بسیار مهم است و معمولا محیط کشت کت مایا
بايد حدود ۲۰ درصد کل حجم فلاسک را اشغال نماید. راه دیگر برای تهویه استفاده از هم زن
مغناطیسی است.
مراحل رشد کشت سلولی:
پس از لین که بافت گیاهی در محیط کشت ملیع قرار داده شد هیچ گونه رشد و افزلیش قلبل توجهي در
تعداد سلولها مشاهده نخواهد گردید. به این مقطع از زمان مرحله رکود اولیه Initial Tay
01 است. سپس تعداد سلولها با تبعیت از رابطه تولنی 1360011610121 افزلیش یافته و در
آنها از رابطه خطی تبعیت خواهد کید. پس از آن سرعت درجه تقسيم سلولی به
تدریج کاهش یافته و نهایتاً سلولها وارد مرحله ثابت 0158717 ٩2 یا عدم تقسیم سلول می شود.
Sub culture سلولها: Bas ca
کشت سلولها را باید در اوایل مرحله آخ مرحله ثلبت واکشت کرد. اما چون
مدت زنده ماندن سلولهای نمونه های گیاهی مختلف در مرحله ی ثلبت متفاوت است بنابرلین بهتر
است که آنها را در stil مرحله کاهش تدریجی سرعت تقسیم سلولی واکشت نمود.
صفحه 5:
fe apd ly IOS Gay
يليد زملتق كه دائسست ملولى تعزيبا جه تخد ماكزيمم رصيده نت واكثتت كرد. در بسیا
Said ay eae aan te ee ee
روز باشد. در هنگام اولین واکشت لازم است ٩ از کشتهای بسیار فعال ممکن است 1 ت ty O28
کشت را از میان یک شبکه نایلونی یا یک صافی ساخته شده از استیل زنگ نزن عبور داد تا مجموعه
های سلولی بزرگتر و باقیمانده مای نمونه اولیه گیاهی که ممکن است سوراخ یک پیپت را ببنده جدا
بايد در زمان واكشت Keer pesudoplatanus شوند. دانسيته سلولى كياه افراى بزرك
تا ۱۵ هزار سلول در هر میلی لیتر باشد. ٩ کردن حدود
مزایای کشت مایع به شرح ذیل می باشد:
- در لین روش, مضرات أكارء وجود ندارد و فرآورده طبيحى با يك تركيب شيميليى بيجيده و متغير كه
حاصل آن کشتهایی با یکنواعتی بیشتر است,
تکثیر رویشی در این محیط, نسبت به محیط کشت جامد. سریعترانجام می شود.
شیمیلیی می
۳- تقسیم سلولی در محیط کشت مایم در مقایسه با آگاره باعث آسانتر شدن تحقیقات
شو
معمولا زمانی از ماشینهای چرخان و بهمزن استفاده می شود که سلولهای در حال رشد. سوسپانسیون های
صفحه 6:
سلولی؛ بافت پروتوکورم. مریستم و سرشاخه ها در محیط کشت مایع باشند. اگر سلول ها و یر
صورت متفرق در محیط کشت رشد داده شوند. متحرک نگه داشتن آنهابه وسیله اين گونه ماشینهاء
یک مأله حیلتی می باشد. لین موضوع باعث افزایش تبادلات گازی ( اکسیژن, دی اکسید کر
اتیلن) حذف لثر جنبه ی ثقلی» توقف تشکیل عناصر غذلیی و توازن هورمونها تقسیم سلولی بیشترو
یش رشد. می گردد. اين ماشینها در اتاقهای مخصوص نصب می شوند.
در اين ارتباط انواع ماشین آلات زیر وجود دارند:
۱- کند یا سریع: مثللی از ماشینهای کند. اصطلاحاً چرخ ار
دادن بیشتر سریعتر هم هستند.
هو ماشین استوارد هستند که ضمن ثکان
۲- بعضی ماشینها به صورت متناوب, سلولها و غیره را در مایع فرو می برند ( ماشین استوارد) در
صورنی که بقیه ماشینهاء آنها را به طور مداوم. در محیط مایع. نگه می دارند.
نرکیبی از حالتهای ۱ و ۲, مثلاً ماشین چرخ ارکیده. یک ماشین آهسته است که باعث می شود
مریستم و پروتوکورمهای گیاهان ارکیده, به صورت مداوم. در محیط باقی بمانند
ah
ماشینهای کند. معمولاً سرعت چرخشی حدود دو تا چهار دور در دقیقه دارند. ماشین جرخ ارکیده در
زاویه 10 درجه و ماشین استوارد در زاویه بین 2۱۲ا ۱۵ درجه قرار دارند. با ماشین استوارد از دو نوع
ظروف شیشه ای می تولند استفاده شود. ظرفهای بزرگ که دارای ته گرد و گردن باریک هستند. لوله
های آزمایش یا ظرف های ارلن مایر یکصد میلی لیتری ( که به وسیله گیره یا کش, ثابت گردیده اند)
صفحه 7:
در چرخ ارکیده + ده با ظرفهای کوچک هم. برای ازدیاد جوا
استفاده است.
بهمزن چرخان, عموماً خیلی سریعتر می چرخد. این نوع ماشین اغلب از سه لایه که روی یکدیگر محکم
شده. و روی آنها ارلن مایرهایی با دهلنه ی باز؛ جاسازی شده اند. ظرفهای ارلن مایر (معمولاً هر
ظرف ۳۰۰ میلی مقدار ۱۰۰ میلی از محیط غذایی را در بر می گیرد) به وسیله ورق آلومینیوم. پوشیده
شده اند.بهمزنهای چرخحان, اصولاًبرای رشد سلولهاه سوسپانسیون سلولی و کالوس به کار برده می
شوند. ولی هرگز برای مریستم و سر شاخه ها و یا پروتوکرومها به کار نمی روند.
برای کاربرههای بیوتکنولوژی, سلوئهایگیاهان عللی, در تخمير کنده ها رشد داده می شوند که تهويه ى
آنهاء با هوای استریل. انجام می شود. استایر در سال ۱۹۸۵ مقلله ای را در رابطه با ماشینهای مناسب
برای تکثیر رویشی گیاهان منتشر نموده است.
بعضی عبارات اختصاصی در رابطه با استفاده از ماشین در محیط کشت مایع» به شرح ذیل می باشد:
Batch culture
لین روش, سلولها در یک سیستم بان رشد داده می شوند. و محیط کشت. دارای مقدار معينى مواد
ذلیی است که تجدید نمی شود. زملنی که یک یا دو عنصر ضروری برای رشد محدود شوند. رشد
متوقف می گردد. در اين سیستم کشت رشد متعالی وجود ندارد.
صفحه 8:
در این روش, سلولها در یک سیستم باز و مقدار معینی از محیط غذایی که تجدید می شود. رشد داده می
شوند. مقدار محیط کشتی که وارد می گردد. دقیقا برابر مقدار موادی است که از محیط خارج می
شود
کشت مداوم باز:
کشت مداوم باز, کشتی است که در لن اضافه کردن محیط جدید. برابر با کاهش سلولهاست. در اين نوع
از کشت. همراه با محیط کشت. سلولها نیز کاهش می يابند. زمانى كه كاهش سلولها برابر با سلولهايى
که تازه تشکیل می شوند. شد یک حالت ثابت و یکنواخت. پیش می آید.
کشت مداوم بسته:
در نوع کشت مداوم. که مقدار کاهش محیط غذلیی قلیم و اضافه كردن محیط جدید با هم برابیند. ولی
در محیط قدیم» هیچ نوع کاهشی از سلولها وجود ندارد
:Chemostat
دستگاهی است که در آن. کشت مداوم انجام می شود در حللی که مقدار رشد و تراکم سلولی: با اضافه
کردن مقدار معینی از عناصر محدود کنترل رشد ابت نگه داشته می شود.
صفحه 9:
rbidostat
در حللی که محیط تازه وقتی اضافه می شود که به . a ane ae
یک تراکم سلولی مشخصی رسیده باشیم. تراکم سلولی؛ قبلاً مشخصر شده است (بیوماس) و به وسیله
خروج سلولها از سیستم؛ به وسیله محيط قدیمی, ثبت نگه داشته می شود. اخیراًتایسرات
وواندرکوک یک سیستم جدید کشت اتوماتیک گیاهان را برای کشت بافت. توصیف نموده اند. این
از لوله بندی سلیکون, دو پمپ فشاری, دو منبع ذخبره ی )/٩۳6/5( سیستم اتوماتیک کشت گیاهان
شيشه إى: يك :دريجه مه زاه اميل وح اتاقئ رشد تشکیل شده است. ل لین سیستم اتوماتیک
کشت. از طریق یک میکرو کامپیوتر انجام مى شود؛ و فرآورده هاى محيط و تخليه وبر كردن محيط
را در شرليط استريل؛ كنترل هى كند. ساختن سيستم اتوماتيك كشت كياه. نسبتاً ارزان است و باعث
صرفه جوين در ليروى كار شده.ويك روش بلند مدت براى اسطادمى كشت .در مسيطا كتترل قله
می باشد.