کشت تعلیق یاخته ای Cell suspension culture
اسلاید 1: کشت تعلیق یاخته ای Cell suspension cultureکشت تعلیق یاخته ای شامل یاخته ها و مجموعه های یاخته ای است که در یک محیط کشت آبگونه غیر ساکن در حال تعلیق و رشد هستند. به طور معمول کشت های تعلیقی با قرار دادن قطعاتی از پنبه نرم را می توان در یک دستگاه شیشه ای دستی همگن کننده شکست. یک کشت سوسپانسیونی از یک رویداد بحرانی راندم Random critical erent که در هنگام تماس اولیه سلولهای گیاهی با محیط مایع شروع می شود منشأ می گیرد. سلولهایی که چنین تحولی در متابولیسم و رشد آنها انجام می گیردتولید یک Cell line نمایند. برخی از ویژگیهای این لاین سلولی Cell line:1- بالا بودن درجه تفکیک سلولی2- هموژن بودن مرفولوژی سلولی3- واضح بودن هسته و متراکم بودن سیتوپلاسم سلولی4- دارا بودن گرانولهای نشاسته5- دارا بودن نسبت کمی از عناصر آوندی6- زمانهای دوبله شدن آنها از 24 تا 72 ساعت7- از دست دادن خاصیت پس توانی8- خودکفایی هورمونی9- بالا بودن سطحهای پلوئیدی
اسلاید 2: کشتهای سوسپانسیونی سلولی را معمولاً با منتقل کردن قطعاتی از کالوس غیر متمایز به یک محیط کشت مایع به وجود می آورند. محیط های مایع مزبور باید در طول زمان کشت تکامل داده شوند. کشتهای سوسپانسیونی را می توان با قرار دادن نمونه های گیاهی تشکیل یافته از بافتهای متمایز ( برای مثال یک قطعه از هیپوکوتیل یا لپه) به وجود آورد، در این مورد مدت زمان بیشتری جهت برقراری سیستم لازم است. سلولهای تقسیم شونده به علت چرخش مداوم محیط مایع به تدریج خود را از توده ی نمونه گیاهی اولیه آزاد می کنند. یک کشت سوسپانسیونی پس از مدت کوتاهی حاوی سلولهای تکی، مجموعه های سلولی با حجمهای مختلف، تکه های باقی مانده از نمونه گیاهی اولیه و باقیمانده خواهد بود. اصطلاح تردی Friability را در مورد جدا شدن سلولها پس از تقسیم سلولی به کار می برند. به وجود آوردن یک سوسپانسیون خوب ( یعنی کشت سلولیحاوی درصد بالایی از سلولهای تکی و مجموعه ای سلولی کوچک) پیچیده تر از آن است که به دنبال پیدا کردن شرایط محیطی بهینه برای جدا شدن سلولهای تقسیم شونده می باشد. درجه تفکیک یا جدا شدن سلولها را در کشتهای سلولی که از ویژگی تردی بالایی برخوردار می باشند می توان با تغییر دادن محتویات محیط مغذی تغییر داد. گاهی اوقات زیاد کردن نسبت اکسین به سیتوکینین باعث افزایش تردی کشت می گردد. از طرفی برخی از کشتها در شرایط مختلف ازدرجه تردی کمی برخوردار است. برای به وجود آوردن کشت سوسپانسیون سلولی مقدار نسبتاً زیادی از کالوس ( برای مثال حدود 2 تا 3 گرم برای 100 میلی لیتر محیط کشت) مورد نیاز است.
اسلاید 3: کشت سوسپانسیون سلولی باید در هنگام انکوباسیون مرتباً تکامل داده شود و برای انجام این امر از یک تکان دهنده دوار در اغلب آزمایشگاه ها استفاده می شود بهترین سرعت برای کشت سوسپانسیون در ارلن باید 250 میلی لیتری، 100 الی 120 دور در دقیقه است. نسبت حجم محیط کشت مایع به حجم فلاسکی که در آن قرار داده در امر تهویه محیطهای کشت بسیار مهم است و معمولاً محیط کشت مایع باید حدود 20 درصد کل حجم فلاسک را اشغال نماید. راه دیگر برای تهویه استفاده از هم زن مغناطیسی است.مراحل رشد کشت سلولی:پس از این که بافت گیاهی در محیط کشت مایع قرار داده شد هیچ گونه رشد و افزایش قابل توجهی در تعداد سلولها مشاهده نخواهد گردید. به این مقطع از زمان مرحله رکود اولیه Initial lay period است. سپس تعداد سلولها با تبعیت از رابطه توانی Exponential افزایش یافته و در مرحله بعد افزایش آنها از رابطه خطی تبعیت خواهد کرد. پس از آن سرعت درجه تقسیم سلولی به تدریج کاهش یافته و نهایتاً سلولها وارد مرحله ثابت Stati onary یا عدم تقسیم سلول می شود.واکشت کردن سلولها: Sub cultureجهت زنده نگهداشتن کشت سلولها را باید در اوایل مرحله آخر، مرحله ثابت واکشت کرد. اما چون مدت زنده ماندن سلولهای نمونه های گیاهی مختلف در مرحله ی ثابت متفاوت است بنابراین بهتر است که آنها را در اثنای مرحله کاهش تدریجی سرعت تقسیم سلولی واکشت نمود.
نقد و بررسی ها
هیچ نظری برای این پاورپوینت نوشته نشده است.