کشت سلول و بافت گیاهی

صفحه 1:


صفحه 2:


صفحه 3:
وقتی درباره کشت گیاه صحبت می شود معمولاً منظور کشت گیاهان در ‎IIE‏ زیرپلاستیک, گلخانه و با مزرعه می باشد. 4 تكثير رويشى كه شامل قلمه زدن؛ خوابانيدن و ببوند زدن مى باشد از دیرباز در کشاورزی اهمیت داشته واز آن در تکثیر گیاهان زراعى. ن ميو روشهای تکثیر رویشی در شرایط طبیعی در برخی موارد کارآمد نبوده و روش جدیدی از کشت كياهان. تحت عنوان كشت سلول و بافت كياهى معرفى و ارائه شده است. الا كشت سلول و بافت كياهى كه با عنوان كشت درون شيشه( 100۷10۳0) و يا كشت استريل نيز مطرح مى شود و در مورد تمام انواع كشت هاى استريل كه در شرايط درون شيشه اى انجام مى كيرد . به كار مى رود.در حال حاضر تكنيكهاى كشت به عنوان ابزارى قوى جهت مطالعه مشکلات اساسی و کاربردی بیولوژی گیاهی در آمده است. علاوه برآن در سالهاى اخیر اين تکنیک ها کاربردهای تجاری گسترده ای درتکثیر گیاهان مختلف از جمله گیاهان زینتی و دارویی و نیز حذف عوامل بیماریزا از گياهان بيدا نموده است. 

صفحه 4:
بیوتکنولوژی سلولی و مهندسی ژنتیک زمینههای اصلی بیوتکنولوژی نوین را تعیین کرده و شامل روشهایی میباشند که در قرن بیستم بهطور وسیع توسعه یافته و در بسیاری از کشورها مورد استفاده قرار گرفتهاند. بیوتکنولوژی علمی مشتمل بر روشها و تکنیکهای تولید. ذخیرهسازی و فرایندهای کشاورزی و همچنین محصولات دیگری که مواد زیستی معمولی و غیرتراریخته گیاهان. حیوانات و ریزسازوارهها را در شرایط طبیعی و مصنوعی په کار میبرند 

صفحه 5:
ل بیوتکنولوژی سلولی بر ویژگی خاص سلول از قبیل خاصیت توتیپوتنسی سلول. توانایی باززایی یک موجود کامل از آن و همچنین سنتز متابولیتهای انویه باارزش از این سلولها بنیان نهاده شده است و از این طریق: توسعه سریع فرمها و لاینهای باارزش محصولات جدید را از طریق اصلاح به منظور ایجاد مقاومت به تنشهاى زنده و غیرزنده افرايش تولید و کیفیت محصولات کشاورزی ریزازدیادی ژئوتیپهای باارزش عاریسازی گياهان از ویریسها و ویروئیدها دستیابی به مواد فعال بیولوژیکی جهت اهداف پزشکی و تغذیهای 

صفحه 6:
یکی از روش های مهندسی ژنتیک است که از اه آن یک سلول یا بات از یکی از اندام های گیاهی را درون بستر مناسب و محیط کشت قرار می دهند تا در اثر تغذیه و رشد آن یک گیاه کامل حاصل آید. بافت در واقع مجموعه ای از سلول های اندام های گیاهی را تشکیل می دهد و البته به طور کلی این کلمه برای همه موجودات زنده مورد استفاده قرار می گیرد . بافتی که برای كشت انتخاب مى شود بايد از هر كونه بیماری سالم باشد و در واقع بخشی باشد که لیاقت کامل شدن و تبدیل شدن به گیاه کامل را داشته باشد. 

صفحه 7:
چرا کشت با یکی از کاربردهای مهمی که باعث می شود تکنیک کشت بافت مورد استفاده قرار گیرد . تکثیر و ازدیاد گونه های مقاوم و مفید هستند . جذابیتی که اين روش از تکثیر دارد تبدیل یک گیاه کامل از بافتی کوچک است . بستر کشت در این روش محیطی سرشار از مواد غذایی است تا بتواند بافت مورد نظر را تا زمانی که بتواند گلیم خود را از آب بیرون بکشد . تغذیه ی مورد استفاده برای کشت بافت . محیطی بسته و راکد است و به طور معمول از محفظه شیشه ای یا پلاستیکی ف تشکیل می شود تا بتواند نور را نیز تا اندازه مورد نیاز دریافت کند 

صفحه 8:
از مزایای کشت بافت تولید انبوه و سریع یک رقم مطلوب و یا رقم های جدید است . در گیاهان پذرهای تولید شده کاملا همانند گیاه مادر خود نیستند . همچنین این بذور با یکدیگر نیز تفاوت دارند بس جنائجه يك كياه مطلوب در منطقه اى توسط كشاورزان بركزيده شود و از آن بذ نمایند . تضمینی وجود ندارد که بذور سبز شده ویژگی های مورد نظر را داشته باشند . همچنین از راه های معمول مانند قلمه زدن نیز نمی تیان بسیاری از گياهان را تکثیر کرد .اما با استفاده از روش هاى كشت بافت مى توان در زمان کوتاهتعداد زیادی از یک گیاه مطلوب را تهیه نمود. مزایای کشت بافت توليد نبوه و سریع یک رقم مطلوب و یا رقم های جدید است . با استفاده از کشت بافت میتوان با روش هایی 

صفحه 9:
یک موجود پرسلولی اگر در شرایط مطلوب محیطی قرار توانانی تکامل و تب این تنوری به عنوان اساس مطالعات در زمینه کشت بافت فرار گرفت. مطالعاتی که اینجانب انجام داده ام, مطالعه سیستماتیک سازمان یافته ای روی کشتسلولهای رویشی ایزوله شده گیاهان عالی انجا نشده است. او بر روی سلولهای ایزوله فتوسنتزی برگ وسلولهای متفاوت دیگر آزمايش کرد که ناموفق بود. با داشت که می توان به طور موفق جنین های مصنوعی حاصل از سلولهای رویشی را کشت کرد. بنابرا مسائل مهم است. براساس تحقیقات او در سال ۱۹۰۲ و بعد از آن. هابرلنت به عنوان پدر کشت بافت گیاهی نام گرفت. 

صفحه 10:
پس از آن در سال ۱۹۰۷ اولین کشت سلولهای حیوانی و انسانی انجام شد اما در کشت سلولهای گیاهی پیشرفتی وجود نداشت تا اینکه در سال ۱۹۵۵ هورمون کینتین کشف شد و به دنبال این کشف. کشت سلولها و بافتهای گیاهی رونق گرفت به طیری که در سال ۱۹۵۸ تعداد آزمایشگاههای کشت بافت گیاهی در آمریکا و کانادا به بیش از ۲۵۰ رسید که در هر آزمایشگاه سالانه بیش از یک میلیون گیاه تولید می گردد. اين رقم در سال ۱۹۸۵ برای هر ۱۸ آزمایشگاه سالانه به 7۰ میلیون گیاه رسید. پیشرفت مهم دیگری که در سال ۱۹۱۲ صورت گرفت معرفی و تولید محیط کشت 915 (موراشیگ و اسکوگ) بود. این محیط یکی از بهت محیط های کشتی است که امروزه نیز کاربرد دار 7 

صفحه 11:
* سیر تکاملی پیشرفت کشت بافت: 2 مرحله اول (۱۸۹۲-۱۹۰۲) * هابرلند. ون وجينك و رشينكر بافتهای گیاهان مختلف در محلولهای نمکی ناپ و غنی از ساکارز "* هابرلند ___ فرضیهای در مورد خاصیت توتیپوتنسی هر سلول گیاهی زنده 7 قابلیت سلولهای گیاهی به واقعیت بخشیدن پتانسیل نمو خود جهت تشکیل یک گیاه کامل در شرایط خاص کشت بود _ يدر علم كشت بافت كياهى 

صفحه 12:
> مرحله دوم (۹۰۲-۱۹۲۷) * تهیه محیط کشتهای اولیه جهت کشت بافتهای حیوانی با منشاء طبیعی داشتند و حاوی پلاسمای خون و مایع ج > مرحله سوم (۱۹۲۲-۱۹۳۷) * رابينز دانشمند آمريكابى و كوته دانشمند آلمانى--> امكان كشت مريستمهاى انتهابى نوك ريشه گوجه فرنگی و ذرت بر روی محیط کشتهای جامد > مرحله چهارم (۹۳۲-۱۹۶۰) * كاتريت؛ دانشمند فرانسوی امکان کشت موفق و مداوم بافتهای گیاهی هویج را در شرایط درون شیشهای با انتقال متناوب آنها بر روی محیط کشتهای تازه 

صفحه 13:
* وايت بر روی توتون 5 نابكرت --> اولين كشت بافتهاى واقعى و طولانى مدت از بافتهاى تمايز يافته هويج > مرحله ينجم (1970-:194) * کشف کلاس جدیدی از هورمونهای گیاهی به نام سیتوکینینها و بهخصوص هورمون كينتين در سال1900 امکان تحریک تقسیم سلولهای برش ‎SL‏ بافت پارانشیم میانی توتون 7 مرحله ششم (1۹2۰-۱۹۷۵) * كوكينك-ه روشهای آنزیمی جهت تهیه پروتوپلاستهای منفرد حاصل از ريشه و میوه گوجه فرنگی و كشت آنها در شرايط كنترل شده 

صفحه 14:
پاور و همکاران ۳۰" امتزاج مصنوعی پروتوپلاستها ‏ باعث گشودهشدن راه جدیدی در ایجاد هیبریدهای سوماتیکی مورل دانشمند فرانسوی استفاده از ریزازدیادی گیاهان در شرایط درون شیشهای با استفاده از کشت مریستم جهت تهیه مواد گیاهی عاری از پیماری در گیاه ارکیده < مرحله هفتم (۱۹۷۵ تا کنون) * توسعه فناوریهای درون شیشهای *_تهیه انواع مواد بیولوژیکی مورد نیاز جهت انجام کارهای کشت بافت 

صفحه 15:
خصوصیات آزمایشگاه کشت سلول و بافت: 3 تعیین محل آزمایشگاه کشت بافت. تصمیم مهمی است. آزمایشگاه نباید در مجاورت آ[ إمايشكاه هايى كه ازميكرواركانيسم ها و یا حشرات استفاده می کنند یا محل ذخیره بذر و مواد گیاهی هستند. تأسیس شود زیرا انتقال آلودگی از طریق دریچه هوا و رفت و آمد زياد. مسئله ساز می گردد. رفت و آمد زياد موجب بالارفتن غبار از كف زمين شده و به كسترش آلودكى كمك مى كند. ازقراردادن كلدان حاوى كياه در فضاى آزمايشكاه كشت بافت اجتناب شود جون مى توانند منبعى از كنه ها و سايرموجودات آلوده كننده ديكر باشد. بلافاصله بعد از پایان کار در مزرعه یا گلخانه. نباید وارد آزمایشگاه شد. زیرا احتمال ورود کنه و حشرات چسبیده به مو یا لباس به داخل آزمایشگاه وجود دارد. 

صفحه 16:
تجهیزات و وسایل لازم برای یک آزمایشگاه کشت بافت به شرح زیر است: اتوکلای از این وسیله برای استیل کردن محیط های کشت و وسایل شيشه ای استفاده می شود 

صفحه 17:
:«دستگاه لامینار ایرفلو يا هود استریل . مولد هوای استریل می باشد. هنگام کشت گیاه را زير هود استریل کشت دهید. ۲ 7 کات ا 5 ‎EET‏ لا ا ۵ 7 6 ‎“RAM:‏ 15 

صفحه 18:
8 لاني ‎ited CfA et GU hs‏ شنز ‎SSO‏ ‏دارای عناصر ماکرو و میکرو. وب . هورمون . قند و آگار می باشد پس از تهیه محبط ۳0۲۷ * دستگاه آب مقطرگیری * آون )فور(. وسایل فلزی توسط این دستگاه استریل می گردد. ‎G f‏ 

صفحه 19:
* اتاقک رشد يا 610310۳6۲ 62۳۵۷۷۲ در این اتاقکها از لامپهای آفتابی و مهتابی استفاده شده و دما طوری تنظیم می گردد که تا حدود ۲۵ درجه سانتیگراد باشد)با استفاده از تایمر می توان فتوپرید مناسب را برایهر گیاه را ایجاد نمود.) * ۱۵906۲ ۳۱۵۲6۵ ۲۱۵۴ در تسهیه محیط کشاز لیردستگاد لستفاده شود. 

صفحه 20:
*_ترازوی حامل. حساسیت آن باید از ۰/ - ۰۰۱ باشد تا موادی با مقادیر کم(مانند هورمونها) را نیز بتوان وزن کرد. * شیکر در کشت مایع از آن استفاده می شود. ای استریل کردن جداکشت. محیط کشت و ابزار کار (شامل هیپوکلریت سدیم و الکل اتیلیک۷۰/) 

صفحه 21:
اتاقک استریل (دستگاه لامینارایرفلو) كرجه آماده سازی و قطع قلمه هاء قطعات کالوس و غیره. در یک ظرف شیشه ای و یا در بین فیلتر کاغذی استریل انجام مى شود. ولی !۱ م اين کار در اتاقک استریل ضرورت دارد. هنگامی که اعمال فوق در یک فضای غیراستریل انجام شود میزان آلودگی افزايش چشمگیری می یابد. حتی اگر از کاغذ استریل جهت کار استفاده شود. اتاقک استریل محلی است که هوای مکیده شده از خارج قبل از ورید به آن . با عبور از بسیار ریز ت این سیستم تصفیه جریانی از هوای استریل ایجاد می نماید. همچنین به منظور ضدعفونی خشک از چراغ الکلی یا چراغ گازی استفاده می شود 

صفحه 22:
کلیاتی در مورد استریل کردن: 0 استريل كردن شامل استریل مواد گیاهی ) جداکشت ها (. محیط کشت و ابزار مورد مصرف در کشت سلول و بافت می باشد. در مورد مواد گیاهی یا جداكشتها. ابتدا سطح اندامى كه قرار ست به عنوان جداكشت استفاده شود شاخ و برك يا ريشهل... را با مايع طرفشويى شسته و به خوبى آب كشى كرده سبس جداكشت مورد نظر را تهيه و در محلول هيبوكلريت سديم (وايتكس) قرار مى دهيم. باتوجه به نوع كياه و نوع جداكشت . تيمارى که برای استریل کردن استفاده می کنیم ‏ متفاوت است. به اين معنى كه رقت محلول هيبوكلريت سديم و زمان قرار دادن جداكشت در آن بسته به نوع كباه متفاوت است (بايد توجه نمود تا نموئه تبره نشود.) لازم به توضيح است كه جداکشت يا ‎EXplant‏ )4 قطعه ای از گیاه که در محبط كشت قرار مى كيرد كفته مى شود) را مى توان از تمام فسمتهای یک گیاه اعم از سيستم انتهاى ساقه. برك. ساقه. ريشه و ... بدسث آورد. از ديكر مؤاردى كه تياز به استريل کردن دارد. محیط های کشت می باشد. پس از تهیه محیط کشت دلخواهآن را در شيشه های درب دار (شيشه هاى سس مایوتز شيشه های مناسبی است چرا که هزینه کمی هم دربر دارد) ريخته و در اتوکلاو استریل نماید توجه: درب شیشه های حاوی محیط کشت استریل تنها باید هنگام کار در زیر دستگاه لامینار (اتاقک استریل) باز شود. © استريل كردن ابزار کار نیز از جمله مواردی است که باید رعایت گردد. بزار فلزی مورد نیز از جمله دسته تيغ يا قيجى و بنس را داخل فويل آلومينيوم بيجيده و در آون با حرارت ۲۰۰ درجه سانتیگراه به مدت یک ساعت استریل کنید. ظروف پتری را نیز می توان مشابه ابزارفلزی استریل نمود هورمونها و برخی ویتامینها که به دمای بالا حساس هستند را بعد از استریل شدن محیط کشت و در زیر دستگاه لامینار با استفاده از فیلترهای غشایی به محيط كشت اضافه نمائيد. 

صفحه 23:
eile S45 Heat Therapy تیمارگرما برای خلاصی از عوامل آلودگی در گیاه استفاده می شود. یکی از مهمترین عوامل آلودگی. ویروسها می باشند. گیاهان و ویروسها واکنش یکسانی به تیمارگرمایی نشان نمی دهند اما باید تعادلی به وجود آید که هم به گیاه اجازه رشد داده شود و هم بیشترین میزان حذف ویروس را داشته باشیم . همانطور که می دانیم در شرایط رشد طبیعی به موازات رشد انتهایی ساقه. ویروس نيز به با جدید متفل می شود. اگر گیاه بتواند در درجه حرارتهای بالا رشد کند. در این صورت احتمال کاهش سرعت همانند سازی ویروس وجود دارد و در نتیجه انتهای ساقه می تياند سریع تر از ویروس رشد کرده و عاری از ویروس گردد. سپس می توان انتهای ساقه را که عاری از ویروس است. قطع و آن را کشت نمود. دمایی که معمولا استفاده می شود ۳۱ تا ۳۷ درجه برای چند روز (تا ۷ روز( در ماء است. استفاده از برخی مواد شیمیایی در محیط کشت نظیر. 803۷8۳100] نیز منجر به تولید گیاه عاری از ویروس می گردد 

صفحه 24:
"** انتخاب محیط کشت برای موفقیت در کشت بافت ضروری است . هیچ محیط کشت مشخصی را نمی توان برای رشد انواع سلولها توصیه کرد و اغلب لازم است تغ اتی در محیط کشت برای پاسخگویی انواع مختلف جداکشت صورت گیرد. مسیر تعیین یک محیط کشت به هدف کشت سلول و بافت بستگی دارد. به طور کلی محیط کشت حاوی نمک های غیر آلی و ترکیبات آلی مثل تنظیم کننده های رشد. ویتمینها کربوهیدراتها و یک عامل ژله ای کننده محیط می باشد. علاوء بر اين محیط کشت می تواند دارای اسید آمینه و آنتی ب باشد. 77703770157 1720 ‏تن‎ ET 2 AS DT ey 22 

صفحه 25:
اجزای محیط کشت بافتهای گیاهی به شرح زیر است: الف) نمک های غیر آلی و مواد معدنی برای رشد بافتهای گیاهی کشت شده . تأمین مداوم بعضی از ترکیبات شیمیایی معدنی در محیط کشت ضروری می باشد. کربن. هیدروژن. اکسیژن. فسفر پتاسیم. کلسیم. منیزیم و نیتروژن به مقادیر نسبتاً زیادی برای رشد و نمو بافتهای گیاهی ضروری می باشد. وژن که بیشتر از سایر عناصر مورد استفاده می باشد به صورت نیترات یا بون آمونیاک و يا ترکیبی از آنها به محلول غذایی افزوده می شود. سولفات منیزیم نیاز محيط كشت به دو عنصر منيزيم و كوكرد را تأمين مى کند فسفر را می توان به صورت فسفات منوسدیک و يا فسفات منو يتاسيك به محيط كشت اضافه كرد. به منظور تأمین کلسیم می توان از کلرور کلسیم يا نیترات کلسیم استفاده نمود. 

صفحه 26:
0 0/0025 190 PBMO spsijine KH2PO « 17 H3BOs 0/62 37 NazMoO:.2H:0 0/025 1/69 NaFeEDTA ‏محلول‌ذخیرد‎ ‎0/86 FeSOs.7H:0 2/784 0/0025 NazEDTA 3/724 ۴ استفاده مى ‎aa‏ امى شوتد. از ‎٠١‏ ميلى ليتر محلول ذخيره براى تهيه ‎٠٠٠١‏ ميلى لبثر محيط كدد ليلا —— ‎Mg50..7H20‏ Pa) درجدول ۲-۱ ۳ محلولهاى ذخيره بنج نمك غيرآلى 85 نشان داده شده است. ابن محلولهاى ذخيره با غلظت ‎٠٠١‏ برابر غلظت نهابى محيط كشت تهيه 

صفحه 27:
* از فرمولاسیون موراشیگ و اسکوگ(0۷5) به طور گسترده ای استفاده می شود و هدف از تهیه این محیط کشت )که به مقدار نمک های آن توجه خاصی شده است(آن است که نشان دهیم اضافه نمودن عصاره بافت های گیاهی (که قبلاً به محيط كشت اضافه می شد)؛ رشد سلولی در کشت درون شيشه را افزايش نمی دهد و مواد غذایی غیر آلی معادل. محدود کننده رشد سلولی ليم كننده هاى رشد ( يا هورموتها) تركيبات آلى هستند كه به طور طبیعی در گياهان عالی ساخته میشوند و بر روی رشد و نمو اثر می گذارند. در کشت درون شٌ گیاهان عالی: شر نده های رشد ( و از مهمتر اکسین ها و سیت مین ها) بارز می شت درون شيشه بدون حضور تنظیم کننده های رشد غير ممكن است . بايد دانست اضافه كردن هورمون به محيط كشت بستگی به نوع قلمه و كينه كياهى دارد . به عنوان مثال قلمه هابى كه خود اكسين كافى توليد مى کنند.به اکسین اضافی براى وشد و تقسيم سلولى نياز ندارند. باشد و در اغلب موارد 

صفحه 28:
لا اکسین ها: اين هورمون باعث رشد طولی سلول . تقسیم سلولی . تشکیل ريشه های نابجا و ممانعت از تشکیل شاخه های نابجا و جانبی می گردد. در غلظت های پایین اکسین. تشکیل ريشه های ابجا تحریک شده در حالیکه در غلظت های بالاتر کالوس زایی تحریک می گردد. از مهمترین اکسینهانی که به میزان زیادی در کشت بافت استفاده می شود ایندول بوتیریک اسید (/18) می باشد. این اکسین در محیط کشت به موقع تجزیه می شود (اکسین ها باید حداکثر پس از ۵ روز در محیط کشت تجزیه شوند) از دیگر اکسین های رایج میتوان از ایندول استیک اسید یا 1/۵ (زودتر از حد معمول در محیط تجزیه می شود). ن استیک اسید یا (دیرتر از حد معمول در محیط ت تجزیه می گردد) و ۲ و ۶ دی کلروفنو کسی استیک اسید(4 -9] و۲ ) برای القای کالزایی و از 01۵۵ و8۵ 18۸ برای ريشه ۲ ایزوپنتیل آدنین ( ۲ 8]0) از پر مصرف ترین سیتوکینین هایی هستند كه در محيط های کشت گیاهی يه ه كار فى روند. این هورمونها غالباً برای تحريكى رشد و نمی به کار می روند. ها در غلظت کم (۱/۰میلی گرم در لیر) باعث تولید کالوس و در غلظتهای بیشتر(۱۰-امیلی گرم در ليتر)شاخه زایی را تحریک 

صفحه 29:
الا اسید جیبرلیک: اين كروه شامل حدود ۲۰ ترکیب است که 62۸3 رایج ترین آنها در گياهان است. اسید جیبرلیک به ندرت در کشت بافت استفاده می شود. نقش اسید جیبرلیک عموماً در تحریک جوانه زنی بذر و تحریک رشد طولی میانگره هاست . به طور کلی اثر این هورمون در محیط های کشت . تحریک طویل شدن شاخساره های خیلی کوچک و تحریک تشکیل جنین روی کالوس می باشد الا اسید آبسیزیک 8 ۵: کننده یکی از مهار کننده های رشد محسوب شده اما در کشت بافت در تحریک نمو جنین از کالوس نقش دارد و از آن به ندرت در جنین زایی سوماتیک استفاده می شود. لا اد از این هورمون در کشتهای 10۷16۳0 جهت جوانه زدن و تمايز سلولهاى جوبى استفاده مى شود. 

صفحه 30:
ج)ویتامینها ۱ ویتامین ها نقش کاتالیزوری در سیستم های آنزیمی داشته و در محیط های کشت گیاهی فقط به مقدار بسیار جزیی مورد نیاز هستند. ‎ee a nn‏ ع ا ل م امین های دیگر که در تهیه آنها استفاده مى شود شامل نيكوتينيك اسيد يا نياسين 83)) يريدوكسين (86) اسيد آسكوربيك (( © 6لا اسيد فوليك و ریبوفلاوین 892) می باشند د(کربوهیدارتها جداكشتها از نظر فتوستتزى فعال نبوده و به يك منبع كرين ) که ساکارز یا گلوکز می باشد (نياز دارند ه)عامل زُله اى كنئده اغلب آزمايشهاى كشت بافت برروى بسترى ثابت صورت مى كيرد و به طور معمول از یک عامل مولد ژل جهت این کار استفاده ميشود. عامل مولد ژل می تواند آگار آتهیه شده از نوعی جلبک دریایی(. ژلرایت (پلی ساکاریدی کامل از تخمیر گونه ای پسودوموناس) و یا فایتوژل)حاصل تخمیر آگار توسط گونه ای پسودوموناس) باشد. 

صفحه 31:
تهيه 2131065ا2) )يا جدا كشت: گیاهی که از آن به عنوان جداکشت استفاده می شود باید سالم. بدون بیماری و آفت باشد . گیاهی که خشبی نشده به کشت بهتر جواب می دهد برای آنکه گیاه به مرحله بلوغ برسد ۰ ۳ مرحله را بايد طى كندة اا) مرحله نونهالی یا 00۷6101۴1۷ ب) مرحله انتقال یا بینبینی ج) مرحله بلوغ یا ۵۴۵۲1۴۷ از طرفی مسن شدن به دو گونه تعریف می شود: مسن شدن سنی ‎Cronological aging‏ مسن شدن فیزیولژیک 291۳09 ا2ء: ۳۳۷5۱۵۱۵9 مسن شدن فیزیولوژیک در گیاهان مختلف فرق می کند. مثلاً دردر گیاه گردو ۱۰ سال طول می کشد تا پاجوش آن گل بدهد. خصوصیات گیاه در هر یک از ۳ مرحله بالا دو طی کشت بافت فرق می کند. مثلاً اكر كياه در مرحله نونهالى باشد به راحتى ريشه مى دهد. لازم به ذكر است هر چه سن گیاه کمتر باشد و از قسمتهای جوان گیاه جداکشت تهیه شود. کشت بافت آن موفق تر است 

صفحه 32:
ريز نمونه. قطعه‌ای از بافت گیاهی است که از آن برای تولید یک گیاه کامل استفاده می‌شود و برای تولید هر گیاه خاص: یک ریز نمونه مشخص استفاده می‌شود. ریز نمونه می‌تواند در واکنش به زخم ایجادشده. تولید کالوس (توده‌ای از سلول که در اثر تقسیم به یجود آمده و تمایز نیافته است) نماید. عوامل مربوط به انتخاب ریز نمونه مناسب: فیزیولوژیکی پاسخ بهتری به کشت بافت می‌دهند. همچنین آلودگی در این بافت‌ها کمتر دیده فصل تهیه‌ی ریز نمونه‌های انتخاب‌شده در فصل بهار کمترین آلودگی (قارچی و باکتریائی) و بالاترین پاسخ‌دهی به رشد را دارا می‌باشد. در زمستان کمترین پاسخ‌دهی به کشت دیده می‌شود. بافتی که ازنظر یولوژیکی در خواب است معمولا تا پس از دوران خواب. به کشت بافت پاسخ نمی‌دهد. بالاترین درصد آلودگی در پاییز و زمستان دیده می‌شود 

صفحه 33:
اندازه و محل برش كياه براى تهيهى ريز نمونه: 1 معمولاً كشت ربز نمونه كوجكتر. سختتر بوده و محيط كشت بايد حاوى تركيبات اضافي باشد. ريز نمونههاى بزركتر. احتمالاً از مهاد غذايى و تنظيم كنندءهاى رشد بيشترى برخوردار بوده و برای کشت مناسب‌تر هستند (معمولا ۲ میلی‌متر بالای جوانه و ۳ میلی‌مترپایین جوانه را جهت تهیه‌ی ریز نمونه جوانه برش می‌زنند). همچنین گیاهان در قسمت‌های مختلف دارای تعادل هیرمونی متفاوتی هستند و اين تفاوت منجر به پاسخ‌های متفاوتی در محیط کشت درون شيشه می‌شود. کیفیت منابع گیاهی: گیاهان سالم. عاری از ویروس. گیاهان بدون تتش غذایی. آبی یا محیطی و گياهان دارای بازدهی بالای محصول (بهترین گیاه از تمام لحاظ) بهترین انتخاب برای تهیه‌ی ریز نمونه می‌باشند. هدف نهایی از کشت باف بسته به نوع باسخ مطلوب از کشت سلول. انتخاب بافت ریز نمونه متفاوت خواهد بود. هر قطعه از بافت گیاهی می‌تواند به‌عنوان یک ریزنمونه استفاده شود. به‌عنیان‌مثال اگر هدف تکثیر انبوه کلون باشد. ریزنمونه معمولاً جوانه جانبی و انتهایی و یا ساقه هوایی می‌باشد. برای القای کالوس زایی از ساقه. برگ. میانگره. هیپو کوتیل و یا جنین استفاده می‌شود. #بافت برگ حاصل از بذر تازه جوانه‌زده استری بافتی مناسبی برای تهیه پروتوپلاست است. برای تهیه گیاه هاپلوئید از کشت بساک یا دانه‌ی گرده استفاده می‌گردد. در کشت گیاهان چوبی بیشتر از قسمت‌های هوایی ریز نمونه می‌گیریم. 

صفحه 34:
آلودگی در کشت بافت گیاهی : تهیه‌ی کشت‌های استریل در بعضی از مواد گیاهی یکی از مشکلات عمده در کشت بافت می‌باشد. علاوه بر اين. مرحل‌ی ضدعفونی یک مرحله‌ی وقت‌گیر و به‌واسطه‌ی امکان از دست رفتن نمونه گیاهی پرهزینه می‌باشد. منابع آلودگی: ابع آلودكى شامل نه. پرسنل آزمایشگاه. اتاقک استریل. حشرات مانند کنه و مورچه. محيط کشت. تجهیزات آزمایشگاهی و سیستم کنترل کننده‌ی تهويدى ازمایشگاه می‌باشد. نمونه: ها روی سطح ریز نمونه, در شکاف‌های کوچک. در برگ‌های در حال رشد. جوانه‌ها و..ه وجود دارند. همچنین بسیاری از كياهان درون سیستم آوندی خود دارای آلودگی می‌باشند. برای حذف آلودگی‌های ریز نمونه می‌توان از مواد ضدعفونی کننده زیر استفاده هیپو کلریت سدیم (36061): وایتکس خانگی با غلظت ۵.۲۵ درصد (برای بعضی از ریز نمونه‌ها غلظت را باید تا ۱ درصد پایین آورد) هی وکلریت کلسیم < (263)061 > غلظت ۰/۸ درصد اتانول ۷۰ درصد که با هیپو کلریت سدیم همراه هم عمل می‌کنند (ریزنمونه بیشتر از ۱ دقيقه نباید داخل اتانول قرار گیرد) پرو کسید هیدروژن ‎)200۲۳٩(‏ با غلظت ۱۰-۳ درصد گاز کلر (261) که برای ضدعفونی بذور خشک مژثر است قار چکش‌ها مانند کاپتان آنتی‌بیوتیک‌ها مانند جنتامایسین و آمپی سیلین با غلظت ۱۰۰-۵۰ میلی گرم در لیتر (جهت ضدعفونی محیط کشت از آن استفاده می‌گردد) 

صفحه 35:
ضدعفونی کردن پرسنل آزمایشگاه شستشوی دست‌ها تا بالاتر از مچ. استفاده از دستکش و لباس استریل استفاده از تورهای محافظ موی سر و ماسک در کاهش انتقال آلودگی به محبط کشت و ریز نمونه تا حدی موثر است. ضدعفونی اتافک استریل و استفاده از دستگاه لامینار نلوٍ ‎((CLaminair Flow‏ که به میزان ۹۹/۹۷ درصد از ورود ذرات ۰/۳ میکرونی جلوگیری می‌کند. جلوگیری از ورود حشرات به آزمایشگاه و ظروف کشت مسدود کردن منافذ ورودی و استفاده از پارافیلم برای بستن ظروف کشت. استریل سازی محیط کشت بافت محیط کشت بافت معمولاً در دمای ۱۲۰ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۰-۱۵ دقیقه و تحت‌فشار ۱/۱ بار اتوکلاو استریل می‌شود. موادی مانند جیبرلین که به حرارت حساس هستند. با فیلترهای میلی پیر با سایز ۰/۲۲ میکرون استریل گشته و پس از سرد شدن محیط کشت به آن اضافه می‌شوند. استریل سازی وسایل آزمایشگاه پنس. اسکالیل. کاغذ. بشر و سایر وسایل فلزی و شیشه‌ای را می‌توان با حرارت خشک آون (در دمای ۱۸۰ درجه سانتی‌گراد به مدت ۳ ساعت) استریل نمود و در حین کشت نیز از چراغ الکلی و یا د 

صفحه 36:
محتویات محیطهای غذایی جهت کشت سلولها و بافتهای منفرد: 7 عناصر پرمصرف (ازت. فسفر پتاسیم. کلسیم. و گوگرد) عناصر کممصرف (آهن, بُ منكنز. روى. مس. مولیبدن. کبالت و...): ویتامینها. هیدراتهای کربن و هورمونهای گیاهی یا مشتقات مصنوعی آنها باشد. اتیلن دی آمین تترا ‎Ol eb Sak (EDTA) at Se‏ بهبود قابلیت مصرف آهن برای سلولها برای تهیه بافت کالوس. افزودن شیر نارگیل (آندوسپرم مایع داخل میوه نارگیل)؛ شاه بلوط و ... به محیط کشت هیدراتهای کربن از اجزای ضروری محیطهای غذایی مورد استفاده در کشت بافت محسوب میگردند. از آنجایی که در اكثر موارد سلولها و بافتهاى بهكار رفته بهعنوان ريز نمونه. اتوتروف نخواهند بود. از ساکارز یا گلوکز با غلظت ۲ تا ۳ درصد بهعنوان منبع هيدرات كربن استفاده ميكنند. هيرمونهاى كياهى براى تمايززدابى سلولها و القاى تقسيمات سلولى مورد نياز هستند. جهت القای ریختزایی ساقه. مقدار اكسينهاى موجود در محيط كشت را ميتوان تقليل داد و يا اينكه به طور كلى از محيط كشتها حذف نمود 

صفحه 37:
از ۲.۶- دی کلرو فنوکسی استیک اسید (0-۲,۶]) آلفا نفتیل استیک اسید (/8/0)؛ ایندول-۳- استیک اسید (1۸۸) و یا مشتقات مصنوعی دیگر آنها به عنوان منابع اکسین در محیط کشنها استفاده میکنند. در محیطهای کشت مصنوعی از کینتین ۰ ‎-٩‏ بنزیل آمینو پورین (9/4۴) و زآتین بهعنوان منایع سیتوکینین فتهای گیاهی در شرایط درون شیشهای از محیط کشت 1۷15 استفاده میشود که ترکیب آن اولين بار در سال ۱۹۹۲ توسط موراشی و اسکوگ معرفی گردید. تعادل مواد غذایی در این محیط کشت به خوبی در تهیه محیط کشتهای جامد معمولا از آگار استفاده میشود: _ پلیساکاریدی است که از نیعی گیاه دریایی بدست میآید. اکثر بافتهای کالوس. به دلیل اینکه کلروپلاست ندارند و هتروتروف هستند. احتیاجی به نور نخواهند داشت. با این وجود. در اکثر مواقع. بفتهای کالوس را در تاریکی و یا در نور خیلی ضعیف بدست میآورند بافتهاى تعيين هويت شده از لحاظ ریختشناختی را به نور متقل نموده و سپس آنها را در شرایط نوری ۱۰۰۰ تا ۳۰۰۰ لوکس رشد میدهند؛ 

صفحه 38:
- 7 كشت مريستمهاى تشكيل شده و تكثير آنها نيز در شرايط نورى انجام ميشود. با توجه به نوع کشت. شدت نور اتاقکهای رشد بايد بين تا ۳۰۰۰ لوکس. رطوبت در اتاقک رشد باید بین ‎٩۰‏ تا ۷۰ درصد باشد ۱ بهترین رژیم دمایی. نوری و همچنین رطوبت بهینه را میتوان به کمک اتاقک رشد فراهم نمود. درجه حرارت مناسب برای کشت اکثر بافتهای گیاهی ۲۵ تا ‎۲٩‏ درجه سانتیگراد است. در کشت بافت گیاهان مناطق حارهای. درجه حرارت اتاقک رشد را ممکن است تا ‎۲٩‏ تا ۳۰ درجه سانتیگراد اذ 3 در حالی که جهت القای ریختزایی درجه حرارت را تا ۱۸ تا ۲۰ دریجة سانتبگراد پانتن:مپآورند. TRAM: Eisen 127 2 DT Ey 

صفحه 39:
* معمولا بلفت کالوس حللت بیشکل دارد و نمیتولند ساختار آناتومیکی مشخصی داشته باشد, ولى بسته به منشاء بيدليش و شرايط كشت ممكن است از نظر استحکام. ساختارهای متفاوتی به خود بگیرد: )0 حللت متورم که شامل سلولهای شدیدا آبکی است وبه آسانی به واحدهای مجزای کوچک تقسیم میشود و از هم میاشد؛ ساختاری با استحکام متوسط همراه با پیدایش مراکز مریستمی مناسب؛ ساختار ضخیم (مستحکم) که در آن عناصر کامبیوم و سیستم آوندی تمايز مييابند TRAM: Eisen 127 2 DT Ey 

صفحه 40:
روند تشکیل و رشد بافت کالوس "* شرط ضروری تمایززدایی سلولهای گیاهی و تبدیل آنها به بافت کالوس. وجود دو گروه از هورمونهای گیاهی در محیط کشتها شامل اكسينها و سيتو كينينها ميباشد. اکسینها موجب تمایززدایی سلولها میگردند و آنها را برای تقسیم آماده ميكنند. در حالى كه سيتوكينينها باعث تكثير (تقسيم) سلولهاى تمایززدایی شده میگردند. اگر در محیط کشت بدون هورمون. قطعهای از ساقه برگ. ريشه (بدون کلاهک) یا هر ریزنمونه گیاهی دیگری حاوی سلولهای تمایز يافته قرار كيرد. هيج تقسیم سلولی اتفاق نمیافتد و بافت کالوس تولید نميشود. این حالت مربوط به عدم قابلیت تفسیم سلولهای تمایز ی هر سلول سه فاز رشدی را طی میکند: ‎)١‏ تقسيم؛ ۲) رشد؛ 6۳ ‎pd‏ ‏خصوصیت وییه فاز نهلیی رشد. ضخیم شدن غشای انویه سلولی و از دست دادن قابلیت تقسي سلولهای تملیز یافته دوباره قابلیت تقسیم را بدست آورند. ضروری است دوباره حللت تملیز نیافته به خود گیرند که در لین ‎We‏ ‏سلولها به حالت ‎aa Pong pcg‏ “ تکثیر سلولهای تمایززدلیی شده منجر به رشد سازمان نیافته و بی قاعده سلولها میگردد که در نتیجه آن. بافت کالوس تشکیل میشود. ل-سلول تخصصی شده به کالوس مربوط به القای تقسیم سلولی است که سلول در طول روند تمایز خود لین قابلیت را از دست تهیه کالوس از ریزنمونههای مختلف از قبیل: قطعات ساقه. ریشه برگ, گلبرگ و بساک. 

صفحه 41:
فقدان سیتو کینینها در محیط کشت. چرخه سلولی را در دوره شروع تقسیم میتوز حتوقف میکند. اکسین وجود داشته باشد. سلولها تقسیم نمیشوند و چهار روز پس از مرحله پنهان (کمون-کند اولیه) مستقیما وارد فاز رشد میشوند. وجود هورمون سیتوکینین بدون حضور اکسینها منجر به تولید همان بلفت قدیمی پارانشیم میلنی توتون میشود. مانند اينکه بر روی محیط کشت بدون هورمون قرار گرفته باشند. بدست آمده در خصوص پارانشیم میلنی توتون همیشه نمیتوند بینگر تمام مواردی باشد که به تشکیل بافت کالوس بر روی محیط کشت حاوی یک نوع هورمون مربوط میشود. ۲ به عنوان مثال. تولید کالوس بر روی محیط کشت حاوی 0-۲,۶] بدون حضور سیتوکینینها در جنینهای نارس گندم و یا بدست آوردن کالوس از بافتهای کوتیلدینی آفتابگردان بر روی محیط کشت حاوی سیتو کینین بدون حضور اکسین. از جمله اي ميباشند. در بسیاری از موارد. نتایج حاصله بستگی به هیرمونهای درونی دارد که در سلولهای ریزنمونه موجود است و اين از ویژگیهای خاص هیرمونی آنها محسوب میشود. پلیساکاریدها و انواع دیگری از محرکها به جز اكسينها و سيتوكيئينها. نيز باعث تفسیم سلولها و در نتيجه حركت به سمت توليد كاليس ميشوند. 

صفحه 42:
روند گذر به سمت رشد کالوس در بخش قاعده نوک ساقهچه. با توقف تقسیمات سلولی آغاز میشود. فاز پنهان ۲۵ تا ۸ ساعت به طول میانجامد. در طول اين مدت سلیلها از نظر اندازه بزرگ میشوند و بافت نرم و متورم میگردد. ل پس از از پنهان, سلولهابا تشکیل بلفت کالوس شروع به تقسیم‌جا نرخ رشد زیاد میکنند. ‏ اگر عدم تمایززدلیی سلولهای تمایز ‎bp ees ore 7‏ شرع ۳ يافته مربوط به القاى تقسيم آنها تحت تاثير هورمونهاى كياهى باشد..با لين وجود. عدم تمليز سلولهاى مريستمى در حال تقسيم؛ به توقف تقسیمات سلولی سلولهای غیر تخصصی مربوط بوده و فقط چس از لین مرحله است که القای تقسیمات سلولی. منجر به کالوسزایی میشود. اثر مربوط به عمل یک یا چند هورمون گیاهی ممکن است بسته‌به خصوصیت فیزیولوژیکی بافت مورد نظر متفاوت باشد که توانلیی آن در نمونههای مورد مطالعه. بر اساس درجه تمایز سلول ها تعیین میگردد. گاهی در شرلیط درون شیشهای. گذر سلول از حللت تمایزیافته به حللت تمایززدلیی شده همراه‌با تقسیمات سلولی فعال. تغییر فعالیت برخی از ژنها همراه است كه از جد فعال کردن یکی از ژنها و از کار انداختن فعالیت ژنهای دیگر موجب تغییر در ترکیب پروتئینی سلولها ميشود. در سلولهای کالوس. پروتنینهای اختصاصی تظاهر میيابند و همزمان میزان پروتئینهای ویژه جهت سلولهای فتوسنتز کننده برگ کاهش مییابد ویا از بین میرود. 

صفحه 43:
روند از کار انتادن یا شروع مجدد فعالیت ژنهای مبتنی بر خاصیت تمایززدایی. در گیاهان دولپه راحتتر از گیاهان تکلپه اتفاق ميافتد. در هنگام تبدیل سلولهای تمایززدلیی شده به حللت تکثیر بيقاعده سازمان نيافته كه منجر به تولید بافتهای کالوس میشود. تغییرات پیوشیمیایی و سیتولوژیکی در سلولها روی میدهد. حالت تمایززدایی با استفاده از مواد اندوختهای و تخریب اندامکهای سلولی تخصصی شروع میشود. 7 عا ۱۲ساعت چس از القای حللت تمایززدلیی. دیواره سلولی نرم شده و متورم میشود. تعداد ریبوزومهای آزاد. تعداد واحدهای دستگاه كلؤى و همجنين اندازه و تعداد هستکها افزایش میابند. وع تقسیمات سلولی که چس از ۶۸ تا ۷۲ ساعت‌به وقوع میپیوندد. اتفاق ميافتد. بلید در نظر داشت که در لتی در متبولیسم ناشی از حللت تمایززدلیی و همچنین سنتز محل آسیب دیده در سلولهای ریزنمونه سلولهاى كالوس جرخه تكثير خود را ادلمه داده وبيس از كن بكه حللت بيرى و مرك سلولها فرا ميرسد. تكثير هر.يك از سلولها دوباره در حالتهاى تفسيم. رشد و تمليز تكرار ميشود. تمليز كالوس را ميتهان ت : بر پیه ریختزایی است. اشتباه كرقت. جهت ‎Sal‏ مراحل پیری. از دست دادن قابلیت تقسیم سلولی و مرگ سلولهای کالوس اتفق نیفتند. کالوس اولیه تشکیل شده بر روی ریزنمونهها را هر ؛ تا ‎٩‏ هفته یک بار بر روى محيط كشتهاى تازه انتقال می دهند. اين عمل زبر کشت نامده میشود 

صفحه 44:
* در صورتى كه عمل واكشت به صورت منظم انجام كيرد قابليت تقسیم سلولی ممکن است دهها سال حفظ شود. '* منحنى رشد سلولهاى كالوس حالت 5 شكل دارد كه شامل بنج مرحله مختلف ميباشد: ” در مرحله اول رشد كه فاز ينهان (كمون-ككُند) اوليه ناميده ميشود. هيج كونه افزايشى در تعداد.يا جرم سلولها اتفاق نميافتد. در اين مرحله. سلولها جهت شروع تقسيم آماده ميشوند. ” مرحله دوم رشد لكاريتمى.يا تصاعدى سلولها است كه مشخصه اصلى آن. بيشترين فعاليت تقسيم سلولى و افزايش جرم كالوس است. علاوه بر آن رشد با حداكثر سرعت اتفاق ميافتد. در مرحله سيم. كه فاز خطى است. نرخ رشد سلول ها ثلبت ميشود. در لين مرحله تقسيم سلولى كند كرديده ولى هنوز افزايش توسعه سلولى مشاهده ميشود. مرحله جهارم.با حللت ثلبت شدن رشد سلولها همراه است و زملنى اتفاق ميافتد كه فعاليت ميتوزى سلولها (هم سرعت تقسيم و هم توسعه سلولى) به طور واضح كاهش مييايد. در مرحله بنجم كه فاز سكون (توقف) ناميده ميشود. منحنى رشد روبه سراشيبى ميرود. در لين دوره كاهش سرعت رشد سلولها شروع گردیده امابا وجود لَن..به دليل تقسيم سلولها هنوز افزايشى در تعداد آنها مشاهده ميكردد. ولى در مجموع. افزلیش جرم سلولی برابر صفر است..پس از مرحله توقف. مرگ سلولها فرامیرسد. بهطوری‌که هم تعداد و هم جرم سلولهای زنده کاهش میابد 

صفحه 45:
منحنی چرخه رشد متناوب سلولهای بافت کالوس شامل مراحل: ۱- فاز پنهان (کمون-کند اولید؛ ۲- فاز + ۳- فاز خطی؛ ۶- فاز کند شدن رشد؛ ۵- فاز توقف ویژگیهای سلولهای کالوس "سلولهای کالوس در شرایط درون شیشهای خصوصیات فیزیولوژیکی- بیوشیمیایی مختلفی را که مخصوص سلولهای عادی موجود در اه است. دارا میباشند. لیتهای ثانویه را حفظ. صفت مقاومت در برابر سرما و قابلیت آبگیری برای سلولهای کالوس حاصل از گیاهان مقاوم به سرما حالت ژنتیکی داشته و قابل توارث میباشد. واکنشهای دوره نوری نیز که مربوط به حفظ فعالیت فیتوکرومها میباشد. از خصوصیات ویژه بانتهای کالوس محسوب میشود. "در سلولهای کالوس و همچنین سلولهای عادی گیاهان. خصوصیات متعدد دیگری نیز نظیر مقاومت به درجه حرارتهای بالا. مواد با اسمزیته بالا و شوری نیز وجود دارد 

صفحه 46:
علاوه بر آذ سلولهاى كالوس يك سرى خصوصيات متحصر يهفردى دارئد كه آنها را از سلولهای عادی مينمايد. 7 در آنها بروتثينهاى اختصاصى تظاهر مييابند و فتوسنتز سلولهای برگ نيز كاهش مييابد و يا اينكه به طور كلى حذف میشود.سلولهای كالوس از نظر ناهمكنى بالاى إنتيكى و غير همزمانى از سلولهاى عقني عبد میشوند. چرخه سلولی در سلولهای در طبیعت است. يكى از ات سلولهای کالوس, ناهمكنى زنى آنها بر اساس سن بافت کالوس تفاوتهای زیادی در تبادلات انرژی در سلولهای کالوس مشاهده میشود. .نها در مقانسه با سلولهای ‎LA Gib‏ اکسیژن کمتری دارند. این ار رامسكرن در سال ۱۹۳۸ در سلولهای مریستمی ‎s‏ به طور فعال در حال تقسیم بودند مشاهده نمود. 

صفحه 47:
ژنتیک سلولهای کالوس مدت زمان زیادی عقیده بر این بود که سلولهای کالوس از نظر ژنتیکی یکنواخت هستند. در دهه ۱۹۹۰ --* مشخص شد که سلولهای بافت کالوس ناهمگنی ژنتیکی بالایی را نشان میدهند. ناهمگنی ژنتیکی سلولهای کالوس قبل از هر چیز در سطوح پلونیدی مختلف آنها نمایان میشود. به طوری که اين سلولها بر اساس تعداد کرومیزوم از هم متمایز میشوند. بافتهای مریستمی از نظر ژنتیکی در شرایط درون شیشهای پایدار میباشند در کشتهای کالوس و سوسپانسیون سلولی. گاهی اوقات سلولهای دیپلوئید (حاوی دسته های 92] کروموزومی) مشاهده میشوند که گیاهان حاصل از آنها خصوصیاتی شبیه گیاهان حاوی سلولهای پلیپلوئید (دارای دستجات ۰۳ ۶ ۵ یا بیشتر کروموزومی) دارند. همچنین در کشت بلفت کالوس حاصل از گیاهان پلیپلوئید نیز میتوان بندرت آنیوپلوئیدی (کاهش یا افزایش تعدادی کروموزوم به مجموعه کروموزومی موجود که دقيقا مضربی از مجموعه کروموزوم هاپلونیدی موجود نباشد) را نیز مشاهده کرد. هرچه سلولهای کالوس مدت زمان طولایتری تحت زیرکشت قرار گرفته بشند. تملیز آنها بر اساس سطح پلوئیدی. پیشتر خواهد بود. 

صفحه 48:
سلولهای پلی پلونید فاز پنهان (کمون) کوتاهتری دایند و نظر یه نیز در مراحل بعدی زیرکشت نسبت به سلولهای سمت افزایش سطح پلوئیدی پیش میرود. علاوه بر تغییر سطح پلونیدی. کشت سلولها و بانتهای گياهان در شرلیط درون شیشهای باعث پیدلیش شکستگیها و ناهنجاریهای کروموزومی در سلولها ميشود. اين وقايع بر روى خصوصيات بيولوزيكى بافتهاى كشت شده با تغيير شكل خارجى آنها. تغيبر و تبادل مواد و سرعت رشد تاثير ميكذارند. در ميان نمونههاى مشاهده شده در زير ميكروسكوب. جهشهاى كروموزومى را ميتوان در سلولهاى كشت شده مشاهده نمود كه باعث بروز تغییراتی ميشوند كه بدون ميكروسكوب و از روى ظاهر كياه نميتوان تشخيص داد اكسينها و سيتوكينيتها از جمله هورمونهابى هستند كه در تركيب محيطهاى كشت كالوسزابى وارد ميشوند. فعالترين ماده هورمونى كه در تركيب اكثر محيطهاى كشت بهكار ميرود. ماده جهشزاى 8-1.4 ميباشد. سيتوكينينها و بهخصوص كينتين: امكان بليبلوئيد شدن سلولها را فراهم ميسازئد. تنوع إنتيكى سلولهاى كالوس اجازه ميدهد كه از آنها جهت سلكسيون سلولى براى مقاومت به عوامل نامساعد محيطى (از قبيل خشكى. شورى. سرماء فلزات ستكين. درجه حرارتهاى بالا و بايين و غيره) عوامل بيماريزاى كياهى و همجنين افزايش عملكرد استفاده 

صفحه 49:
ریختزایی در بافتهای کالوس *_راههای دست یافتن به نمو سلولها پس از تمایززدایی آنها 5 روش اول. باززایی انویه گیاه ‎pls‏ 52 سطح سلولهاء يافتها يا اندامها * _ روش دوم. از دست دادن قابلیت تمایز ثانویه سلول و همچنین قابلیت باززایی گیاه با استفاده از خاصیت تمایززدایی: سلولها قابلیت رشد بر روی محبط کشت بدون هورمون (که همان با به حالت غدهای است) را بدست میآورند. روش سوم. شامل چرخه طبیعی نمو سلول کالوسی است که مراحل پیری و مرگ آن تمام شده است. در اين مورد. سلول تمایز انویه را تحمل نموده و تقیم را متوقف می کند (فاز رشد توقف). با این وجود. چنین حالت تمایزی منجر به ریختزایی نمیشود و خصوصیات سلولهای کالوس قدیمی را حفظ میکند. "7 ریختزایی در بافت کالوس. عبارت از به وجود آمدن ساختارهای منظم از یک توده سلولی بیقاعده و نامنظم میباشد. "*_دو تیپ اصلی در ریختزایی وجود دارد: در کشت بافت. ریختزایی ممکن است به 5 حالت اندامزایی (تشکیل ساختار چندقطبی که شامل مجموعهای از اندامهای مجزا است) از قبیل ريشه. ساقه و بندرت گل يا برك ...+ ابتدا اندامهای منفرد را باززایی نموده و سپس از آنها گياهان کامل تولید میکنند. اندامزایی ريشه از این قاعده مستثنی میباشد. ایی سوماتیکی (تولید ساختارهای شبه دوقطبی از سلولهای سوماتیکی) تظاهر نماید. در حالت اندامزایی جنینزایی سوماتیکی, بر خلاف اندامزایی, بلافاصله جنین تشکیل میشود که هم دارای مریستم ریشه و هم مریستم جوانه انتهایی ساقه بوده و در ادامه از 

صفحه 50:
قابليت هر سلول سوماتیکی گیه برای واقعیت دادن به برنامه نمو خود جهت تبدیل آن به یک گیاه کامل را توتپوتنسی سلول گیاهی مینامند. هر سلول سوماتیکی پتانسیل منحصربهفردی را دارا بوده: به طوری که حاوی تمام مجموعههای ژنی موجود میباشد و بنابرلین تمام سلولها برنامههاى ويده خاصيت نمو را حفظ ميكنند. "- * اكر از سلولهاى كلبرك. بارانشيم ميلنى ساقه ونيا از سلولهاى هر نوع بافتى از كياه. كالوس بدست آوريم؛ تحت شرايط خاصى هر يك از سلولهاى بافت كالوس ميتواند كياه كاملى را باززايى نمايد. خاصيت توتييوتنسى هميشه به واقعیت نمیپبوندد. به طوری که قابلیت بالقوه انواع مختلف سلولها به صورت یکسان نمایان نمیگردد. اساس ریختزایی سلول را تمایز سلولی تشکیل میدهد. لیی گیاهان با تملیز ثانويه سلولها آغاز ميشود. در لین هنگام سلولهای تمایززدلیی شده دوباره ساختار و عمل اختصاصی خود را بدست asl تملیز انویه سلولهای کالوس همیشه‌با ریختزلیی و باززلیی گیاه تمام نمیشود. بعضی اوقات. لین روند فقط منجر به تولید بلفت میشود که به نين حالتی تمایز بفتی میگویند. ‏ سسلول کالوس میتواند به مناصر آوند آبکش یا آوند چویی تبدیل شود نمونه دیگر تملیز انیب یتلند تبدیل سلول تمایززدلیی ت تكثير فعال.به سلول كالوس پیر در فاز توقف باشد که لین سلولها قابلیت تقسیم خود را از دست دادهاند. از بين کلیه حالات تمليز ثان رین توجه به ریخت زلیی معطوف میگردد. به طوری که اجازه میدهد از سلول کالوس بتوانیم گیاه کامل بدست آوریم. 

صفحه 51:
a در قابلیت ریختزایی سلولهای گیاهی. هم عوامل داخلی و هم عوامل خارجی موثرند. عوامل داخلی: عوامل ژنتیکی گونه گیاهی اولیه. اندامی که از آن ریزنمونه تهیه میشود و سن ریزنمونه عوامل خارجی: ترکیب محیط کشت درجه حرارت و نور (شدت نور و طول دوره زمانی فتوپربود). شدیدترین نوع القاکننده ریختزایی. که بهتر است آن را تحریککننده یا سیگنال ریخت زایی نامید. تغییر نسبت بین سیتوکینینها و اکسینهای بهکار رفته در ترکیب محیطهای کشت میباشد. بر اكسينها. اغلب اندامزایی ساقه شروع ميشود و غالبيت اكسينها بر سيتوكينينها باعث ريشه زابى در هنگام فزونی ‎Foe‏ ‏باید خاطرنشان ساخت. در مواردی که در کشت بافت کالوس ابتدا جوانههای ريشه تولید شوند. تقریبا هیچگاه گیاه کامل زایی نمیشود. در حالی که اگر ادا جیانههای ساقه تولید گردند. در ادامه (با انتقال به محيط كشت حاوى مقادیر بالاتر اکسین) به راحتی ریشهدار گردیده و اين آغازی برای تولید گیاه کامل خواهد بود. واکنشهای مربوط به ریختزایی در بافت کالوس: الف- تکثیر کالوس؛ ‏ ب- تولید ساقههای نابجا؛ ‏ ج- ریشهزایی در بافت کالوس. bo 

صفحه 52:
* ع ‎See‏ ی خاصیت تمایززدلیی سلولی و تبلیل آنهابه فاز رشدی کالوس = کالوس بر روی همان محیط کشتی که برای کالوسزایی به کار پرده شده است ‎Btn lee‏ در بفت کلیس (متی شرع مشود که عامل ند ززدلیی (0.2-4 با اکسینهای دیگر) از محیط کشت حذف شود. جنین به هورمونهای خارجی نیازی ندارد. زیرا خود. هورمونهای مورد نیازش را تامين تغیبرات نسبت هورمونها در محیط کشت و همچنین عامل تفکیک سلولهای گیاهی از اندامهای موجود. محرکهای اصلی ریختزایی میباشند. محركهاى ريختزلبى در كشت بلفت كالوس: تركيبلتى نظير نيترات نقره. نيترات آمونيوم. تعدادى از اسيدهاى آمينه (برولين. اوقات سرین) و پلیمینها (پوترسین و اسپرمیدین) در محیط کشت مانيث و سوربيت نيز روئد ريختزايى را تحريك ميكنند. يون های و890" بر روی نمو ساختارهای سازمانبافته تشکیل شده در بافت کالوس تاثیر میگذارند. در حالی که یونهای بل القای آنها را تحریک ميكنند. * اسيد جییرلیک رشد آغازینهای ساقه را تحریک مینماید. در حالی که اسید آبسیزیک تمایز جنینهای سوماتیکی را تسریع میکند ات نقره,قبیت باززایی را در زر کشتهای قدیمی تداوم مییخشند. 

صفحه 53:
7 باززلیی در همه سلولها صورت ن وجود ماده القاکننده (تحریک کننده 7 _ قابلیت مستعدنمودن سلول توسط تحرییک کنندههای ریختزلیی را توانلیی سلول مین سلول توانا تاميده میشود. محققان به اين نتيجه رسيدهاند كه توانابى سلولها يك واقعه تصادفى بوده و بنابراين بندرت اتفاق ميافتد. کافی نیست. بلكه لازم است كه سلول نيز جهت پاسخ به آن آماده باشد. و سلولى كه جنين در بعضى مواقع. سلولهاى ‎Bi‏ أن سپس لین سلولهابا دو نیم شدن تقسيم شده و توليد توده كروى شكلى از سلولهاى متقارن کوچک ‎le‏ 1 در اندامزلیی؛ لین توده سلولی را مرکز مریستمی و در جنینزلیی سوماتیکی پیش جنینهای گلبولی شکل منامند. 3 در ادلمه, در مرکز مریستمی, آغازینهای ‎Le‏ ريشه, برگ یا جولنه گل تملیز میابند و بر طبق آن اندامزايى ساقه. ريشه. برك يا كل اتفاق ميافتد. در بيش جنين كلبولى شكل ساختار شبه جنینی دوقطبی توسعه مييابد. گیرد. بلکه فقط از هر ۶۰۰ تا١٠٠٠‏ سلول. يكى مسير باززليى را طى ميكند. ---+براى انتقال.به ريختزليى. فقط ابليتى را كسب نموده است. تحت عنوان ين در فاز کمون واقع میشوند که سازماندهی و آمادهسازی مجدد آنها جهت تقسیمات سریع بعدى ضروری است. ye sn ET ‏.تن‎ 00011 

صفحه 54:
داخل ب ‎DO ge eat can ee‏ مشاهده نميشود. 1 استئناء: اندامزليى ساقه در بافت کالوس حاصل از پارانشیم میلنی توتون رقم ويسكانسين--> مراكز مريستمى هميشه فقط در بخش زيرين توده كالوس واقع ميشوند. ریختزلیی در سلولهای کالوس جه طور دایمی و پیوسته در جريان ميباشد. در بافت كالوس ممكن است به طور همزمان هم ساختارهاى تشكيل شده به طور کامل و هم سلولهایی که تازه در مسير ريختزابى وارد شدهاند. وجود داشته باشند. فعالیت سنتزی بسیار زیاد سلولهای مراکز مریستمی و پیش جنینهای گلبیلی شکل بهوسیله مرکز انتقللی آنها که هدایتکننده مواد غذلیی است. انجام ميشود. در لین حللت سلولهای کالوس اطراف آنها اغلب تخریب ميشوند و شبه جنینهای تشکیل شده به آسانی از توده سلولهای کالوس فرو میریزند. 

صفحه 55:
کشت سلول و بافت در بهنژادی گیاهی * "یکی از زمینههای فناوری کشت سلولی. استفاده از آنها در بهنژادی گیاهی میباشد که کاربرد روشهای سلکسیون سنتی را در تهیه لاینها و ارقام جدید گیاهان تسهیل و تسریع مینمای روشهای موجود کشت بافت و سلول در شرایط درون شیشهای: "_ گروه اول. فناوریهای کمکی که روشهای عادی بهنژادی را تغیبر نمیدهند و فقط به آنها کمک میکنند. تعدادی از این روشها شامل باروری در شرایط درون شیشهای (رفع خودناسازگاری پروگامی». کشت تخمکها و جنینهای نابلغ دورگها (رفع خودناسازگاری پست گامی) بدست آوردن هاپلونیدها از طریق کشت دانههای گرده و میکروسپور. نكهدارى سلولهاء يافتها و اندامهای منفرد در حالت انجماد و باززایی دورگهای دور گروه دوم. روشهای مستقل و غیروابسته به روشهای ستتی سلکسیون جهت بدست آوردن لاینها و ارقام جديد كياهان ميباشند. در اين مورد میتوان به روشهای سلکسیون سلولی با ستفاده از بافت کالوس: دورگ گیری غیرجنسی (متزاج پروتوپلاستهای مفرد و بدست آوردن دورگهای غیرجنسی) و کاربرد روشهای کشت بافت در مهندسی ژنتیک اشاره نمود. 

صفحه 56:
استفاده از روشهای درون شیشهای کمکی در بهنژادی گیاهی در دورگگیریهای دور (دورگ گیری پین والدینی که به لحاظ فیلوژنی از هم دور هستند)؛ روشهایی از کشت بافت نظير باروری در شرایط درون شیشهای. کشت جنین (کشت جنینهای منفرد بر روی محیط کشتهای مصنوعی). ریزازدیادی دورگهای با ارزش بدست آوردن هاپلوئیدها به طریق درون شیشهای و همچنین نگهداری در حالت انجماد کاربرد دارند باروری در شرایط درون شیشهای (رفع خودناساز گاری پروگامی4 ن روش زمانی انجام میشود که امکان باروری بین جفتهای انتخاب شده در شرایط طبیعی محقق نمیگردد. این عمل به چند علت اق میافتد: ۱- عوامل فیزیولوژیکی (عدم تطابق همزمان رسیدگی تخمک و دانه گرده و غیره): ۲- عوامل مورفولوژیکی (کوتاه بودن لوله گرده یا متوقف شدن رشد آن در مراحل مختلف روند باروری و غیره). دو مورد از روشهایی که میتوان به باروری در شرایط درون شیشهای نایل گردید. بدین صورت است: الف- کشت تخمدان بر روی محيط کشت مصنوعی جامد و همزمان با آن قرار دادن دانههای گرده آماده بر روی آن؛ ب- باز کردن تخمدان و قطعات جفت همراه با تخمکهای محصور شده در آن و قرار دادن آنها بر روی محیط کشت در مجاورت دانههای گرده و یا قرار دادن مستقیم دانههای گرده آماده بر روی بافت جفت کشت شده. 

صفحه 57:
رفع خودناسازگاری پُستگامی * خودناسازكارى بست كامى در میرد دورگ گیریهای دور. پس از مرحله باروری بروز میکند. اغلب در این حالت بذور با ضعيفى توليد ميشوند كه عامل آن میتواند انحرافات ایجاد شدء در زمان نمو جنین و اندوسپرم باشد. بهدلیل رشد ضعیف اندوسپرم: قادر به جوانه زنی نرمال نیست. در اين موارد. جنین رسیده و ضعیف را جدا نموده و آن را بر روی محیط غذایی مصنوعی ‎ous‏ ‏پرورش جنین بالغ) بر روی محیط کشت مصنوعی در شرایط درون شیشهای. کشت محیط غذایی مورد نیاز جهت کشت جنین بالغ میتواند ساده و بدون افزودن هر گونه ماده فعال فیزیولوژیکی باشد به عنوان مثال+ ان از محیط کشت وایت و یا هر محیط دیگری که حاوی نمکهای معدنی و ساکارز باشد. استفاده نمود. درتلاقیهای خیلی دور. جلوگیری از نمو جنین میتواند حتی در مراحل ابتدایی مشاهده شود که در فقدان تمایز و کاهش سرعت رشد تظاهر مییابد. در این مورد. کشت جنین از دو مرحله تشکیل میشود: ۲ رشد جنین در حالت امبریونی. زمانی که هنوز تمایز آن ادامه مییابد (سخت ترین حالت از نظر ترکیب محیط کشت در نظر گرفته میشود که بايد حاوى مقادير بالای ساکارز همراه با افزودن اسیدهای آمین. ویتمین ها و هورمینهای گیاهی مختلف باشد) رشد جوان در زمانی که مرحله تمایز آن خاتمه یافته است. 

صفحه 58:
جنین, به عنوان یک روش کمکی در مورد دورگ گیریهای دور نه تنها در برطرف نمودن خودناسازگاری پست گامی, بلکه به منظور ریزازدیادی دورگهای با ارزش نیز به کار میرود. در این مورد. ریزازدیادی از طریق کالوسزایی. القای ریخت زایی و تهیه گياهان باززایی شده از بافت کالوس انجام فناوری همسانه سازی جنینهای نارس اجازه میدهد که ژئوتیپهای با ارزش گیاهان در مراحل اولیه دوره زندگی خود تکثیر شوند. یکی دیگر از کاربردهای اساسی کشت جنین گیاهی. استفاده از آن در سلکسیون سلولی میباشد. ریزازدیادی دورگهای دور روش کشت جنین, امکان رشد گیاهان دورگ حاصل از دورگگیربهای دور را از طریق کشت جنیهای ناقص آنها میسر میسازد. با این وجود. گياهان دورگ حاصله کوچک و اغلب آنها عقیم ‎i‏ تکثیر و نگهداری گیاهان حاصله یکی از مسایلی است که همواره در پیش روی محققان قرار داشته است. در این موارد. میتوان از روشهای ریزازدیادی در شرایط درون شیشهای کمک گرفت. دورگهای حاصل از دورگگیری دور را میتوان از روش‌های فعال سازی نمو مریستم جوانههای جانبی (يا تکثیر ساقههای عقیم)؛ استفاده از جوانههای نابجا. باززایی گیاهان از بافت کالوس و همچنین در بعضی موارد با استفاده از کشت جنین تکثیر نمود. 

صفحه 59:
جمعآوری دانههای گرده از يايههاى صتوير و بيد انتخاب جنسها و گونههای ‎bo‏ مختلف از خانواده بید و نمونهگیری از پایههای مورد نظر 57 

صفحه 60:
0۳ ۳ —— کشت نمونهیا استفاده از تکتیک مناسب برروی ‎i‏ جهت نجات جنین محیطهای کشت انجام ساز گاربهای تدریجی و انتقال گیاهچههای حاصله یه شرایط محیطی اتاقک ركه SS ‏تن‎ aT 7 ‏اش‎ 

صفحه 61:
*_ بررسی نشانگرهای مورفولوژیکی ‎of * ie‏ 07 * اندازهكيرى تعداد جنين و طول و عرض تخمدان و جنين 7 شکل جنینهای حاصله 7 شکل ظاهری برگها *_بررسی نشانگر بیوشیمیایی پراکسیداز 0 © بررسى نشانكرهاى مولكولى از نبيل ‎RAPD. AFLP‏ » Pata etn “RAMEE its», ET 2 AS DT ey 

صفحه 62:
كشت سلول: ‎Cell culture‏ به کشت سلولها در محیط های مایع )بدون آگار( در ظرفهایی که معمولاً باتکان دادن تهویه می شوند. کشت سلولی گویند. 

صفحه 63:
۲ کشت پروتوپلاست : به سلولهای گیاهی بدون دیواره سلولی. پروتوپلاست گفته می شود (دیواره سلولی با روشهای مکانیکی یا شیمیایی از سلول جدا می شود.) از کشت پروتوپلاست برای ایجاد تغیبرات ژنتیکی .هیبریداسیون سلولی استفاده می شود. علیرغم وجود مشکلات تکنیکی که استفاده از پروتوپلاست را در پاره ای از مطالعات محدود کرده است. در حال حاضر از پروتوپلاست در زمینه های تحقیقاتی متعددی به شرح زیر استفاده می شود: ال( ایجاد پیوند پروتوپلاستی بین دو یا چند سلول و تهیه گیاهان دورک با کشت پروتوپلاستهای متحد شده. در برخی مواردی که به دلیل ناسازگاری جنسی و یا فیزیکی امکان تهیه گیاه دورگ با روشهای ژنتیکی معمولی میسر نیست می توان با روش پیوند پروتوپلاست نسبت به ایجاد گياهان دورگ اقدام نمود ب( وارد کردن مواد ژتیکی خارجی به داخل سلول پس از حذف دیواره سلولی. پروتوپلاست مجزا شده می تواند با فرآیندی مشابه با فرآیند آندوسیتوز در بعضی از سلولهای جانوری مواد خارجی را به داخل. سیتوپلاسم جذب نماید. با استفاده از اين روش مى توان اندامکهایی مانند کلروپلاست . میتو کندری ‎DNA‏ پلاسمید و ... را وارد پروتوپلاست کرد. ج) مطالعه نحوه سنتز و ترشح دیواره سلولی. پروتوپلاست کشت شده به سرعت دیواره سلولی تشکیل می دهد. 

صفحه 64:
روش برای تولید گیاهان هاپلوئید در شرایط 189۷16۳0 استفاده می شود. بساك یا گرده تولید گیاهان هاپلوئیدی از ره تحریک تولید جنین از تقسیمات دانه های گرده نابالغ می باشد. سلولهای گياهان هاپلوئید دارای مجموعه کاملی از کروموزمهای تکی است . کروموزمهای منفرد این هاپلونیدها را می توان با استفاده از کلشی سين به صورت دوبل درآورد و در نتیجه دیپلوئیدهای هموزیگوت بارور تولید می شوند. با استفاده از کلشی سین گیاه۲ 80 را می توان ۶ کرد کشت تک جوانه 9006 518916: منظور از کشت تک جوانه . جداکردن یک جوانه به همراه قسمتی از شاخه به منظور تشکیل ساقه از طریق نم جوانه است. اين روش طبیعی ترین روش تکثیر رویشی گیاهان در 880۷16۳0 می باشد .هر جوانه ای در محور برگ مشابه با جوانه نوک شاخه. می توان روی محیط کشت رشد داده شود. * کشت رأس شاخه :6۱۵1600۴6 410 51000۴ رأس شاخه یا قسمت انتهایی ساقه در واقع شامل هر سیستم انتهایی ساقه همراه با چندین پریموردیوم برگهای مجاور می باشد. از اين روش برای تکثیر در سطح وسیع استفاده می شود. 

صفحه 65:
7 کشت مریستم : تنها نقطه ای در گیاه که عاری از آلودگی ویروسی است. مریستم مي باشد. چرا که سرعت و قدرت تقسیم در مریستم به حدى زياد است که ویروسها فرصت تقسیم و رشد بيدا نمی كدت ‎set pent‏ دز ان باق موز ات رازم یره هراجا برای تعداد زیادی از گیاهان زراعی مثل سیب زه اكي نيز از اين روش استفاده شده است . گیاهان عاری از ویروس در برخى كينه ها مثل كيلاس . تمشك و انكور نيز از طريق كشت مريستم به دست آمده است ۲ کشت اندام و بافت: به کشت اندامها و بافتهای مختلف گیاهی نظير بساك. تخمدان. آوند. ريشه .... در محيط هاى مغذى كفته مى شود. کشت کالوس(یا توده های سلولی تمایز نیافته( :کشت قطعات جدا کشت گیاهان بر روی محیط های حاوی آگار که منجر به تولید توده های سلولی آمورف (بی شکل) می گردد را کشت کالوس گویند. فرآیند ایجاد کالوس از یک قطعه گیاهی کشت شده را می توان به ۳ مرحله تکاملی تقسیم کرد: اول شروع تشکیل کالوس. دوم تقسیم سلولی. و سوم تکثیر و تمایز سلولهای کالوس. در مرحله تشکیل کالیس,همزمان با آماده شدن سلولها برای تقسیم. متابولیسم سلولی افزایش می یابد. یکی از عمده ترین مشکلات استفاده از کشت کالوس. ایجاد تنوع می باشد. استفاده عمده کشت کالوس در جایی است که بتوان سلولهای کالوس را از هم جدا نموده و آنها را جهت تمایز به جنین های سوماتیکی القاء نمود. از نظر ريخت شناسى اين جنين ها شبی های بذری (زیگوتی) می باشند. اما برخلاف جنین های بذری.جنین های سوماتیکی از لحاظ ژنتیکی شبیه گیاهان مادری می باشند. یعنی تفرق ژنتیکی وجود ندارد. نکته جالب توجه در این مورد. تولید پذر مصنوعی (سوماتیکی) می باشد که از طریق قرار دادن جنین های سوماتیکی در یک پوشش مناسب. تهیه می شوند. 

صفحه 66:
‎٩‏ .کشت جنین ‎a af OAS lane‏ تولید جنین به تکامل سلول تخم بارور شده محدود نبیده بلکه در بافتهای رویشی کشت شده ‏531 سكارائش تراوش شذه ات امروزه معلوم شده است که تولید جنین یک پدیده عمومی در گياهان عالی بوده و در 3 شده بيش از +" تيره كباهى. توليد جنين از سليلهاى رويشى به طير تجربى ميسر شده است: ‏انارس به دست آمده از بذور دو كاربرد اصلی دارد. در بعضی موارد ناسازگاری بین گونه ها یا ارقام: = واعنجر ید انقط جنین می شود. چلین جنین هایی را در حالت نارس و قیل از سقط بدن فى كران خارج كرده و در شرايط درون شيشه اى آنها را رشد داد. در موارد ديكرى . به دليل ريزش بذر يس از رسيدن و از دست رة 4 بالغ ايجاد نمى كردد يا اينكه بذور در حال تشكيل قبل از بلغ توسط حمله آفات از پین می روند. کشت جنین نسبتاً ساده است. جنين. يك كياه كامل مينياتورى است لذا به تمايز مجدد نو ساقه يا ريشه نيازى نمى باشد. ‎ 

صفحه 67:
باززائی( 686۲۵۲۱09 ۳6) تکنیک های کشت بافت گیاهی به اندازه ای پیشرفت کرده است که با اجرای آن می توان گینه های گیاهی را در شرایط درون شيشه باززائی و تولید نمود. سلولها. بافتها و اندامهای مختلف انتخاب شده ازگونه های گیاهی متعدد را می توان به طور موفقیت آمیزی کشت کرد و از آنها گیاهان کامل تولید نمود.بدون باززائی . مطالعات رشد و تمایز . تولید گیاهانی با اطلاعات ژنتیکی مختلف . کشت بساک: تکثیرسریع گونه های گیاهی مطلوب . حذف بیماریهای گیاهی با استفده از کشت مریستم و بسیاری از مطالعات مربوط به تنظیم های رشد انجام پذیر نخواهد بود. باززائى و توليد كياهان توسط كشت بافت را مى توان به یکی از دو روش زیر انجام داد: 53 

صفحه 68:
اتف هیر ی باشد ار توع يم یلو ‎in oe ad ts Sie benene‏ صورت می گید 2" ت اكر اندامى نظير ريشه يا شاخه به وجود آمد. اين اندام نایجاست چون از مريستم به وجود نيامده است. توجه: قابل توضيح است كه رويائزائى سومائيك با رويانزائى زيكونى (تخمى )قابل مقايسه است , به اين صورت كه در رويائزائى سوماتيك. رويان از سلولهاى بيكيرى يا جسمى به وجود مى آيد نه از سلول تخم. 

صفحه 69:
* در باغبانی کاربرد های کشت بافت در باغبانی به شرح 3 الث) ریزازدیادی یا. ‎ce! cle Micropropagation‏ كار بايد مراحل زير را طى كره: ۱ رفع آلودكى 2( و5661 10و91 تبيت١‏ ۳ ‎gad, 6 ih SL Establishment‏ )9 سازگاری با محیط اولین مرحله در کشت بافت رفع آلودكى است به ا : ید سترون ین روش استفاده از هپو کلرید سدیم (وایتکس) است که با توجه به نوع جدا كشت ( نوشاخه -ساقه - برگ و ..) از رقمها ی مختلف وایتکس استفاده می شود سبس نمونه را جند بار(؟يا ‏ بار) با آب مقطر استريل شستشو می دهیم. در ادامه نموئه ها را پا کاغذ صافی استریل خشک کرده و در مرحله بعدی تییت جداکشت در محیط کشت انجام می گیرد. سپس ظروف نمونه های کشت شده را در اتاقک رشد قرار می دهیم (شدت نور و میزان دمای محیط در اتاقک رشد قابل تتظیم است.) جداکشت پس از تثبيت در محيط شروع به شاخه زانی می کند . باید دانست که از همین شاخه ها نیز می توان به عنوان جداکشت استفاده کرد. معمولاً ماهی یک بار نمونه ها واکشت می گردند(یمنی محیط کشت آنها عوض می شود.) دلایل واکشت کاری عبارتند از : به دنبال کاهش غلظت مواد غذایی در محیط. توازن مواد تشکیل دهنده آن به هم می خورد. * با مصرف مواد غذائى. مواد دفعى و سمى در محيط كشت افزايش مى يابد. * همانطور كه مى دانيم در محيط كشت اول اصولاً از سيتوكنين ها استفاده مى شود( به علت تحريك تقسيمات سلولى) و به دنبال آن اكر هدف تمايز باشد. نمونه ها را به محیط های کشت دارای اکسین می بريم و با توجه به اينكه هورمونها كران قيمت هستند. آنها را در واكشت هاى بعدى و باتوجه نياز . به محيط كشت اضافه مى 

صفحه 70:
"برای تحریک ریشه زائی در نمونه هایی که به خوبی شاخه زائی کرده اند آنها را به محیط های غنی از اکسین می بریم. باید به اين مسئله توجه داشت که تثبیت از سخت ترین مراحل کار است. پس از ريشه دار شدن گیاه می توان آن را به گلدان منتقل کرد. خاک گلدان باید از جنس پرلیت(خاک آتشفشانی) و پیت (خاک مردابی) باشد. نسبت پرلیت به پیت باید ۳ به یک باشد. پس از شستشوی ریشه های گیاه و ياك كردن آگار موجود در سطح آن . گیاه را به گلدان منتقل می در ابتدا رطوبت ‎Luk bow‏ ۱۰۰ باشد به همین دلیل در هفته اول بعد از انتقال باید روی گلدان سرپوشی قرارداد )ساده ترین کار گذاشتن یک لیوان یکبار مصرف شفاف روی گیاه است( . گیاه باید کم كم با محیط سازگار شود. همانطورکه می دانیم گیاهی که قبلا در محیط کشت به سر می برده گیاهی هتروتروف بوده (از مواد غذایی محیط کشت استفاده می کرده است) که باید به گیاهی اتوتروف تبدیل شود(یعنی فتوسنتز کرده و قند تولید نماید.) ب) عاری سازی گیاهان از ویروس ) توليد متابولیتهای انویه :اگر در تولید گیاهان داروئی از روشهای کشت بافت استفاده شود می توان گیاهانی تولید کرد که خواص داروئی بیشتری دارند به اين ترتیب که به عنوان جداکشت از قطعاتی استفاده شود که متابولیتهای انویه بیشتری تولید می کنند در نتیجه گیاهان باززائی شده حاصل. متابولیت انویه بیشتری تولید می نمایند. 

صفحه 71:
* در اصلاح نباتات سلولهای گیاهان هابلوئيد فقط دارای یک سری کامل از کروموزمهابوده و کاربرد آنها در برنامه های اصلاح ‎4S) ELS‏ به منظور انتخاب صفات مطلوب اجرا می شوند) بسیار مفید واقع می گردد. فتوتیپ گیاهان هاپلونیدعبارت از تظاهر یک نسخه از اطلاعات ورائثتی می باشد که در آن هیچ گونه نهفتگی صفات بوسیله ژنهای غالب وجود ندارد. کاربردهای کشت بافت در اصلاح نباتات عبارت است از: الف) تنوع ‎(Somacional variation )_<su.‏ وقوع این پدیده از دیدگاه اصلاح نباتات موثر و مناسب است چرا که می توان سلولهانی با توانائی های خاص ایجاد کرده و کشت داد. (به طور مثال می توان نمونه های مقاوم به خشکی ایجاد نمود.) ب) ایجاد دایل هاپلوئید نیک های متعددی جهت دو برابر کردن عدد کروموزمی گياهان هاپلونید وجود دارد. از جمله باززانی با استفاده از روشهای گیاهی . كه در اين روش مى توان از بافت برك مسن كياهان هاپلونید استفاده کرد. از طرفی عدد کروموزومی را می توان با اضافه كردن کلشی سین به جنین یا گیاه هاپلوئید. دوبله کرد. 

صفحه 72:
3 نكهدارى جرم بلاس (2135133] 86۲۲۷)) به حالت منجمد يا (6۳۷۵۳۲۵۵۵۲۷۵۸:۷6) در سالهای اخیر تیجه زیادی به چگونگی ذخیره كردن جرم پلاسم شده است. چرا که عوامل گوناگونی از جمله هجوم آفات نباتی و پاتوژنها. شرایط اقلیمی . ناسازگاریهای محیطی و بلایای طبیعی موجب ابودی جرم پلاسم می گردد . از طرفی بذر اکثر محصولات زراعی مهم تحت شرایط سیستم های متداول . قوه خود را درمدت کوتاهی از دست می دهند. باتهجه به موارد بالا ضرورت وجود بانک ژن آشکار میگردد. در بانک ژن ذخایر ژنتیکی هر کشور حفظ و نگهداری میگردد. ** شرایط نگهداری جرم پلاسم باید به گونه ای باشد تا تقسیم سلولی در آن متیقف شود. براى نيل به اين هدف مواد كياهى بايد در ازت مایع ( ۱۹3 انبار شوند. نگهداری جرم پلاسمها در اين دما برای مدت زمانی نا محدود امکان پذیر است. باید دانست که يخ زدن در ازت مایع از نوع شیشه ای است یعنی متابولیتهای متابولیکی کاهش می یابد ولی در فریزرهای معمولی. یخ زدن از نوع کریستالی است. 

صفحه 73:
=" د) تولید بذر مصنوعی ‎Artificial seed‏ یکی از اهداف رویانزایی سوماتیک . تولید بذر مصنوعی است . پس از آنکه یکی از سلولهای پیکری (سوماتیک) مانند سلولهای پارانشیم یا حتی قطعات رویان تخمی به رویانزایی رفت ۰ مراحل تشکیل رویان را می گذراند (شامل مرحله بیش رویانی. مرحله رویان گویچه اى. مرحله تمایز سلولی و مرحله تشکیل روبان لیه دار.) در مرحله رویان لپه دار. رویان را به کپسولهای کوچکی که دارای محبط کشت و مهار کننده های رشد است. انتقال داده در این حالت به آن بذر مصنوعی گفته می شود. می توان به جای مهار کننده های رشد. بذر ها را در سرما قرار داد. سرما مانع رویش رویان می گردد. پوشش روی بذرهای مصنوعی از ماده ای ژله ای به نام آلژنیات سدیم است. ۰ انتقال ژن و مهندسی ژنتیک به مجموعه روشهایی که توسط آنها همانند سازی و ساخت قطعاتی از 8104 انجام مى پذیرد تا جهت مقاصد صنعتی . پزشکی و مورد استفاده قرار گیرد. مهندسی ژنتیک گفته می شود. به دنبال موفقیت در انجام کشت بافت . روشهای انتقال ژن ابداع و به كاركرفته شد. دراین روشها. ژنهای خاصی به یک سلول یا پروتوپلاست اضافه می گردد. به طور مثال با انتقال زن مقاوم به سرما به كياه. گياهان مقاوم به سرما ایجاد می گردد. 

صفحه 74:
ان ز یکی از کاربردهای مهم کشت بافت گیاهی. سرعت بخشیدن به تکثیر رویشی گياهان زینتی می باشد.با استفاده از تکنیک های کشت سلول. امکان تولید سریع گیاهان مشابه وجود دارد مراحل اصلی فرایند تکثیر درون شیشه(10۷1۴۳0) الف) تهیه کشت های استریل. اين مرحله اغلب به دلیل آلودگی و تولید ترکییات فتولی توسط جداکشت . مشکل است با این حال در این مرحله باید تعداد مناسبی ریز نمونه زنده مانده و روی محیط کشت رشد کنند. آب) تکثیر تعداد زیادی اندامک هوایی. عموماً افزودن سیتو کینین. تولید اندامک هوایی از جوانه های جانبی موجود و یا جوانه های ابجای برگ, ساقه دمیرگ ونیز تشکیل جنین های سوماتیکی را افزایش می دهد. ج) انتقال گياهان به خاک. عموماً از یک اکسین برای ریشه دار نمودن اندامک هوائی حاصل استفاده می شود. برای اکثر گياهان این مرحله با قراردادن آنها در ‎oak‏ در خاک گلدان انجام می كيرد. <) قلمه های ریشه دار شده از لوله هاى آزمايش برداشته شده و آكار آنها به آرامى شسته مى شود. اين قلمه هاى ريشه دار شده در خاک گلدان با رطوبت بالا و در سايه كشت مى شوند. معمولاً بعد از دو هفته مى توان آنها را در شرايط نور بيشتر و رطوبت كمتر قرارداد. "7 در اغلب كياهان ريزازديادى نسبت به روشهای تکثیر مرسوم. مزیت دارد. سودمندی اصلی تکثیر غیر جنسی . تولید گیاهان یکسان ژنتیکی از یک رقم مى باشد. گیاهان مادری مطلوب را می توان انتخاب نمود و هزاران کلون یکسان از آنها تولید کرد. اهمیت این مسئله زمانی مشخص می شود که هدف تکثیر يك كل بارنكى خاص باشد. تكثير از طريق بذر باعث تنوع رنگ خواهد شد. اما ت جنسى كياه كل قرمز تنها توليد كياهان كل قرمز مى كند. 

صفحه 75:
‎ee‏ ی ‏کشت بافت ‎I i} 1 ۲ (invitro)‏ 1 1 خاصیت توتی پوتنسی 708 ۱ ‎١ ۱ mee‏ ا ‎(potency ‎ ‎“RAM: ‏ع ل اك‎ EET 5 AS OD 8 

صفحه 76:
ریز ازدیادی اندام های گیاهی "۲ تولیدگیاانی با اطلاعات ژنتیکی جدید. “” منجمد کردن کشت های بافت گیاهی و تاسیس بانک های ژنی تولید گياهان کاملا هموزیگوس(هاپلونید و دیپلونید) 7" کشت سومپانسیون سلولی و تولید متابولیت های اولیه و نیز متابولیت های ثانویه # ایجاد گیاهان با خصوصیت جدید با استفاده از تنوع سوماکلونال با استفاده از كشت جنين هاى نارس در تلاقى بين كونه أى ابه كياهان بافت شناسى «سلول شناسى وفيزيولوذى كياهى دست ورزی ژنتیکی و دورگه گیری سوماتیکی 

صفحه 77:
سا" کشت جنین های جدا شده از تخمک در مراحل مختلف رشد أل تمایز در اين روش صورت نمیگیرد. 

صفحه 78:
٩ ۳ ba ۱ ژنوتیپ مرحله نمو جنین در هنگام جداسازی شرایط رشد گیاه مادری ترکیب محیط کشت 0 2 "!2 ك5 100077 

صفحه 79:
ريز ازديادى اندام هاى ‎)١‏ رفع ناسازكارى هاى بعد از تشكيل جنين بين ارقام ‏۲ استفاده از گنجینه ژنی گونه هایی که ریزش ‏بذر قبل از رسیدگی را دارا ميباشند. ‎ 

صفحه 80:
رین تاریرد "تولید هیبریدهای کمیاب " تولید گیاهان هاپلویید 7 کوتاه نمودن دوره اصلاح گیاه ” ازدياد كياهان نادر ۲ نجات جنين rs 7 7 se 7 78 

صفحه 81:
ریز ازدیادی اندام های گیاهی * كش جوانهلاتهايم وجانبی: عدم وجود مرحله کالوس 7 کمتر بودن حجم کار 7 کاهش خطر ایجاد جهش و تنوع سوماکلونال مطمئن و بی خطر برای حفظ خصوصیات مادری 

صفحه 82:
ریز ازدیادی اندام های گیاهی کشت تک گره (جوانه) 

صفحه 83:
* کشت‌تکد گره(جوانه) روش کار: جداسازی جوانه های تشکیل شده در زاویه دمبرگ ها و برگ های جوان به عنوان ریز نمونه پس از تولید اندام رویشی و شاخه های کافی آن ها را ريشه دار نموده و نهایتا پس از مرحله سازگاری. آن ها را به خاک منتقل می کنند. هدف از این کشت . رشد اندام هیایی از جوانه می باشد. 

صفحه 84:
* نکات مهم‌درکشت تک گره ۲ وقتی که گیاهان روزت هستند یا زمانی که امکان آلودگی زیاد باشد. استفاده از روش کشت تک جوانه. امکان پذیر نیست. ۲ بهترین جوانه ها برای کشت . به منظور جلوگیری از آلودگی . جوانه بسته می باشد. ۲ سرعت تکثیر يا ریز ازدیادی بستگی به تعداد جوانه های موجود بر روی گیاه ایلیه دارد. ۷ در هنگام کشت تک جوانه .بایستی خواب جوانه شکسته شود. 

صفحه 85:
ریز ازدیادی اندام های گیاهی در اين روش نوک ساقه جانبی را به عنوان ریز نمونه جدا می کنند وگیاه اولیه را با غلظت زیاد سیتو کینین مواجه میکنند غلظت بالای سیتوکینین. موجب توقف خاصیت غالبیت انتهایی شده و به جوانه های جانبی اجازه رشد می دهد پس از تولید تعداد زیادی جوانه جانبی ۰ هر کدام را می توان جدا کرده و به محیط کشت جدید حاوی سیتوکینین انتقال می دهیم. غلظت میتوکینین مصرفی در این روش به سن بافت ریزنمونه بستگی دارد بدین معنی که هر چه ریزنمونه جوان تر باشد. سیتوکینین کمتری می طلید. نسبت سیتوکینین به اکسین را معمولا ۱۰ به ۱ در نظر می گیرند. 

صفحه 86:
روش کار: برداشت ریز نمونه ای حداکثر بطول یک میلی متر از ناحیه مریستمی ساقه گیاه.اندازه ریز ادی برخوردار است. زیرا برای حفظ سلامت گیاهی که اندازه ریز نمونه ۰/۲۵ میلی متر می‌باشد. در حالیکه موفقیت استقرار این اندازه بیشتر است. اما خطر باقی ماندن عوامل آلودگی نمونه برداشت شده از اهمیت. باززایی می‌شود بهترین و رشد ریز نمونه‌های ‎Sox‏ | افزایش می‌یابد. * ابن روش به دليل ضعيف بيدن غالبيت انتهابى و بالا بودن قابليت ريشه دهى در كياهان علفى . نسبت به كياهان چوبی بیشتر موثر است * استفاده در تكثير كياهان عارى از ويروس 1/1/6 ‏ع ل‎ 17220227 2 AS DT ey 84 

صفحه 87:
ات سس 1 کشت ان اساس این روش تشکیل شاخساره بر روی ریزنمونه‌های مختلف مثل برگ. دمبرگ. گره چا میان گرهها و لپهها است. در این سیستم جوانههای نابجا یا ستقیماً بر روی ریزنمونه تشکیل میشوند يا اينكه بر روی ریز نمونه ابندا کالوس تشکیل میشود و سپس. شاخسارهها بر روی کالوس تشکیل میشوند. در صورت دستیابی به یک پروتکل با کارایی بالاه ميزان تكثير در اين روش در مقایسه با روش تکثیر از طریق جوانه‌های انتهایی و ج نمی بسیار 4 Pye sn ET tT AST 7 8 

صفحه 88:
۲ * کشت کالوس کالوس : اگر یک بافت تمایز یافته جدا شود و در شرایط آزمایشگاهی تولید یک توده سلولی تمایز نيافته به نام کالوس نماید. اين يديده را کشت کالوس می‌نامند. به طور کلی کشت های سلولی که منجر به پدید آمدن کالوس میشود کشتهای کالوس نامیده میشود. معمولا در ریزازدیادی بهتر است که از تشکیل کالوس جلوگیری شود به علت اينکه کالوس باعث ایجاد تنوع می‌شود. is, aE s,s AS 7 58 

صفحه 89:
ریز ازدیادی اندام های گیاهی انايى باززايى 0 دیگر کالوس ها دارند غيرجنين زا ل ناصاف انواع کالوس در محیط کشت جنين زا: اغلب ابکی و دارای سلول های کشیده هستند و هسته حجم کمی از سلول را اشغال می کند. 

صفحه 90:
ریز ازدیادی اندام های گیاهی کالوس باید به محیط کشتی منتقل شود که شرایط مناسب داشته باشد در غیر این صورت کالوس قهوه ای رنگ و رشد چندانی نخواهد داشت اگر رشد اندک در اثر الودگی نباشد دو روش براى رفع اين مشكل وجود دارد: ار ‎)١‏ قطعات پر بنیه تر و شکننده تر کالوس انتخاب شده و به طور معمول واکشت شدند ‏۲ محیط کشت تعویض شود 

صفحه 91:
کشت سهسیاشیون‌سلط کشت سوسپانسیون سلولی. شامل توده‌های سلولی پراکنده و در حال رشد در محیط کشت مایع و جنبان سلولی با نتقال کالوس به محیط کشت مایع (دارای ترکیب مشابه با محیط کشت کالوس) و تکان دادن آرام سوسپانسیون با استفاده از شیکر افقی با سرعت ۱۰۰دور در دقيقه و در دمای ۲۵ درجه ی سانتی گراد به دست می آید.در این حالت سلول های کالوس ها ازهم جدا می شوندو تولید سوسپانسیونی از سلول ها می کنند که دارای تجمعی از سلول ها با تعداد و اندازه های مختلف هستند و سلیل های انفرادی را نیز شامل می شوند. به منظور تولید سلول های یکنواخت می توان از سوسپانسیون سلولی استفاده کرد سلول ها در اين روش کشت بصورت توده ای رشد کرده و با توج به اینکه همه ی سلول ها به طور یکسان در تماس با محیط کشت هستند سرعت رشد بیشتری دارند و به طور یکنواخت رشد یکی از مشکلات عمومی در ایجاد سوسپانسیون سلولی جدا نشدن تیده ی کالوس یا هیه ای شدن سریع آن است.به منظور رفع اين مشکلات مى توان به انتخاب سلول هایی اقدام کرد که در محیط کشت کایع قادر به رشد باشند يا اينكه تركيبات محیط کشت را تغییر داد. 

صفحه 92:


صفحه 93:
** رو شانتخاب سلول وكشت سوسياسيونسلولر 2 به منظور انتخاب سلول هاى مناسب.مقدار يك كرم (تي ده هایی به اندازه ی يا نخود) کالوس شکننده و کرم رنگ در داخل مقدار اندكى از محیط کشت مایع (۱۰ میلی لیر در یک فلاسک مخروطی ۵۰ میلی لیتری) که از نظر تركيبات.مشابه كشت قبلى کالوس باشد.قرار داده می شود.سلول هایی که در حجم زیادتری از میحط کشت قرار می گیرند به دلیل آب گیری و تورم:قدرت زنده ماندن کمتری خواهند داشت.فلاسک روی یک شیکر افقی قرار داده می شود و در شرایط استاندارد رشد و با سرعت ۱۰۰ دور در دقیقه حرکت می کند.پس از یک تا دو هفته.مقدار اندکی از محیط کشت تازه (۱۰-۵ میلی ایتر) به موجودی فلاسک ها اضافه می شود.اضافه کردن محیط کشت تازه تا زمانی ادامه می یابد که از نظر ظاهری سوسپانسیون حالت سوپی شکل داشته باشد و مشخص شود که سلول ها از کالوس جدا و در محیط کشت پراکنده شده اند. ممکن است لازم باشد که سوسپانسیون سلیلی به فلاكس ‎٠٠١‏ ميلى ليتر مخروطى منتقل شود.سپس سوسپانسیون موره نظر در محيط هاى تازه واكشت مى شود ولی مقدار ماده ی تلقیح به محيط كشت بايد به نسبت 1:1 باشد.اين روش تا زمانی ادامه می یابد که سوسپانسیون سلیلی هیچ کمبود یا کاهشی در رشد نشان ندهد و سوسپانسیون قوی و پر تراکمی را ایجاد کند. 

صفحه 94:
۳ ‎ *‏ ازمشکللات کشت‌سوسپانسیون ‏0 یکی از مشکلات اساسی در نگهداری سوسپانسیون های سلولی,وقوع آلودگی هایی است که غیر قابل تشخیص باقی می مانند و شم الست وك عه لي ها بط ولد ا د م د ا هرا دور کر رنه اف از ‏ت لامینار ایرفلو به هنگام انتقال.جداسازی سلول ها به منظور تغییر یا استریل نامناسب ظرف ها و وسایل مورد استفاده (ما اسک ها و پیت ها) باشد.بر این اساس ضروری به نظر میرسد که همه ی کشت ها قبل از استفاده‌برای آلودگی مور بررسی دقیق ‏قرار گیرند. ‏اگر محیط کشت شفاف بنظر برسد.نشان از عدم آنودگی است,ولی اگر طیف آپی در آن مشاهده شود.در اینصورت محیط کشت دارای آلودگی باکتریایی است.همه ی کشت های مورد شک باید حذف شوند.در غیر اینصورت آلودگی به سرعت در ميان كشت های آزمایشی و محلول ذخیره سرایت خواهد کرد.آلودگی های قارچی پیشتر وقت ها بصورت گلوله های هیف در محیط کشت و آلودگی های مخمری به صورت رنگ کرم در سوسپانسیون سلولی مشخص می شوند.بررسی میکروسکوپی کشت مایع در اثبات وجود آلودگی کمک می کند.حتی در سطوح تندک آلودگی.سلول های گیاهی قهوه ای بنظر میرسند و رشد کشت ها کاهش چشمگیری می یابند. ‎ 

صفحه 95:
ريز ازديادى اندام هاى * تحریک کننده های رشد:اکسین هاء جيبرلين هاء سيتوكنين ها *_بازدارنده های رشد: اتیلن. اسید آبسیزیک 

صفحه 96:
*** ويزك های‌فیتوهورمون‌ها(هورمون‌های‌گیاهی) در مقدار خيلى كم موثرند ( براى مثال 7../. كرم در ليتر ) در يك نقطه از كياه توليد مى شوند. براى اثر كذاشتن به نقطه ديكر كياه منتقل مى شوند. نكته: اختصاصى بودن عمل هورمون ها و تاثير آن روى يك اندام خاص كه در هورمون هاى جانورى ديده مى شود در هورمون هاى كياهى ديده نمى شود. ( تقسيم وظايف و تمايز در كياهان كمتر از حيوانات است). به طور معمول روى واكنش هاى فيزيولوزيك كياه موثر است يا موجب انجام اين واكنش ها مى شود 

صفحه 97:
a eee " " رشد و تقسيم سلولى مكاسم " تولید ‎a‏ و يا القای جنین زایی سوماتیکی " القای کالوس ۲ رشد طولی ساقه و میان گره و ريشه زایی ” غالبیت انتهایی ye sn ET ‏.تن‎ 00011 

صفحه 98:
ریز ازدیادی اندام های گیاهی ایجاد پیری زودرس ‎a‏ خیر در وقوع پیری ساقه زایی 7" تسریع در جوانه زنی و شکستن خواب ریزش برگ و میوه ضد غالبیت انتهایی مشوق ایجاد خواب در بذور 7 نکته: درکشت بافت استفاده چندانی ندارد. 

صفحه 99:
جیبرلین هاز جلوگیری از اندام زایی هیرمون گازی شکل است که معمولا به محیط کشت اضافه نمی ۲ افزایش ‎Wed dle dhol‏ شود. چون خود گیاه پس از مدتی تولید اتیلن * رشد طول ساقه ها نکته: اسید جیبرلین به گرما حساس است و قابل اتوکلاو شدن ندارد. 

صفحه 100:
تولید انبوه و سریع یک رقم مطلوب و یا رقم های جدید. افزایش محصول از طریق گیاهان عاری از ویروس است گیاهان تکثیر شده به روش کشت بافت از قدرت رشد بالایی نسبت به گیاهانی که به روش سنتی تکثیر میشوند برخوردارند یا آن گروه از گیاهانی که با روش های سنتی به سختی تکثیر شده و یا از نظر اقتصادی مقرون به صرقه نیستند تکثیر و تولید تعداد زیادی از کلین های با ژنتیک معین پذور از ریسک کمتری برای جوانه زدن برخوردارند آزاد شدن از قیود اقلیمی موجود از نظر فصل و زيست كاه ودر تمام طيل سال ميتوان كياه توليد کرد حمل ونقل مواد كياهى را راحتر ميكند تكهدارى دراز مدت و ميان مواد گیاهی تكنيك هاى كشت بافت در توليد كياهان عارى از ويروس . دستکاری ژنتیکی . هيبريداسيين .سوماتيكى . اصلاح نباتات و مطلاعات يايه استفاده ميشود ع > > > 

صفحه 101:
كشت بافت به دليل مزاياى فراوانى كه دارد در دهههای اخیر موردتوجه بسیاری از کشاورزان و توليدكنتدكان قراركرة مزيتهاى اين روش كشت در كياهان نسبت به روش‌های سنتی عانند کشت مستقیم بذر و قلمه زدن می‌توان به موارد زیر اشاره کرد: ١.نهليد‏ تیراژ بسیار زیاد از تعداد کمی گیاه در مدت‌زمان کوتاه ۲. انتقال خصوصیات گیاه مادر به نسل‌های بعدی در اصلاح نباتات و تولید گیاهان ۳ تولید گياهان عاری از باکتری و ویروس و احیا گیاهان در معرض انقراض #گياهان زینتی مانند رز هلندی. گل محمدی. استویا و گیاهان آکواریومی در اکثر مناطق دنیا با روش کشت بافت تکثیر می‌شوند. ها را نير ميتهانيد با روش كشت بافت تکثیر کنید. 

صفحه 102:
ittps://abanagri.com/plant-tissue-culture-techniques-applications-adva iL . ‏خوشخوی م . ۱۳۷۷ فنون کشت بافت گیاهی برای گیاهان باغبانی . انتشارات دانشگاه شیراز‎ . ‏وصال . باقری . ۱۳۸۲ . عملیات کشت بافت گیاهی از انتشارات دانشگاه امام رضا‎ باقری . صفاری . ۱۳۷۶. مبانی کشت بافت های گیاهی از انتشارات دانشگاه فردوسی . پیری . نصریان فیروز آبادی . ۱۳۸۰. راهنمای کشت بافت گیاهی . انتشارات دانشگاه بوعلی سینا همدان حسین دخت . م۰ ر. ۰۱۳۸۰ بررسی تولید گیاهان هاپلویید . انتشارات دانشگاه تهران . حسین دخت . م.ر . ۱۳۸۵ . مبانی کشت بافت گیاهی . انشارات دانشگاه تربیت مدرس 

صفحه 103: