دانلود پاورپوینت مروری بر بیماری بروسلوزو واکسن سویه RB51

مروری بر بیماری بروسلوزو واکسن سویه RB51 نامهای دیگر تب مواج تب مالت تب مدیترانه سقط جنین مسری یا سقط جنین واگیر گاوان سبب شناسی این بیماری از بیماریهای مشترک بین انسان و دام است. عامل بیماری باکتریهای خانواده بروسال Brucellaمی باشند. بروسالملی تنسیس (در گوسفند و بز)BRUCELLA. mellitancis بروسال آبورتوس (در گاو) BRUCELLA.abortus بروسالسوئیس (در خوک)suis. BRUCELLA باکتری گرم منفی ،بدون هاگ،غیر متحرک عالئم بیماری انسان عمومًا دوره کمون بیماری یک تا 3هفته طول می کشد ،ولی ممکن است تا چند ماه نیز به طول انجامد .بیماری عمومی شبیه آنفوالنزا با شروع ناگهانی و غافلگیر کننده که با تب مداوم، متناوب یا نا منظم همراه می باشد .در بروسلوز حاد ،تب ،لرز و عرق زیاد توام با دردهای عضالنی ،بی قراری عمومی ،ضعف ،بی خوابی ،سردرد ،درد مفاصل ،بی اشتهایی و یبوست تظاهر می کند .بیماری اثر زیادی بر سیستم عصبی داشته و به اشکال بی حوصلگی ،عصبانیت و افسردگی متظاهر می شود .در بسیاری از بیماران هیپرتروفی غدد لنفاوی محیطی و بزرگ شدن طحال (اسپلنومگالی) و کبد (هپاتومگالی) و ندرتًا زردی اتفاق می افتد. طول دوره بیماری ممکن است از چند هفته یا ماه تا سال و در ارتباط با روشهای درمانی متفاوت باشد .در اشکال مزمن عوارضی جدی چون جراحات دریچه قلب ،آندوکاردیت ،آبسه های استخوانی ،کبدی یا دیگر اعضاء ،آنسفالیت ،مننژیت ،آرتریت چرکی ،اسپوندلیت و غیره ممکن است ظاهر شود. سردرد،بیخوابی ، عصبانیت عالئم بیماری حیوانات نشانی اصلی در تمامی حیوانات (به ویژه نشخوار کنندگان) ،سقط جنین یا زایش زود رس است .دوره کمون متغیر بوده و نسبت معکوس با سیر تکاملی جنین دارد .هر چند آبستنی پیشرفته تر باشد ،دوره کمون کوتاهتر است. عمومًا سقط جنین در نیمه دوم دوره آبستنی اتفاق افتاده و غالبًا با جفت ماندگی و بدنبال آن متریت همراه بوده که ممکن است به عقیمی منجر شود .خسارت حاصله از عفونت در نتیجه کوتاه شدن دوره شیرداری ناشی از سقط جنین و به تعویق افتادن باروری بعدی به میزان 20تا 25درصد تولید شیر تخمین زده می شود .به ویژه حیوانات نشخوار کننده به هنگام آبستنی بسیار حساس بوده، معموًال آلوده و به سقط جنین دچار می شوند .احتماًال عفونتهای مزمن سیستم ریتکولو-آندوتلیال ،دستگاه تولید مثل ،استخوان و دیگر نسوج اتفاق می افتد. سقط جنین و آلودگیهای رحم(کوتیلودونهای رحم نکروتیک به رنگ زرد متمایل به خاکستری همراه با اکسودای قهوه ای) جفت ماندگی و مشکالت دستگاه تناسلی بدنبال سقط جنین موضعی شدن میکروب در بیضه ها تورم مفاصل وموضعی شدن میکروب در درکیسه های مفصلی گوساله افراد در معرض خطر ‏کشاورزان و دامپروران ،دامپزشکان ،دامداران ،کارکنان کشتارگاه و بسته بندی گوشت و فراورده های حیوانی و صنایع تولید و تحویل شیر در معرض خطر ابتالی بیشتری هستند .دامپزشکانی که به درمان گاو اشتغال دارند بیش از سایر دامپزشکان در معرض خطر هستند(تماس نزدیک با گاو به خصوص هنگام زایمان).در ایران دو گونه بروسالآبورتوس در گاو و بروسال ملیتنسیس در گوسفند و بز شایع بوده که قابلیت انتقال متقاطع و انتقال به دیگر حیوانات را دارد. پیشگیری و کنترل بیماری واکسیناسیون دامها ،شناسایی کانونهای آلوده،رعایت بهداشت دردامداریها تشخیص بیماری در حیوانات ،تست های منظم ساالنه،معدوم کردن حیوانات ناقل گزارش کردن بیماری در مناطق آلوده ومستند سازی جلوگیری از تماس انسان با حیوان مبتال یا حداقل رساندن آن پاستوریزه کردن تمامی شیرها روش تست وکشتار روش تست و کشتار ازآنجاییکه در این بیماری عالیم بالینی خاصی در معاینه دام مشاهده نمی شود بایستی طبق برنامه ملی سازمان دامپزشکی کشور ،عملیات تست وکشتار انجام دهیم . برای انجام این عملیات از سیاهگ دمی خونگیری میشود و سپس با آزمایشات سرولوژی بیماری تشخیص داده میشو د. در موارد مثبت،دام به کشتارگاه ارجاع می شود. نقش واکسیناسیون در مبا رزه بر علیه بیماری در مبارزه عليه بروسلوز گاوي ،واكسيناسيون نقشي اساسي دارد .تاكنون واكسن‌هاي متعددي از سويه‌هاي زنده يا كشته بروسال آبورتوس ،بروسال ملي تنسيس و حتي بروسال سوئيس جهت ايمن‌سازي گاو مورد استفاده قرار گرفته است. مهم‌ترين اين واكسن‌ها را واكسن زنده سويه 19بروسال آبورتوس ،واكسن زنده و كشته سويه 20/45بروسال آبورتوس ،واكسن زنده سويه موكوئيدي 104Mبروسال آبورتوس ،واكسن كشته H38بروسال ملي تنسيس ،واكسن زنده سويه Rev.1بروسال ملي تنسيس ،واكسن زنده سويه S2بروسال سوئيس و واكسن زنده S.105بروسال سوئيس شامل مي‌گردند .از فراكسيون‌هاي آنتي‌ژني سويه‌هاي مختلف بروسال با موفقيت نه چندان چشمگير نيز استفاده شده است واکسن S19؟ . از بين واكسن‌هاي فوق‌الذكر ،واكسن تهيه شده از سويه 19بروسال آبورتوس ( )S.19واكسن انتخابي ايمن‌سازي عليه بروسلوزگاوي بوده و با باالترين ميزان مصرف در سطح جهان ،در مبارزه عليه بيماري موثر بوده است. در ايران نيز واكسن سويه 19از سال 1332به بعد به طور وسيع در گوساله‌ها و در دهه 1370به طور محدود در گاوهاي بالغ و آبستن مصرف شده است. طي سال‌ها واكسن سويه 19بر روي محيط جامد و در دو دهه اخير بر روي محيط مايع و به وسيله فرمانتور توليد مي‌شود . سویه RB51چیست ? در سال 1982سويه جهش يافته ( موتانت ) راف تحت نام RB51از سويه زهرآگين (حاد) 2308بروسال آبورتوس به وسيله دكتر گرهارت شورينگ از دانشگاه ويرجينيا توليد گرديده. . سويه RB51به وسيله سازمان دامپزشكي كشور از طريق يك شركت خصوصي تهيه و در اختيار بخش بروسلوز موسسه رازي قرار گرفت .پس از بررسي‌هاي اوليه و تعيين محيط كشت مناسب ،از كشت 48ساعته اين سويه با شير بدون چربي در آمپول به صورت ليوفيليزه تهيه و در يخچال +4درجه سانتي‌گراد نگهداري شد. ویژگی های این واکسن واكس زنده سويه RB51بروسال آبورتوس در محيط جامد آگار توليد شده و از نظر خلوص و بي‌ضرري مورد ارزيابي قرار گرفته است .سويه RB51از طريق پاساژ مكرر سويه 2308حاد بروسال آبورتوس بر روي محيط آگار تري‌پتي‌كيس با غلظت‌هاي مختلف ريفامپين و پني‌سيلين مشتق شده است. اين سويه خشن ( راف ) بوده ،رنگ كريستال ويوله را جذب نموده و در آكريفالوين اتو آگلوتينه مي‌شود .ليپوپلي ساكارايد سويه RB51فاقد پروزامين زنجيره – Oبوده و قابليت توليد آنتي‌بادي هومورال را ندارد. علي‌رغم عدم وجود زنجيره – Oليپوپلي ساكارايد در سويه ، RB51 پروتئين‌هاي غشاء خارجي آن قابليت ايمني‌زايي مناسبي را دارا مي‌باشند. سويه RB51با ثبات بوده و عدم برگشت‌پذيري آن به شكل صاف ( اسموس ) در بررسي‌هاي آزمايشگاهي ( ) in vitroو بر روي حيوان زنده ( ) in vitroبه ثبوت رسيده است .نيازهاي رشد اين سويه مشابه ديگر سويه‌هاي بروسال آبورتوس و به ويژه والد خود سويه 2308بوده و در Ph معادل 7رشد مناسبي دارد .در آزمايش‌هاي كنترل كيفي 5شماره واكسن، درجه خلوص ،حالت راف ثابت ،متوسط غلظت سلولي در ميلي‌ليتر و كاهش 15تا %20در ليوفيليزاسيون متناسب تشخيص داده شد .ميزان درصد جرم سلولي حفظ شده بعد از خشك شدن به طور متوسط 80تا %85بوده است .آزمايش بي‌ضرري واكسن بر روي خوكچه‌ هندي و در مقايسه با واكسن S.19و استانداردهاي مربوط به آن ارزيابي و مناسب شناخته شد .بررسي قابليت ايمني‌زايي واكسن در مدل آزمايشگاهي و ميزبان اصلي ادامه دارد. تهیه محیط کشت محيط بروسال آگار شركت BBLو محيط پايه بروسال از شركت Oxoidبه نسبت مساوي با افزايش گلوكز تا 9گرم در ليتر و آگار تا 24گرم در ليتر با pH معادل 8/6تا 2/7جهت كشت واكسن مورد استفاده قرار گرفت. همچنين محيط سيب‌زميني حاوي پپتون ،گلوكز و گليسيرين نيز در pHنهايي 2/7به كار گرفته شده است. جهت تهيه بذر اوليه از بروسالآگار خالص يا محيط سيب‌زميني استفاده شده است. كشت واكسن نيز با مايع بروسال براس شركت Difcoانجام گرفت. محیط کشت کنترل از محيط‌هاي بروسال آگار ،آگار معمولي ،آگار سيب‌زميني ،آگار سابورو ،آگار مك‌كانكي و تيوگلي كوالت در لوله و همچنين آگار خوندار به نسبت %10خون گوسفند و بروسال آگار در بوآت دوپتري استفاده شده است. آزمایش بی ضرری براي هرشماره واكسن تعدادي خوكچه‌ هندي با دز جرم زنده باكتري معادل تا دز گوساله تزريق شده و تحت بررسي قرار گرفته است. زمايش بي‌ضرري به طور مقايسه‌اي با واكسن S.19و به ميزان استاندارد دز گوساله انجام شده است. آزمايش بي‌ضرري با هر دونوع واكسن مايع و ليوفيليزه انجام پذيرفت. واکسن لیوفیلیزه كشت مطلوب واكسن با مايع برداشتي نگهدارنده و برمنوال شمارش پرگنه و غلظت آن جهت ليوفيليزه كردن در شرايط سرما ،خالء و خشك شدن قرار مي‌گيرد. نتایج ‏ ‏ ‏ سويه RB51در محيط‌هاي كشت جامد بروسال آگار و سيب‌زميني به خوبي رشد كرده و كشت 48تا 72ساعته آن مناسب مي‌باشد اين سويه قابليت جذب رنگ كريستال ويوله را داشته و با آكريفالوين اتوآگلوتينه مي‌شود .سويه RB51نياز به گاز CO2جهت رشد ندارد .در كشت‌هاي مكرر اين سويه پس از 17بار در محيط آزمايشگاهي ( ) in vitroهيچ‌گونه تغيير كيفي ايجاد نشده ،هرچند كه ثبات و عدم برگشت‌پذيري آن به وسيله بسياري از پژوهندگان مورد تاييد بوده است . نيازهاي رشد اين سويه مشابه ديگر سويه‌هاي بروسال آبورتوس ،به وسيژه سويه والد 2308بوده و در pHمعادل 7رشد مناسبي دارد .آزمايش‌هاي كنترل كيفي 5شماره واكسن در حجم كم ،درجه خلوص، حالت راف ثابت ،متوسط غلظت سلولي در ميلي‌ليتر و كاهش 15تا %20در ليوفيليزاسيون متناسب تشخيص داده شده است .ميزان درصد جرم سلولي حفظ شده بعد از خشك شدن به طور متوسط 80 تا %85بوده است .باتوجه به اين كه سويه RB51راف بوده ،احتماًال توليد آن در محيط مايع و فرمانتور مناسب به وسيله كادر مجرب نيز امكان‌پذير خواهد بود .آزمايش بي‌ضرري و عدم زهرآگيني (حدت) واكسن بر روي خوكچه هندي و در مقايسه با واكسن S.19و استانداردهاي مربوط به آن سنجيده شد .هيچ‌گونه واكنش غيرطبيعي پس از تزريق واكسن با دز حتي جرم باكتري مشاهده نشده و حيوانات كامًال طبيعي و وضعيتي مشابه خوكچه‌هاي تزريق شده با دز جرم واكسن سويه 19داشتند. در آزمايش سرولوژي 11روز پس از تزريق واكس RB51هيچ‌گونه واكنش سرولوژي در آزمايش‌هاي رزبنگال و سروآگلوتيناسيون رايت مشاهده نگرديد ،در حالي كه تمامي خوكچه‌هاي واكسينه با واكسن سويه 19واكنش سرمي مثبت در هر دو آزمايش و حتي برخي از آن‌ها با تيتر متوسط 160واحد بين‌المللي تيتر ضعيفي در آزمايش مركاپتواتانول نشان دادند. ميزان جرم موجود در طحال خوكچه‌هاي هر دو گروه متعادل بوده و بر منوال استاندارد ميزان جرم در حد معمول تا 10000جرم در گرم طحال مورد پذيرش قرار گرفت .ميزان جرم S.19در حد متوسط 5000در گرم طحال و ميزان جرم RB51در حد متوسط 8000در هر گرم طحال خوكچه بوده ،ضمن آنكه دز تزريقي واكسن RB51در حد 5/1تا 2برابر دز گوساله بوده است .باكتري‌هاي جدا شده از طحال خوكچه‌هاي واكسينه با سويه RB51راف بوده ،با كريستال ويوله رنگ گرفته و در آكريفالوين آگلوتينه شدند .بررسي قابليت ايمني‌زايي واكسن در مدل آزمايشگاهي و ميزبان اصلي ،و همچنين قابليت دوام واكسن ليوفيليزه ادامه دارد. بحث ‏ ‏ ‏ ‏ ‏ بعد از حدود 70سال استفاده وسيع از واكسن S.19بروسال آبورتوس عليه بروسلوز گاوي در سطح جهان، براي اولين‌بار جايگزين مناسبي براي آن مطرح شده است .يكي از معايب واكسن S.19توليد آنتي‌بادي‌هاي پس از واكسيناسيون بوده كه مشكالت ناشي از آن هميشه مطرح بوده است .با وجودي كه محدوديت سني 3 تا 6ماهه جهت تلقيح گوساله‌ها و زمان طوالني آزمايش سرولوژي پس از واكسيناسيون مورد تاكيد بوده ،ليكن مداخله واكنش‌هاي سرمي ناشي از واكسن ادامه داشته و هنوز آزمايش مناسبي جهت تفكيك اين واكنش‌ها از آنتي‌بادي‌هاي ناشي از عفونت وجود ندارد .از طرفي ديگر ،علي‌رغم تاثير مطلوب واكسن در دزهاي كاهش ي بعد از واكسيناسيون كماكان وجود داشته و يافته براي گاوهاي بالغ و آبستن ،مشكالت ناشي از توليد آنتي‌باد ‌ مبارزه با بيماري را پيچيده‌تر ساخته است. سويه راف RB51از سويه اسموس زهرآگين (حاد) 2308بروسال آبورتوس مشتق شدهف با ثبات و از زهرآگيني ( حدت ) كمي برخوردار بوده ،قابليت برگشت‌پذيري به شكل اسموس را پس از 93پاساژ آزمايشگاهي ( ) in vitroو 15پاساژ بر روي حيوان زنده ( ) in vitroنداشته و فاقد پروزامين در ساختار آنتي‌ژني ليپوپلي ساكارايد خود مي‌باشد .از طرفي ديگر ،اين سويه پروتئين‌هاي ايمني‌زاي غشاء سلولي را همانند والد خود دارا بوده ،ايمني سلولي را محرك بوده و قابليت ايمني‌زايي آن در حيوانات مختلف به ثبوت رسيده است . عدم توليد آنتي‌بادي ناشي از واكسيناسيون ،سويه RB51بروسال آبورتوس را به عنوان نماينده ايده‌آلي براي توليد واكسن بروسلوز مطرح ساخته است. واكسن توليد شده از اين سويه از سال 1996به بعد در سطح وسيعي در اياالت متحده آمريكا مورد استفاده قرار گرفته و در حال حاضر تقريبًا تمامي ايالت‌هاي آن كشور واكسن جديد را جايگزين واكسن S.19در گوساله‌ها كرده‌اند ( .)29به عالوه ،تزريق واكسن در گاوهاي بالغ نيز نقش برتر واكسن سويه RB51را نسبت به واكسن S.19در محافظت از سقط جنين ناشي از سويه حاد 2308نشان داده است نيازهاي رشد سويه RB51مشابه ديگر سويه‌هاي بروسال آبورتوس و به ويژه سويه واحد خود 2308است .با سويه 19نيز تنها در مصرف اريتريتول اختالف دارد. رشد سويه RB51در محيط‌هاي بروسال آگار و آگار سيب‌زميني مطلوب بوده و نتايج توليد واكسن با ارزشيابي كيفي آن از نظر كنترل بر روي محيط‌هاي مختلف آزمايشگاهي و آزمايش بي‌ضرري بر روي حيوان زنده متناسب شناخته شده است .واكسن ساخت موسسه رازي به صورت ليوفيليزه آماده گرديده ،ميزان درصد جرم سلولي بعد از خشك شدن به طور متوسط 80تا %85بوده است .بررسي قابليت ايمني‌زايي واكسن در مدل آزمايشگاهي و ميزبان اصلي و همچنين تعيين مدت زمان قابليت دوام واكسن ليوفيليزه ادامه دارد. References Plommet M; (1991) – New animal vaccines. Symposium on Brucella .and Brucellosis in Man and animals. 1991, Izmir, Turkey Nicoletti P; (1990) – Vaccination. in: k. Nielsen and J.R. Duncan. .Animal Brucellosis. CRC Press Inc. Boca Raton, Fla Zavanella M; et al (1984) – production and control of freeze – dried B. abortus S.19 vaccine by using cells Produced by fermentation units. .Appl. Microbiol. Biotechno 19: 229 – 231 Alton G. G; et al (1988) – Techniques for the Brucella Laboratory, .Paris, INRA Diaz R; et al (1968) – Surface antigens of Smooth brucellae. J. .Bacteriol, 96: 893 – 901 Nicoletti, P; (1981) – Prevalence and Persistence of Babortus S.19 infections and Prevalence of other biotypes in vaccinated adult dairy       پرسش پاسخ .1نام عامل بیماری چیست؟ .2میزبانان اصلی آن را نام ببرید؟ .3راه های انتقال بیماری را توضیح دید؟ .4عالئم مهم یماری در انسان کدامند؟ .5عالئم مهم بیماری در دامها کدامند؟ .6کنترل بیماری چگونه است؟ .7روش تشخیص آزمایشگاهی بیماریرا توضیح دهید؟ .8نقش واکسیناسیون در مبا رزه بر علیه بیماریرا شرح دهید؟ .9محیط کشت ومحیط کشت کنترل واکسن RB59چیست؟ .10آزمایش بی ضرری واکسن چگونه انجام میشود؟ مقاالت پیوست ‏ ‏ ‏ ‏ واکسیناسیون گاوهای بالغ و آبستن با واکسن سویه RB51 ارزیابی واکسن سویه RB51در مدل آزمایشگاهی ایمن سازی گوساله با واکسن سویه RB51 مقایسه ایمنی زایی ناشی از واکسن S19, ‏RB51در موش