آزمایش های کیفی اسیدهای آمینه و پروتئین ها

صفحه 1:
آزمايش هاي كيفي اسيدهاي آمينه وپروتئین ها 

صفحه 2:
اسید هاي ‎Aina‏ تعریف . واحدساختماني پروتنین ها 0 بیش از 00000 نوع درطبیعت یافت شده 9. فقط 600 نوع درپروتئین هاي انساني یافت شده تعداد و نوع وتوالي وارتباط فضاني آنها ساختمان سه بعدي وخواص بيولوژيك پروتئین را مشخص مي كند 

صفحه 3:
ألف)براساس خواص فیزیکو شيميائي و قطبیت اسيدهاي آمینه خنثي (بدون بار) اسيدهاي آمینه باردار (R ‏شه أسيدا شه‎ be (td ‏اسيدهاي آمینه خطي ( گلیسین......)‎ اسيدهاي آمینه حلقوي (تیروزین»تریپتوفان» 

صفحه 4:
روش هاي تشخیص افتراقي اسيدهاي آمینه وپروتنین ها : 17 روش هاي شيميايي روش هاي فيزيكي : الف) كروماتوكريافي ب ) الکتروفورز 

صفحه 5:
أزمايش هاي شيميايي اسيدهاي آمینه : Dicky De Os ‏آز مایخ‎ -0 شناسايي كليه اسيدهاي آمینه Amino Acid Structure Hydrogen Amino Carboxyl ~— | 9 +H —_N— C__ 07 9 ee | o- R R-group (variant) 

صفحه 6:
هدفه شناسايي قسمت مشترك همه اسيدهاي آمینه اساس: نين هیدرین باعث دزآمینه ودکربوکسیله شدن اسیدآمینه شده ودرانتها کمپلکس رومان (ممس()) به رنگ بنفش 

صفحه 7:
واكنش نين هيدرين 3 II oH Sy J] +R ‏ممه د‎ 0 ‏یمیمص‎ ‎Whom | ‏عم‎ ‏مد‎ ‏مک‎ CIO, 1 1 ‏مد سمه‎ ae | ‏ا‎ é [| auex = 570 (Purpie) 2 i ll [ 

صفحه 8:
نکات مورد توجه : ایجاد گاز. ‎COC‏ دلیل بروجوداسیدآمینه است . ©. اسيدهاي آمینه پرولین وهيدروكسي پرولین به علت ساختمان خاص درپایان این واکنش رنگ ديگري ایجاد ‎NH‏ 2 سور ‎CH2 HO‏ | ‎a is 0‏ 11220200 ‎HO‏ ‎proline 

صفحه 9:
روش کار : به © ميلي لیتراز محلول مجهول 4 ميلي لیتراز. معریف نين هيدريين اضافه نموده و 6 دقیقه در بن ماري جوش بكذاريد. جواب مثبت : رنك بنفش جواب مثبت براي برولين وهيدروكسي برولين : رنك زرد 

صفحه 10:
- آزمایش زانتو پروتئيك له( هد ف + شناسايي اسيدهاي آمینه حلقوي ازخطي از طریق تشخیص حلقه بنزني أساس: اسيدنيتريك غليظ باحلقه بنزني ايجاد مشتقات نيتره حلقه بنزن (زردرنك5) رامي دهد.ادامه واكنش باسود()*4 درصد وايجاد رنئك نارنجي است. ‎ON‏ ‎HN 0 HN 0‏ ۱ ۱ ۱ | ‏سلس وم )سوه‎ + HNO, —> HO CHy-CH-C-OH (Yellow Colored) 

صفحه 11:
روش کار : به 0 ميلي لیتر از اسیدآمینه مجهول 0ميلي لیتر اسيدنيتريك غلیظ (توسط پي پتور) اضافه نموده وبه مدت ©دقيقه در بن ماري جوش قراردهيد. 1 جواب مثبت : رنگ زرد ادامه واکنش : ‎coal‏ پس ازسردنمودن لوله حدود 0-0 ميلي لیترسود6(0 درصداضافه نمائید. جواب مثبت : رنگ نارنجي 

صفحه 12:
9 آز مايش ميلو نب هدفه : شناسايي اختصاصي اسيدآمينه تيروزين(تشخيص حلقه فنلي) عه( )هه ‎NH‏ اساس: معرف میلون (شامل نیترات ونیتریت جیوه) با حلقه فنلي ترکیب خاصي بوجود مي آورد. OH ۴ oe QO HNOJHENO, = gy AN _N_o QO - 0 I ‏ور 2 ی‎ 1 1 Ala Al 

صفحه 13:
روش کار : به 0 ميلي لیتر اسید آمینه تیروزین 0 ميلي لیتر معرف میلون اضافه نموده ولوله را به مدت ©-© دقيقه در بن ماري جوش قراردهيد. جواب مثبت : رنگ قرمز 

صفحه 14:
©- آزمايش هايكينزكول جاو نامسا هلف اختصاصي شناسايي اسيدآمينه تریپتوفان ( تشخیص حلقه اندولي) اساس: نمك منيزيم اسيد كلي اكزباليك دررمحيط اسيدي قوي با حلقه اندولي کمپلکس رنگي ايجادمي کند. 2 6# و 1 ‎Aus ۳۰ o_o‏ 2 .© 6 یر ده اي هديا 

صفحه 15:
روش کار : به 6 ميلي لیتر ازاسید آمینه تریپتوفان 6 ميلي لیتر معرف. هاپکین کول اضافه نموده بعد ازمخلوط نمودن حدود 4 ميلي لیتر اسیدسولفوريك غلیظ به آرامي واز جدار لوله وارد کنید. ۳۹ جواب مثبت : ایجاد حلقه بنفش رنگ درحد - فاصل دوفاز 

صفحه 16:
آزمایش هاي پروتئین ها آزمایش هاي اختصاصي اسيدهاي آمینه تاحدودي به محلول پروتئین ها نیز جواب مثبت مي دهند ولي با شدت رنگ کمتر, آزمایش هاي پروتنین ها اختصاصي براي آنهاست. 

صفحه 17:
آزمایش بیرر وی هدفء : شناسايي محلول پروتنيني از محلول هاي دیگر اساس: براساس ييوند بيتيدي است . پيوندهاي پپتيدي در محیط هاي قليايي املاح مس دار کمپلکس رنگي ایجاد مي کنند. O-n 1 (Violet) 

صفحه 18:
روش کار : به © ميلي ليتر محلول يروتئين © ميلي ليتر سود ۰ 0096 اضافه نموده يس از مخلوط نمودن ) ميلي ليتر سولفات مس 0960 به آرامي ازجدارلوله بروي آن بريزيد به طوري كه مخلوط نشود. جواب مثبت : تشكيل حلقه بنفش رنك درميان دوفاز ب 7 7 \ 

صفحه 19:
sar ‎-O‏ آزمایش رسويي پروتئین هدف. : شناسايي محلول پروتئيني( روش تكميلي ) ‏اساس: پروتئین ها بالیجاد پيونديوني بااسیدها دناتوره شده وایجاد رسوب میکنند. 

صفحه 20:
روش کار: 6 ميلي لیتر محلول اسيدي( اسيدتري کلرواستيك یااسید سولفوسالیسیليك) رادرلوله ريخته و ) ميلي ليتر ازمحلول يروتئيني رابه آرامي وازجدارلوله به آن بيفزاييد. جواب مثبت : ايجاد حلقه سفیدرنگ درحد فاصل دوفاز 

آزمايش هاي كيفي اسيدهاي آمينه وپروتئين ها اسيدهاي آمينه تعريف : .1 .2 .3 .4 واحدساختماني پروتئين ها بيش از 300نوع درطبيعت يافت شده فقط 20نوع درپروتئين هاي انساني يافت شده تعداد و نوع وتوالي وارتباط فضائي آنها ساختمان سه بعدي وخواص بيولوژيك پروتئين را مشخص مي كند طبقه بندي اسيدهاي آمينه الف)براساس خواص فيزيكوشيميائي وقطبيت اسيدهاي آمينه خنثي (بدون بار) اسيدهاي آمينه باردار ّّ ب ) براساس ريشه اسيدآمينه (ريشه )R اسيدهاي آمينه خطي ( گليسين)...... اسيدهاي آمينه حلقوي (تيروزين،تريپتوفان).......، روش هاي تشخيص افتراقي اسيدهاي آمينه وپروتئين ها : .1روش هاي شيميايي .2روش هاي فيزيكي : الف) كروماتوگرافي ب ) الكتروفورز آزمايش هاي شيميايي اسيدهاي آمينه : -1آزمايش نين هيدرينNinhydrin شناسايي كليه اسيدهاي آمينه .....آزمايش نين هيدرين: هدف :شناسايي قسمت مشترك همه اسيدهاي آمينه اساس: نين هيدرين باعث دزآمينه ودكربوكسيله شدن اسيدآمينه شده ودرانتها كمپلكس رومان ( )Rhomanبه رنگ بنفش تشكيل مي شود. واكنش نين هيدرين نكات مورد توجه : .1ايجاد گاز CO2دليل بروجوداسيدآمينه است . .2اسيدهاي آمينه پرولين وهيدروكسي پرولين به علت ساختمان خاص درپايان اين واكنش رنگ ديگري ايجاد مي كنند. روش كار : به 2ميلي ليتراز محلول مجهول 1ميلي ليتراز معرف نين هيدرين اضافه نموده و 5دقيقه در بن ماري جوش بگذاريد. جواب مثبت :رنگ بنفش جواب مثبت براي پرولين وهيدروكسي پرولين :رنگ زرد -2 آزمايش زانتو پروتئيك Xantho proteic هد ف :شناسايي اسيدهاي آمينه حلقوي ازخطي از طريق تشخيص حلقه بنزني اساس :اسيدنيتريك غليظ باحلقه بنزني ايجاد مشتقات نيتره حلقه بنزن (زردرنگ) رامي دهد.ادامه واكنش باسود 40درصد وايجاد رنگ نارنجي است. روش كار : به 2ميلي ليتر از اسيدآمينه مجهول 2ميلي ليتر اسيدنيتريك غليظ (توسط پي پتور) اضافه نموده وبه مدت 5دقيقه در بن ماري جوش قراردهيد. جواب مثبت :رنگ زرد ادامه واكنش : پس ازسردنمودن لوله حدود 3-5ميلي ليترسود40 درصداضافه نمائيد. جواب مثبت :رنگ نارنجي  -3آزمايش ميلونMilon هدف :شناسايي اختصاصي اسيدآمينه تيروزين(تشخيص حلقه فنلي) اساس :معرف ميلون (شامل نيترات ونيتريت جيوه) با حلقه فنلي تركيب خاصي بوجود مي آورد. روش كار : به 2ميلي ليتر اسيد آمينه تيروزين 2ميلي ليتر معرف ميلون اضافه نموده ولوله را به مدت 2-5دقيقه در بن ماري جوش قراردهيد. جواب مثبت :رنگ قرمز Hopikins-Cole -3آزمايش هاپكينزكول هدف :اختصاصي شناسايي اسيدآمينه تريپتوفان ( تشخيص حلقه اندولي) اساس :نمك منيزيم اسيد گلي اگزاليك درمحيط اسيدي قوي با حلقه اندولي كمپلكس رنگي ايجادمي كند. ‏OH ‏OH ‏O ‏O - ‏OH ‏O ‏O ‏O ‏N H3 ‏H ‏OH ‏H ‏O ‏N ‏H ‏O - ‏O ‏O + ‏H ‏N ‏Mg ‏H3 N ‏O ‏N H3 + ‏O - ‏N ‏H روش كار : به 2ميلي ليتر ازاسيد آمينه تريپتوفان 2ميلي ليتر معرف هاپكينزكول اضافه نموده بعد ازمخلوط نمودن حدود 1 -2 ميلي ليتر اسيدسولفوريك غليظ به آرامي واز جدار لوله وارد كنيد. جواب مثبت :ايجاد حلقه بنفش رنگ درحد فاصل دوفاز آزمايش هاي پروتئين ها آزمايش هاي اختصاصي اسيدهاي آمينه تاحدودي به محلول پروتئين ها نيز جواب مثبت مي دهند ولي با شدت رنگ كمتر. آزمايش هاي پروتئين ها اختصاصي براي آنهاست.  -1آزمايش بيورهBiuret هدف :شناسايي محلول پروتئيني از محلول هاي ديگر اساس :براساس پيوند پپتيدي است .پيوندهاي پپتيدي در محيط هاي قليايي امالح مس دار كمپلكس رنگي ايجاد مي كنند. روش كار : به 2ميلي ليتر محلول پروتئين 2ميلي ليتر سود 10% اضافه نموده پس از مخلوط نمودن 1ميلي ليتر سولفات مس 1%به آرامي ازجدارلوله بروي آن بريزيد به طوري كه مخلوط نشود. جواب مثبت :تشكيل حلقه بنفش رنگ درميان دوفاز  -2آزمايش رسوبي پروتئين هدف :شناسايي محلول پروتئيني( روش تكميلي ) اساس :پروتئين ها باايجاد پيونديوني بااسيدها دناتوره شده وايجاد رسوب ميكنند. روش كار: 2ميلي ليتر محلول اسيدي( اسيدتري كلرواستيك يااسيد سولفوساليسيليك) رادرلوله ريخته و 1ميلي ليتر ازمحلول پروتئيني رابه آرامي وازجدارلوله به آن بيفزاييد. جواب مثبت :ايجاد حلقه سفيدرنگ درحد فاصل دوفاز