الکتروفورز

صفحه 1:
الکتروفورز استاد : تهیه کننده: 

صفحه 2:
مقدمه یکی از بهترین و میثر ترین روش های برای جداسازی مولکول هاء الکتروفورز است. با استفاده از این روش گروه های پروتئینی به صورت تفکیک شده در می آیند و قلبل جداسازی می شوند. این روش انواع مختلفی دارد که برای تست های مختلفی انجام می شود. همچنین لین روش در مقایسه با سایر روش ها بسیار مناسب تر و ارزان تر است و مزیت های فوق العاده ای دارد. الکتروفورز عمودی 

صفحه 3:
الکتروفورز چیست؟ الک روقورز روشی است که با استفاده از ن از میان یک شبکه ی متخلخل, نمینه های دارای بار الکتریکی با استفاده از یک میدان الکتریکی گذرانده می شوند. مولکول ها می توانند در لین شبکه با سرعت های مختلفی عبور کنند که بسته به اندازه ى لن هاء نوع مولکول ها و همچنین بار الکتریکی متفاوت خواهد بود. بنابرین اين روش یک روش بسیار مناسب برای جداسازی مولکول ها خواهد بود. در اين روش یک شبکه ی متخلخل وجود دارد و درو محبوس شده است. لایه نازکی از یک مخلوط مولکولی بر روی این شبکه قرار می گیرد. در مرحله ی بعدی در ۵ سمت این شبکه ی متخلخل اختلاف پتانسیلی اعمال شده و باعث حرکت مولکول های نمونه با سرعت های متفاوت می ‏ تفاوت سرعت مولکول ها باعث می شود که قادر به جداسازی مولکول ها باشیم. 

صفحه 4:
در ف ای آلکتروقور مولخول های بروتثینی مختلف به صورت گروه های تفکیک شده در قسمت های متفاوتی از ند. معمولا در اين دستگاه ها ژل در میان دو محفظه ی بافری قرار داده مى شود و به عنوان تنها واسطه برای عبور جریان الکتریسیته در میا شبکه مشاهده می این محفظه ها می شود. روش انجام تست الکتروفورز در مرحله اول تست الکتروفورز نمونه ای را که پزشک درخواست کرده است به دمای ۲۵ درجه رسانده می تٌ کاغذ استات سلولز که به حللت ژل بوده و قابلیت استفاده برای ۸ نمونه را دارد در بافر مخصوص حدود ۱۰ دقیقه ‎eee‏ و که ومان ۱۰ دقیقه سبری شد .کاغذ استات سلولز را برای اینکه اندکی نم گیری شود مابین دو کاغذ خشک کن قرار می دهند. بلید دقت کرد که استات سلولز کاملاً خشک نشود. در مرحله ی بعدی انجام آزمایش الکتروفورز, توسط یک اپلیکاتور خاص نمونه را بر روی کاغذ منتقل می کنند. 

صفحه 5:
نکته ی مهمی که در لین مرحله از آزملیش الکتروفورز بلید به آن توجه کرد فاصله ی ‎digas‏ ها از لبه کاغذ به اندازه ۱۵ سای مر و از کتاره هابه اندازه ی ۱ سانتی متر است. بعد از لین مرحله یل راجه پشت بر می گردانند و در داحل تانک که شامل بافر مخصوص است» قرار می دهند. نمونه باید در سمت کاتد قرار بگیرد. برای ارتباط هرچه بهتر بافر از دو لامپ و کاغذ صافی نیز استفاده می شود. يس از لين كار نوبت به اعمال ا< پتانسیل می رسد. با اعمال ولتاژ ۱۶۰ درجه یا جریان ۴ للی ۶ آمپر یک جریان الکتریکی برقرار می شود. بس از چند بار استفاده شدن بافر هاء جریان افزلیش پیدا می کند و بلید بافر تلنک تعویض شود. در نهلیت پس از گذشت ‎ee‏ ۱ ۲ ۲ حارس ى دوه و مراحل مربوط به رنگ بری: آب گیرف» رنگ آمیزی و شفاف ‏سازی انجام شده و باند ها با استفاده ار اسکنر و برنامه ی مخصوص خوانده می شوند. ‎ 

صفحه 6:


صفحه 7:
تلوری و مبانی ژل الکتروفورز ژل الکتروفورز یک متود جداسازی و آنالیز ماکرومولکولهای زیستی ( ۰18۷۸ 101۸ و پروتئینها ) و قطعات ‎ere 1‏ 9 لس تکک در آزمایشگاه های تشخیصی جهت جداسازی پروتكینها با استفاده از بار و یا اندازه شان مورد استفاده قرار میگیرد و در بیوشیمی و دیگر گرایشهای علوم سلولی و مولکولی به منظور جداسازی قطعات دارای اندازههای مختلف 1۸ و 1۸ و مولکولهای پروتئینی بر اساس سایز میباشد. مولکولهای اسید نوکلئیکی با اعمال یک میدان الکتریکی در یل آگارز و گاها پل اکریل آمید حرکت میکنند/و بر اساس اندازه جدا ميشوند. مولکولهای کوچکتر سریعتر از مولکولهای بزرگتر حرکت میکنند؛ این امر به دلیل مهاجرت راحتتر آنها در منافذ ل میباشد. اما پروتئینها بر اساس بارشان در آگارز جدا ميشوند زیرا منافذ ول بسیار بزرگتر از لن هستند که بتوانند پروتتینها را غربال نمایند. همچنین تکنیک ژل الکتروفورز میتواند به منظور جهاسازی ناوفرات موره استفاد» قرار بگیرد. 

صفحه 8:
از جمله کاربردهلیی که وّل ها در هنكام الکتروفورز بر عهده دارند. مهار نمودن کنوکسیون دملیی ایجاد شده در ثر میدان الکتریکی. غربالگری و نیز ایجاد تاخیر در حرکت مولکولها میباشد. ول الکتروفورز 12/۸ معمولا به منظور تجزیه و تحلیل بعد از تکثیر 121*08 با استفاده از تکنیک ۳16 به کار میرود. اما ممکن است به عنوان یک تکنیک جهت آماده سازی برای تکنیکهای دیگر مانند اسپکترومتری ‎gS © RFLP «PCR. cope‏ ی وا 10۱ و 0 رن بارتینگ مورد استفاده قرار بگیرد: در میدان الکتریکی ایجاد شده توسط منبع تغنیه ‎oles (Power-Supply)‏ داراى بار خللص مثبت به سمت کی ی و بو دای خالا 2 سمت قطب مثبت حرکت مینمایند: 

صفحه 9:
در یل الکتروفورز آگارز پس از اعمال ولتاژ و جریان مورد نظر. مولکولهای با اندازه بزرگتر دارای حرکت کندتری د: خلل و فرج یل آگارز میباشند. همین اندازه مختلف مولکولها موجب ایجاد باندهای مجزا و متفاوتی خواهد شد. معمولا ژلهای انتخاب شده جهت عمل الکتروفورزه از جنس پلیمرهای دارای قدرت ایجاد پیوند متقاطع ‎polymer)‏ 0۳09551101660) میباشند که نوع لين يليمر و نيز میزان نفوذپذیری آن بر اساس نوع ترکیب و وزن خاصی که قرار است جدا گردد. انتخاب ميشود. هنگامی که قرار است پروتئینها و یا اسیدهای نوکلئیک کوچک از جنس 101۸ یا 1۸ جدا شوند. معمولا از غلظتهای متفاوتی یل اکریل امید و کراسلینکر استفادهویث که ایجاد شبکههای پلی اکریل آمیدی با اندازه منافذ مختلف ایجاد میگردند. اکریل آمید نوعی نوروتو ۱ ۱ ۱ ۱ اهامای که اندازه اسیدهای نوکلفیک از چددضد جفت باز بیشتر گرد بهتر است از یل آگارز جهت جداسازی استفاده گردد. آگارز متشکل از زنجیرهای بودن شاخه و بلند و بدون بار کربوهیدرات میباشد که کراس لینک نیز ندارند؛ همین امر موجب ایجاد یل با اندازه منافذ بزرگ برای جداسازی ماکرومولکولها میگردد. 

صفحه 10:


صفحه 11:
در هنگام عمل الکتروفورز بسته به اندازه و اختلاف وزنی که جمعیت مولکولها با هم دارند و نیز میزان ولتائی که اعمال میگردد » زمان الکتروفورز متفاوت خواهد بود. در صورتی که مدت زمان عمل الکتروفورز کم باشد روی هم افتادن باندها و نیز اسمیرهای غیر قلبل تمایز قلبل مشاهده خواهند بود. اما اكر مدت زمان لين عمل زياد باشد ممکن است مولکولها از زل خارج گردند. به منظور تشخیص وزن مولکولهای جداشده معمولا مارکرهای وزنی معینی وجود دارند که همگام با ران نمونهها ران میگردند. لین مارکر که به 12010167 نیز معروف میباشند. حاوی مخلوطی از مولکولهای دارای ور مشخص میباشند. معمولا نکتههای که در مورد 800617آها ضروری میباشد. این است که متناسب با جمعیت مولکولی که قرار است جدا شود. 180067 را انتخاب نمود. این 120061 باید حاوی مارکرهای دارای وزن کمتر و نیز بیشتر از مولکولی هدفی که قرار است جدا گردد. باشند. فاصلهای که یک بلند طی مینماید متنا است با لگاریتم اندازه مولکول. 

صفحه 12:
عمل الکتروفورز در بافر صورت میگیرد تا از تغیبرات 01 جلوگیری بعمل آورد. در واقع 1011 فاکتوری بسیار اساسی و مهم در عمل الکتروفورز میباشد. همانگونه که پیشتر گفته شد. الکتروفورز تکنیکی بر اساس بار خالس و وزن مولکول میباشد. انواع ژل مهمترین انواع یل مورد استفاده در عمل الکتروفورز ول آگارز و اکریل آمید میباشند. هر نوع ل میتولند به < برای انواع اندازهها و گونههای آنالیت مورد استفاده قرار بگیرد. ژلهای پلی اکریل آمید معمولا برای پروتئینها مورد استفاده قرار میگیرند و نیز دارای قدرت تفکیک خیلی بالایی برای قطعات ‎DNA‏ اندازه بین ۵۰۰-۵ جفت باز میباشند. از طرف دیگر ژلهای آگارز دارای قدرت تفکیک کمتری برای 127۷۸ میباشند ولی دارای طیف وسیء تری از جداسازی میباشند و بنابراین برای قطعاتی ‎DNA‏ بین ۵۰ تا ۲۰۰۰۰ جفت باز مناسب میباشند. 

صفحه 13:
اما باید این نکته در نظر گرفته شود که برای قطعات "121 بزرگتر از ۶ مگاباز باید با دستگاه الکتروفورز ‎wogai lae |, SLs PFGE(PULSED FIELD GEL ELECTROPHORESIS)‏ نحوه تهیه این ژلها نیز با هم متفاوت میباشد. برای تهیه آگارز باید آن را به صورت محلول حرارت داد. امابرای تهیه يلى اكريل آميد بايد آن را به طریق پلیمریزاسیون با استفاده از ماده شیمیایی تهیه نمود. از ز :۲۳ ژلهای آگارز دارای منافذ با اندازههای متفاوت میباشند ولی برای جداسازی پروتئینهای با اندازه بي کیلودالتون میتوانند مورد استفاده قرار بگیرند. فاصله بین باندهای /[[(1 دارای طول متفاوت متاثر از میزان درصد آگارز میباشد. اغلب ژلهای آگارز از درصد ژل بین ۰۷ درصد (برای جداسازی قطعات ۸( بین۵ تا ۱۰ کیلو باز »و ۲ درصد (برای جداسازی قطعات بین ۲ر۰ تا ۱ کیلو باز) میباشند 

صفحه 14:
ولهای با درصد آگارز بالاتر از ۳ 7 را میتوان برای جداسازی قطعات خیلی کوچک استفاده نمود؛ اما برای این قطعات بهتر است از یل پلی اکریل آمید به صورت عمودی برای جداسازی آنها استفاده شود. برای بسیاری از جداسازیها ژل ۱ / آگارز بهترین مورد میباشد. 

صفحه 15:
ژلهای پلی اکریل ‎PAGE) seal‏ به دلیل اندزه منافذ یکنواختی که درست کردهلند. برای جداسازی پروتنینهای با اندازهبین ۵ تا ۲۰۰۰ كيلودالتون مناسب ميباشند. اندازه منفذبا تغيير ميزان يودر اكريل آميد و بيس اكريل آمي بكار رفته در تهيه ول تغيبر ميكند. لين نوع ذل به دليل ماهيت مواد اوليه خود كه خطر آفرین میباشند کاربری كمارى لدت به قبل دارد و بيشت ت جداسازى يروتئينها مورد استفاد قرار ميكيرد. در هنگام تهیه ژل اکریل آمید دو نوع ژل تهیه ميشود: زل ‎Resolving Jj, Stacking‏ ‎Resolving 5 ~, » Stacking 4‏ ربخته میشود و درصد آن ۵ / میباشد. ولی ژل 85015711216 بین ۶ ۱۵ درصد تهیه میگردد. درصد انتخاب شده در لین نوع ثل به اندازه پروتئین هدف بستگی دارد. هرچه ‎aS‏ وزن آن کمتر باشد درصد اکریل آمید بکار برده بیشتر خواهد بود. 

صفحه 16:
مزایا و کاربرد های الکتروفورز روش الکتروفورز یکی از مهم ترین و معروف ترین روش های آزمایشگاهی برای تفکیک بیومولکول ها است. از مهم ترین مزلیا و کاربرد هلیی که لین روش دارد می توان به قابلیت تفکیک و تعیین کردن پروتئین هاء قابلیت تفکیک زمانی و مکلنی مراحل آنالیزه آسانی انجام این روش ارزان بودن این روش نسبت به دیگر روش ها و همچنین ارت و اطلاعا ۰ دس آمدء از طریق الکتروفورز دو بعدی اشاره کرد. اگر دستگاه الکتروفورز از موشمتد باشد مزیت ملیی همچون, مشدار اتمام کارء خنک سازی الکنرونیکی در حداقل ترین حجم. تنظیم 0 ۱ ۰ ۱ اقا ود وضعیت های بحرلني با استفاده از قماس خودکار و اعلام هشدار قطع شدن جریان برق نیز به مزیت های قبلی اضافه خواهد شد. 

صفحه 17: