صفحه 1:
١ روش
Lau
0 ita ا
آنفلوانزا oe)
مهناز صارمي
کارشناس میکروب شناسي آزمایشگاه مرجع سلامت
صفحه 2:
1
7
3
4
5
ks BBS 10xX=254..ml 100
و دارلیفنلرد
۱
لي 0-0
eevee een nee Combe
0 محلول فونكيزون (ضد قارج) استريل
بيكربنات سديم 964/4 استريل براي رساندن 011 نهايي وه
کشت به 67. ۹
صفحه 3:
ا
ری رت د
نیز به آن اضافه نمایید.
fe در هر ی
ere nes
محلول پني سیلین- استرپتومایسین بلید به صورت بخ زده منتقل
۱ Sy oe rare net nero
زرده
محلول 10 5885 ۲۱۵۳۸5 و آلبومین گاوي بايد در دماي
معمولا مواد فوق توسط شركت سازنده از طريق فيلتراسيون استريل مي كردد
SO Peeper ergrer in ا ا li
شرايط استريل و در كنار شعلة es ۱
صفحه 4:
ال ا ا تان
(2
wo) رت محبط
0 تب دیونیزه حل
رز رل رای
Ser ere را ا ی co
EYL ا
| شده در شرایط استریل و در کنار شعله به آب دیونیزه
۱ و مخلوط کنید. رنگ محیط کشت در حجم زیاد. قرمز رنگ
کمي از محلول را در لوله آزملیش بریزید. رنگ اولیه محیط کشت قب
صفحه 5:
(4
۰ ادامه
oa رس
ei 1 es ما م
ال ل ا اح اا
نماييدء جون در صورت بالا رفتن 1
براى PH sols نيستيد. اكر ب 5
در یله آزملیش + » رنگ آن بلید گل بهي- صورتی بان
يك لیتر محیط کشت:1 ۲1۱1 بیکربنات سدیم افزوده می شوا
شود).
محیط کشت مایع انتقال ویروس را در شرا ۱ يرس ار اي
RUM BOTs Ie eee ا را ار ا ل
نمایید. درب آنها را محکم ببندید و در بخچال (دماي 4 ؟*)) ذخیره نمایید.
و ی
صفحه 6:
7
Etch olor one
Erle eel ae
شرکت وارد کننده فونگیزون: شرکت فناوري آراطب
ل اك
ee) اك
صفحه 7:
برگرفته از دستورالعمل كشوري راهنماي مراقبت و كنترل
بيماري آنفلوانزا
مهناز صارمي
كارشناس ميكروب شناسي آزمايشگاه مرجع سالمت
)1
)2
)3
)4
)5
)6
ml 100محيط كشت H anks BBS 10xبدون N aH CO 3و داراي
فنل رد
ml 870آب ديونيزه استريل
ml10آلبومين گاوي %20استريل
ml10محلول پني سيلين -استرپتومايسين استريل
ml10محلول فونگيزون (ضد قارچ) استريل
بيكربنات سديم %4/4استريل براي رساندن pHنهايي محيط كشت به .6/7
محيط كشت H anks BBS 10xبدون N aH CO 3به شكل پGGودر و بGGه صGGورت
تجاري توليد و عرضه مي شود .پس از تهيه آن به صورت محلول ،به ميزان %2فنل رد نيز
به آن اضافه نماييد.
غلظت نهايي آنتي بيوتيك پني سيلين بايد 200واحد در هGGر ميلي ليGGتر ،استرپتومايسGGين
20ميكروگرم در هر ميلي ليتر و فونگيزون 2-3ميكروگرم در هر ميلي ليتر باشد (استفاده
از فونگيزون الزامي نيست).
محلول پني سيلين– استرپتومايسين بايد به صورت يخ زده منتقل شود و فقGGط در هنگGGام
مصرف يخ زدايي شود .پس از يخ زدايي بايد تمام محتويات ويGGال مصGGرف شGGود و مجGGددا
نبايد آن را در فريزر قرار داد.
محلول H anks BBS 10xو آلبومين گاوي بايد در دماي يخچال نگهداري شوند.
معموال مواد فوق توسط شركت سازنده از طريق فيلتراسGيون اسGتريل مي گGردد ،بنGابراين
فقط آب ديونيزه و محلول بيكربنات سديم را در اتوكالو استريل نماييد و سGGاير مGGواد را در
شرايط استريل و در كنار شعله اضافه نماييد.
)1
)2
)3
ml 870آب ديونGGيزه را در ارلن ريختGGه و در اتGGوكالو ( C°121-15دقيقGGه) اسGGتريل
نماييد.
جهت تهيGGه بيكربنGGات سGGديم g 4/4،%4/4پGGودر بيكربنGGات سGGديم را در ml100آب
ديونيزه حل كنيد و در اتوكالو (C°121-15دقيقه) استريل نماييد.
محلول هاي ،H anks BBS 10xپني سGGيلين -استرپتومايسGGين ،فونگGGيزون (در
صورت وجود) ،آلبومين گاوي %20را به نسبت مقادير ذكر شده در شرايط استريل و در
كنار شعله به آب ديونيزه استريل اضافه نموده و مخلوط كنيGGد .رنGGگ محيGGط كشGGت در
حجم زياد ،قرمز رنگ است اما اگر كمي از محلول را در لوله آزمايش بريزيد ،رنGGگ اوليGGه
محيط كشت قبل از افزودن بيكربنات سديم و تنظيم ،pHزرد است.
)4
)5
در شرايط استريل و در كنار شعله با استفاده از محلول بيكربنات سديم pH ،محلول
حاصله را به 6/7برسانيد .با هر بار اضافه كردن بيكربنات سديم ،محلول را به خGGوبي
تكان دهيد تا مخلوط شود .بيكربنات سديم را كم كم اضافه نماييد ،چون در صGGورت
باال رفتن pHبيش از ، 6/7مجاز به استفاده از اسيد براي كاهش pHنيستيد .اگر
بعد از تنظيم pHمقداري از محلول نهايي را در لوله آزمايش بريزيد ،رنگ آن بايGGد
گل بهي -صورتي باشد (معموال به ازاي يك ليتر محيط كشت ml 1،بيكربنات سديم
افزوده مي شود تا pHتنظيم شود).
محيط كشت مايع انتقال ويروس را در شرايط استريل و در كنار شGGعله ،در مقGGادير 2
ميلي ليتري در لوله هاي پالستيكي درپوش دار استريل تقسيم نماييد ،درب آنهGGا را
محكم ببنديد و در يخچال (دماي ) C° 4ذخيره نماييد .در اين دما معموال لوله ها تا
3ماه قابل نگهداري هستند.
شركت تهيه كننده مواد اوليه محيط كشت انتقال ويروس و
شركت وارد كننده سواب داكرون :شركت بهار افشان
تلفن88966246 :
نمابر88960445 :
شركت وارد كننده فونگيزون :شركت فناوري آراطب
تلفن66960575 :
نمابر66966584 :