سینتیک آنزیمی

صفحه 1:
‎uns‏ ال اجب ال حیم ‎ ‎ ‎ ‎ 

صفحه 2:


صفحه 3:
سينتيى. انزيمى عرصه ای در بیوشیمی است که با اندازه گیری کمی سرعت واكنشهاى انزيمى و مطالعه ى اصولى عوامل موثر در اين سرعت = ارتباط دارد . وقتى آنزیم با سویسترا ترکیب می شود چهار مرحله یا چهار فاز بوجود می يد: 1_فاز تاخيرى (206ذ 139) : زمانى كه طول ميكشد تا سوبسترا جاى خود را روی آنژیم پیدا کند که در اين فا محصولی تولید نمیشود 

صفحه 4:
2_فاز درجه صفر :سوبسترا در جایگاهش قرار میگیرد که مقدار آن هم زیاد است در این مرحله بدلیل زیادی سوبسترا واکنش رفت ]الب بر واکنش برگشت است در نتیجه محصولات خیلی زیاد نیست . 3_فاز مخلوط :مقدار محصولات زیاد میشود بطوری که خود محصولات نیز میتوانند بصورت سویسترا عمل کنند و واکنش برگشت انجام شود . 4_فاز تعادلی :سرعت واکنش رفت با برگشت برابر است . 

صفحه 5:
ار عوامل مختلف بر سرعت آنزیم: 1_دما :افزايش دما سرعت واکنشهای شیمیایی را افزایش میدهد ولی در مورد واکنشهای آنزیمی دو اثر مختلف دارد . = 1_افزایش سرعت واکنشهای آنزیمی 2_بر هم زدن ساختمان بروتثینی آنزیم که موجب از بين رفتن فعالیت آنزیم میشود .با افزایش دما بیش از 50 درجه ساختمان پرونئینی آنزیم دگرگون میشود دماى ايده آل | ‎optimum)‏ ‏دمايى كه در آن ميزان فعاليت آنزيم حداكثر است كه اين دما براى اغلب آنزيمهاى بدن انسان 37 درجه است . 

صفحه 6:
ل اند ميتوانند بهو محصول تبديل_شوند 2 طط : ‎Ph‏ ليتيمم :1م ى كه در أنهر آنزيمى يشترينف عا لتوا از خود نشان ميدق ‎eels Pols lps tel, phd aS‏ ء خر از ‏آنزیمهاعمعده (پپسیر)‌که در اسیدءف عالندارند و آنزیم کلین استراز كه درطم قليايىعملميكند .721 روعساختمانب رخیآنزیمها مثل ۳ ‏3_غلظت سوبسترا : ‏با افزایش غلظت سرعت واکنش افزايش می یابد تا اینکه تمام مولکولهای آنزیم اشباع شوند بعد از افزايش غلظت دیگر اثری روی سرعت ندارد و سرعت مستقل از غلظت عمل میکند .منحنی سرعت بر حسب غلظت یک منحنی هایپرولیک است .در یک لحظه خاص تنها مولکولهایی از سوبسترا که به شکل کمپلکس5 به آنزيم اتصال يافته ‎ 

صفحه 7:
غلطت آنزيم : سرعت يك واكنش آنزيمى تا زمانى كه سوبسترا به مقدار كافى در محلول موجود باشد مستقيما متناسب با غلظت آنزیم میباشد ولى در صورتى كه افزايش غلظت أآنزيم ادامه يابد زمانى ميرسد كه ديكر سرعت واكنش به علت كمبود مقدار سوبسترا افزايش نمى يابد . 

صفحه 8:
رابطه میکائیلیس و منتون : میکائیلیس و منتون فرمول زیر را براي محاسبه ي سرعت واکنش آنزيمي ارائه دادند . V0O=Vm.(S)/Km.(S) ‏را مي توان با ارزيابي معادله میکائیلیس و‎ ky 5 ‏ابستگي سرعت واکنش ابتدايي به‎ ‏8تون ان‎ 1.وقتي 5) بسیار کمتر از ۲1 باشد) در نتیجه میزان ‎Km-t(S)‏ اساسا برایر تس فى باشد که در تتیجه رابطه ی نامترده به صورت مقایل حلاصه د V0O=Vm/Km.(S) بس نسبت آنان نيز ثابث است. 

صفحه 9:
2. وقتي (5 ) بسیار بیشتر از 10باشد میزان(5) +10 اساسا برابر (5) میباشد که رابطه ي مزبور به صورت زير خلاصه مي شود : ۷02۷ در اين رابطه سرعت واکنش ابتدايي حداکثر۷ بوده وتحت اثر افزایش غلظت سوبسترا قرار نمیگیرد. 

صفحه 10:
3.وقتي ‎٩-10(‏ ) باشد۷/2 که این معادله بیان میکند وقتي میزان (5)برابرحت1 باشد سرعت ابتدايي نصف میزان حداکثر میباشد. در نتیجه 1 را که ضریب ثابت میکائیلیس میباشد را به این صورت تعریف = يا ا غلظتواز سویسترا (سنکه در لین‌غلظتت یمیاز نقاط فعا لآنزيم توسط سويسترا اشغا لميشود. 0 با میلترکيبي‌آنزيم و سویسترا رلبطه ي عکس‌دارد .يك10 بزرگ نشان دهنده ي يكييوند ضعیف بین‌آنزيم و سوپسترا ‎owl‏ ويك1 کوچك‌نشان دهنده ي پیوند قووبين]نزيم و سويسترا ميباشد. 00 و اه یمالس ومتته‌ن مان کقت هر ها ۱ 

صفحه 11:
رابطه ي لینویور -برك : و در بیوشیمی , طرح (لینویور -برك) یا طرح (متقابل دوگانه) نمایش گرافیکی معادله لینویور -برك مربوط به سینتیک آنزیم است که توسط هانس لاين ویور و ‎SH oP‏ در شال 1934 توصیف شده است. طرح یک روش گرافیکی مفید برای تجزیه و تحلیل معادله میکائیلیس - منتون فراهم می کند , زبرا تعیین دقیق :۷۳۵ یک واکنش کاتالیزوری آنزیمی دشوار است: Vinax [S] ۷۲ = =o Kin + [S] = ‏گرفتن متقابل می دهد‎ 17 VeaelS} Vaux [S] که در آن ۷ سرعت واکنش است (سرعت واکنش) : 8 ثایت مایکلئیس - منتن است , ۷۳۵ حداکثر سرعت واکنش است و (8)غلظت بستر است. 1 Knt{S} ‏مک‎ 1 1 = = + 

صفحه 12:
‎Tob‏ لینویور -برك برای تعیین اصطلاحات مهم در سینتیک آنزیم , مانند 69 و ۲2 , قبل از دسترسی گسترده به رایانه های قدرتمند و نرم افزار رگرسیون غیر خطی , به طور گسترده مورد استفاده قرار گرفت. ۲- رهگیری چنین نمودار معادل معکوس :۷۵۵ است. رهگیری ‏ نمودار 1 / 0 را نشان می دهد. اين امر همچنین تصویری سریع و سریع از اشکال مختلف مهار آنزیم ایجاد می کند. ‏طرح متقابل دوگانه ساختار خطای داده ها را مخدوش می کند , بنابراین برای تعیین پارامترهای جنبشی آنزیم غیرقابل اعتماد است. اگرچه هنوز برای نمایش داده های جنبشی استفاده می شود ء برای محاسبه پارامترها به طور کلی از رگرسیون غیر خطی یا اشکال خطی جایگزین معادله میکائیلیس و منتون مانند طرح هانز-وولف يا نمودار ادی-هافستی استفاده نمی شود. ‏هنگامی که برای تعیین نوع مهار آنزیم استفاده می شود , طرح لینویور -برك می تواند بازدارنده های رقابتی , غیر رقابتی و غیر رقابتی را تشخیص دهد. بازدارنده های رقابتی همان رهگیری 7 را دارند که همان آنزیم مهار نشده است (از آنجا که تحت تأثیر مهارکننده های رقابتی قرار نمی گیرد وارون :۷۱۵ نیز تغییر نمی ‏كند) اما دامنه ها و رهكيرى ا د ؛ وجود . دارد. مهار غير | ‎leas Gay‏ با همان رز اب از و ‎ee‏ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ 

صفحه 13:
مشکلات روش طرح لینویور -برك به طور کلاسیک در متون قدیمی استفاده می شود , اما مستعد خطا است , زیرا محور 7 متقابل سرعت واکنش را می گیرد - و به نوبه خود هر خطای کوچکی را در اندازه گیری افزایش می دهد. همچنین , بیشتر نقاط موجود در طرح بسیار در سمت راست محور 7 یافت می شوند. مقادیر زیادی از (5)(و از اين رو مقادیر کوچک برای 8(/1)در قطعه) اغلب به دلیل حلالیت محدود امكان يدير بيست . بتابراين براى به دست آوردن رفگیری ‎Uys‏ به یک برون یابی بزرگ است. 

صفحه 14:


صفحه 15:
طرح هانز - وولف در بیوشیمی , یک طرح هانز-وولف یک نمایش گرافیکی از سینتیک آنزیم است که در ‎ol‏ نسبت غلظت اولیه بستر (5) به سرعت واکنش ۷ در برابر (5) رسم می شود. این بر اساس بازارایی معادله ميكائيليييس -هنتون ابت كه در زير نشان ادادة شدة است: [Ss] [Ss] Km o> Vax * Winax = که در آن 1 ثابت میکائیلیس - مثتون و ۷۲۵۵۶ حداکثر سرعت واکنش است. اس ادا اطوای داش این رس و ار ۳ همچنین توسط چارلز ساموئل هانز مورد استفاده قرار گرفت , حتی اگر وی نه از ول نام ردو ناكما كرد فان خاظرنشان کرد که ماد ان نگ رون خطی برای ین پارامترهای جبیتی اززاين نوع تحول خطی ناقص است . زیرا بهترین تناسب را بین مقادیر مشاهده شده و محاسبه شده ۷/1ایجاد می کند , نه ۰۷ این معادله را می نوان از معادله میکائپلیس - منتون به شرح زیر استخراج کرد: 

صفحه 16:
معکوس و ضرب در (5): Vanax [$] ° Fn + 5] 

صفحه 17:
همانطور که از معادله مشخص است , داده های کامل یک خط مستقیم از شیب 1 ۱, یک 7- رهگیری 171/۷۲۱۵ و یک -رهگیری -1 دارند. مانند سایر ‎SiS‏ های معادله ای میکائیلیس - منتون , نمودار هانس-ولف به طور تاریخی برای تعیین سریع پارامترهای مهم جنبشی ‎Vmax / Km 9 Km . Vmax‏ عورد استفاده قرار گرفت , اما با روش های رگرسیون غیرخطی که دقیق تر و دقیق تر هستند جایگزین شده است. ديكر از نظر محاسباتى غيرقابل دسترسى است. با این حال , به عنوان وسیله ای برای ارائه داده ها به صورت گرافیکی مفید باقی می ماند. یک اشکال رویکرد هانر-وولف این است که ه مختصاب ونم ایسیسا متفیرهای مستقل را نشان نمی دهند: هر دو به غلظت بستر بستگی دارند. در نتیجه , اندازه گیری معمول خوب بودن تناسب , ضریب همبستگی ‎٩‏ , قابل استفاده نیست. 

صفحه 18:
Hanes—Woolf plot 

صفحه 19:
نمودار ادی-هافستی-اسکاچارد در نمودار نرخ واکنش به عنوان تابعی از نسبت بین سرعت و غلظت بستر رسم شده است: 0 -Ky = + Vox (S| جایی که ۷ تشان دهنده سرعت واکتش است ۰ 10۷ ثایت مایکلتیی دمن (6)غلظت بستر است و ۷027 حداکثر سرعت واکنش است. این را می توان از معادله میکائیلیس - منتون به شرح زیر استخراج کرد: v= Vu 1 + ]5( 

صفحه 20:
معکوس کنید و با 1082 ۷ ضرب کنید: تنظیم مجدد: ايزوله كردن ‎VV‏ 

صفحه 21:
پررسي انواع ترکیب مهارکننده: تركيباتي که موجب افزایش سرعت واکنش هاي آنزيمي میشوند ,فعال کننده و تركيباتي که موجب کاهش سرعت يا توقف واکنش هاي آنزيمي میشوند مهارکننده مهارشدن فعالیت آنزیم به اين معني است که در شرایط مناسب حرارت , 77 ب,غلظت سوبسترا سرعت واکنش آنزيمي کاهش ‎wb‏ .اين يديده يك تغيير شيميايي است و با کم شدن فعالیت آنزیم در اثر دناتوره شدن که يك تغییر فيزيكي است , تفاوت دارد. 

صفحه 22:
انواع مهارکننده: 1-مهارکننده هايي که عمل آنها برگشت پذیر است که خود شامل چهار دسته اند: رقابتی- نارقابتی- غیر رقابتی- مختلط مهار کننده ها ی برگشت پذیر * 1_مهار کننده رقابتی :با سوبسترا برای اتضال به آنزیم رقابت میکند.این مهار کننده تنها به آنزیم آزاد اتصال میابد.لذا افزایش قابل توجه غلظت سوبسترا میتواند سبب حذف مهار کننده رقابتی گردد .در این حالت :۷۵۵ ثابت میماند ‎yin! jal Km oly‏ میابد .اکثر مهار کننده های رقابتی ساختمانی مشابه سوبسترای انزیم دارند . 

صفحه 23:
2 مهارکننده تارقایتی :نها رمانی به آنزيم اتصال ميا که حنما از فیل سوسترا ید آن اتصالتیافته باشد بای فهار کننده قهابه کهیلکس نریم ‎a2 (ES) Inte‏ مینشود .در وأقع پرای اتصال مهار کننده ایتدا لازم است سویسترا اتصال یافته وبا ایجاد تغییر در ساختمان فضایی آنزیم ,امکان اتصال مهار کننده را فراهم سازد .در اين حالت هر دو مقدار ۷2 و ۷۰ کاهش میابد . 3_مهار کننده غیر رقابتی :اتصال آن کاملا مستقل از اتصال سوبسترا میباشد ,به طوری که میتواند به ۳ یا 55 اتصال یابد در این حالت :۷2 کاهش ‎og ul wo‏ ‎Km‏ ثابت می ماند . 

صفحه 24:
4- مهارکننده های مختلط مهار مخلوط نوعی مهار آنزیم است که در آن بازدارنده ممکن است به آنزیم متصل شود چه آنزیم قبلاً بستر را پیوند داده باشد یا نه اما میل بیشتری به یک حالت يا حالت دیگر دارد. اين ماده "مخلوط" نامیده می شود زیرا می تواند به عنوان "مخلوطى" مفهومى از مهار رقابتى ديده شود , در اين حالت بازدارنده = فقط در صورت عدم بستن بستر مى تواند آنزيم را ببندد و مهار غیرقابل رقابت , که در آن بازدارنده فقط می تواند اتصال دهنده باشد. اگر بستر قبلاً چسبیده پاشد , آنزیم می کند. اگر توانایی بازدارنده در اتصال آنزیم دقیقاً یکسان باشد , جه آنزیم بستر را قبلاًٌ متصل کرده باشد یا نه , به عنوان یک بازدارنده غیررقابتی شناخته می شود. گاهی اوقات مهار غیر رقابتی به عنوان یک مورد خاص از مهار مخلوط در نظر گرفته می شود. 1 در مهار مخلوط , بازدارنده به یک سایت آلوستریک متصل می شود , یعنی محلی متفاوت از محل فعال که بستر به آن متصل می شود. با این حال , همه بازدارنده هابی که در تببایت های آلویببتریک متصل می شوند , بازدارنده های مخلوط تییببتتدی- 

صفحه 25:
سم زدایی متانول = مهارتولیدانرژی مهارتولیدانرژی ارتکثیرباکتری تنظیم مسیرمتابولیکی سوکسینات دهیدروژناز الکل دهیدروژناز G3-PD سیتوکروم سنتاز دی هیدرویتروات ستتاز فسفوگلیسرات موتاز 02 PABA -1,3DPG, 

صفحه 26:
مهارکنند دی ایزوپروپیل فلوروفسفات اتصال به كروة -011سرين 001 -511فسفات 1-ليبوآت 511-05 مهارتولیدانرژی مهارنولیدانرژی مهار ستتزدیواره سلولی 

صفحه 27: