واکنش زنجیره ای پلیمراز

صفحه 1:


صفحه 2:
Polymerase chain reaction واکنش زنجیره ای پلیمراز 

صفحه 3:
تما 070 اند توسط روش ‎ron ab‏ ار جما 7 ‎sb‏ 0 و ايمونولوزيكي انجام شور 2 البته اين روشها بم دليل 0 نتايج واضح و قابل استنادع ف وقت عع ع ا ع و م داو ل ا ‎ias 0 7‏ ارس کر ‎Pee eee eee ere ere ‏ری ها را نسبت به روش هاي قنوتيپي و بيوشيميايي تا حد‎ eat cet) ‏مي دهد. 

صفحه 4:
تاریخچه oa allyl (kor Dull) puilgo SyS Lawes 1984 Jlw 52 POR Su % ۳ ‏ا‎ pal nent ‏ابتدا اين كار توسط سه بن مارى با حرات دهى مختلف انجام ميكرفت و از‎ ” آنزیم کلنو بعنوان 0۵۷,۳06 000) استفاده ميشد. این آنزیم در اثر ار را ار 0 ¥ سل از آنزیم 0۷۲۵0۵6۲۵۵ 0000 مقاوم به حرارت ۱ ‏رف‎ ED UWS ‎Fr‏ كرد وافروزة واكينش 206 حورت انويانيك انكام ‎0 ‎ 

صفحه 5:
واکنش زنجیره ای پلیمراز ۲ واکنش ارزان ,سریع و فراگیر , که به کمک آن محققین توانسته اند انرا براى بررسى مولکولی میکروبها , گیاهان , جانوران» نمونه های باستانشناسی و غیره به کار ببرند 

صفحه 6:
مكانيسم 05005 واكنش زنجيره اى يليمراز(©60) به سادكى در يى لوله ‎vel ST‏ ا ا ‎Peed Pe Pl eta cs etre Pa‏ ‎pCR iets)‏ ل ‎Beppe‏ کت میشود. ال او ی سر ی رن کت ی 7 آنزیم 0000 پلیمراز صورت می گیرد. ا ‎peer wR Re‏ ‎Pra oc rep Meee Pr nvrl Be eee‏ Fen ‏ا ا‎ ee ree Croc aiees BO CesC Ne DOT ener Sfere ‏ی‎ yer evar sie ver] KOO Rodel) 

صفحه 7:
نمونه 00009 الكو ‎Ween ec‏ ما ا ما 00 استخراج 0۱۷۸ ژنومی, 0۸۷۸ پلاسمیدی يا حتی محصول ۴۵ دیگری باشد. ‎Wl See Cee meee cs teers CP) Scere EC reed‏ | ‎Roen pecca eae cir‏ FES eo) 7 ede et) ree Perea Pt ano poe NBN Peart eT SW ng ODES BP [Pa el We tcl PROCES TT mot ‏ا ا‎ BCP EES Wa ON Oty peat eb eta ‏عدم تكثير قطعه مورد نظر مى كردي‎ حم ا | مرحله استخراج 00/8 مثل فنل وي5018, باعث كاهش فعالیت آنزیم 00۱۷۳۵۲۵56 1380 و ةا ااا اا ا ل 000 اندى 08/8 از هر منيع ديكرى ممكن است به توليد قطعات غير قابل انتظار بيانجامد. 

صفحه 8:
آغازكرهاز یی ا ‎SU‏ ‎cevne vs eleanor)‏ ار ‎Sore‏ ‎Cohan Miapegiree er ee evi‏ برابفرها دو عمل انجام في دهنذ. ‎Be) pearly yea des oll de‏ مشخص ميكنند و دوم اين كه اندازه قطعات تكثير شونده را تعيين مي كنند. ‎merce nea nen rere‏ رن ‎SOE ec Sens econ A) vs a‏ 5 ‎on‏ ار را را ار ‎HE cree germ UNI ay Ps [=/ Ea 00 UOT pe a DORE ve‏ چه ژنهای دیگر میتوانند ۸۳06۵۱ گردند. 5 at مهمترين نقش بافر +00)) تنظيم اا مناسب واكنش 6008© و آنزيم 9-/ «صدصمؤس مى باشد. اجزاى اين بافر نقش هاى ديكرى نيز دارند. 010102 ‏ا اا‎ CP Pe | 1۳ ‏ااا‎ aS aisluo Ue paul sl jlo 

صفحه 9:
ا 0 7000 ار ار ار رشته :0:0 الكو و آغار ‎Peete rare ee Seems vin bat) a‏ ‎es‏ صلم 00000 براى فعاليت خود به لين يون نياز دارند و اين يون براق ‎ae PAE sede, Sees‏ 0 آست. برای اتكثير + ‎Prieta)‏ ‎Pree reer ives etc ee ae‏ ‎sap ae 5 alt ons ۳‏ 02 قرا دادو مي شود ولء ‎EA‏ ‏که برای برحى واكنش هاى 6068 لازم است كه غلظت اين يون تغيير. ‎cso 029581 POR YuiSly a 9 angi ailSla> yoo a CaS yi yl lai‏ 12930 ‎er Ree dered RC Doe RCr ee wale weave Leper veg‏ ۱ بازده واكننش ©00© دارد: غلظت بهينه يون متيزيم در واكنش 00© يك نا ‎iecd‏ ل غلظت بالاتر از مقدارتعیین شده, باعث تکثیر قطعاتی غیر از قطعه مورد ‎Us oul oul cule 9 orm )nolaisl fb oleled) sli‏ 54 1۱7 به کاهش کارایی واکنشس و میران تیلید ‎CER ep ys‏ 

صفحه 10:
آنزیم همم ‎Taq‏ این آنزیم برای تکثیر فطعات کمتر از سه هزار جفت باز توصیه شده است. لح احد از این آنزیم در 50 9 ی توان مقدارتعيين شده رادو تا سه برابر أفزأيش ‎aes op ae‏ ات ‎Pintle‏ ا 050 کر کر 5 ازيم لأ مولت ‎CO Meera el Een ae APHIS‏ ‎fas‏ گت روت بلس سوه( ۳ ارد رت ‎ane‏ ساره وی روت ب ‎a‏ . چون واه زه ملس بتک امد انجام. تدای ا 1 ‎FOR Cas‏ مقاوم ه حرارت بحت ‎Gl Taq‏ صا ‎ae‏ 

صفحه 11:
نوکلئوتید ها چهار نوکلئوتید تشکیل دهنده قطعه 0000 از اجزا واکنش 6۲ می باشند که به عنوان واحد های ساختمانی مورد نیاز در ساخت قطعه 008 استفاده می ‎plqrepeyereienrrTy‏ ا 0010 ‎lh 0) ll‏ ار یا ی ی را راو ‎JS boll‏ ‎eer ee‏ ا ل 1201125 الم ‎Cr‏ ‏5 ميلى مولار جود إنست. استفاده مى شود . به طور 

صفحه 12:
‘Onerd Of wsrro ytay ‎dl‏ رن رین لاسام و نار تبخیر نمونه در دستگاه چرخش حرارتي ۲ ۳ ‎es‏ ا ‎eer ALONSO‏ 1 ‎cies AAPA Gordes Mol) anti‏ 

صفحه 13:
ao \ Ss vl , ار سس 

صفحه 14:
0 ‏ا ان تسس‎ DENATURATION Lt (CO ‏ا‎ ese (CP IEC ION l*) (OC ROS ato. aarti BPS MOET bes (Wexerckry) tego al> yo (2 اتصال يرايمرها به نواحى مكمل روى ‎oust 9 DD®‏ محدوده تكثير قطعه (6)0-20 50 000009 (30-60 ثانيه) 3) مرحله سوم : 00 تکثیر قطعه 00(0) مورد نظر 2-۶20 ۰ (5 تا 15 ۳ 

صفحه 15:
Denature DNA RAD Extend Primers Anneal Primers On Temperature (°C) 

صفحه 16:
(Oa: processed sa cal.) 3 OF (OB: contain PCR reaction components 

صفحه 17:
ond rer mer Pv ae Bor Rees PS Res be are eee SIPS OCS) Popecene eK er We -c] Ped 000 ‏ا ا ا ا‎ 210011111110 re) ما ا ا ا 00 ‎Om Ety‏ ا م 00 تنظر براى تكثير ظراجى شده اند (يا نام برايمر يا آعازكر)ء به توالى هاق مكمل خود در دو زيقفته باز شد ال ا ا اا 00 ‎A ee ION ec WO cence Deri neer a pee pea Ss ipeery( Oy av Ds als;‏ زیرا مخلوط حاوی مقدار بیشتری مولکولهای کوچک (0000)به نام پرایمر(۳۷۲۴))است که درمحلهای ‎Been Wine |e UC meee eC ST)‏ در مرحله بعد, دمای واکنش تا 72 درجه سانتیگراد افزایش یافته . اين مناسبترین دما برای عملکرد آنزيم 00009)بليمران»»“موجود در مخلوط رس است. عمل تکثیر قطعه 00060) مورد نظر بین دو پرایمر ‎eiiearrresene erreicr na ieee‏ | ‎[Fee rere OS noch ne cerearen in eleven praroe ere nNprEae, ea proan‏ ‎PE rye nD RCNSCe tol ie Envy‏ ‎Be eeeK NeW] eee are irae eri cee Lay ieee ESP Boel)‏ 

صفحه 18:
نکات مهم در 04 سس سس یرون FES) ‏ال‎ ار را ‎Mal‏ ‏ممکن است با بخشهای غیر هدف هرید شود و سب بکتیر محسولات Several primer pairs can give ‏نا خواسته شوند.‎ ‏مه‎ ped << Hybridization sites ” يرايمرهاى بلند با اينكه موجب توليد ‎Uo Gen rs lee) eee‏ ‎[Proliseeyeverr Woven TT iy‏ ‎Iles yo ldoiguad a r5iuoDDO‏ 10 لع 7 ۳ (b) PCR of human DNA with 17-mer primers (Only the desired fragment is amplified 

صفحه 19:
0 0 pan) PROWr te Stal Orr ‏ا‎ ‎Berean Pee Ae en ‏ا ا‎ eT Ore eae reel )ree ory gee er ey ۱ Ad) J oye well sen cp eles all Neth ‏داشته باشد.هر پرایمر باید مکصل رشته الگو باشد تا هیبرید شدن‎ عوعوه ده ععری 4۵ - ل JS VEDLDEEOUD DDB BaD ‏هت‎ نت ی یله ‎ee emer‏ ریت 17 روا سییر ‎a Pa aU‏ STITT MEAT + 37 ‏ان‎ img SHI ELT Tr ULL ‏ی‎ LM ‏ین تین‎ att reverse: TO eRe aT CD 7 ۱ only UNTP's 1 مس ‎dy‏ یرد رو ین رو هلر و 

صفحه 20:
6 oS (800-50) Jlail slo % ‏ازنقاط بسیار مهم است که میتواند‎ ‏در اختصاصی بودن واکنش تاثیر‎ Ay Pip Piven Pe rete Pier ‏باشد هیچگونه هیپریداسیونی‎ Pp peer roared Retr] PVP) FP Be SOC) Arab ori glenn (Us ‏اه‎ ‎۳ ‏تشکیل خواهد شدکه در آنها همه‎ Rah remarry rere نشده اند. (0) Anneaing tomperatre ie oo high Primer nd tees ‏سم‎ سر (©) Anning tempeatre i to low 

صفحه 21:
en بت تال رال امین ان زر سس رای را ره ‎FCT‏ 0 تموزادهایساست برای تتکیل هییدهای ضحم الک ویر بايد 20-1بايين تر از دماى ذوب شدن (-1)باشد. Primer sequence: 5’ AGACTCAGAGAGAACCC 3 را از را ‎DSc‏ ار و ۱9 ” رس ار در برايمر ‎Ae‏ ا ۱ 

صفحه 22:
ا ا 0 0 ‏ا‎ nc eee gperccuren at op ee ne 51 1 ‏کار ا‎ > > > > ion opis 

صفحه 23:
PCRElgil 7 ا ا شلك Prot ‏ل ا‎ POR (CY LOX( SEIT Py 0 Cree C pegre ert] Ameer S) ira] Prev ‏ا‎ ser BP wREN ED] Bert A OXOIC) Reverse) pill oolaiwl L aloyo gul whl .crwl ox aslol POR alwwg, 9 2910 pro ji OOO® yl LoSo RO sol jl ( Precemripree RP ‏ی‎ Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction 5 ~<e ١ 22 

صفحه 24:
۳05 000 Sols eee pa Ged) ‏را را سر‎ eo I= WHS diel ore ONLI ara) sy caliel OL pee arp TeT ner ee Ip CaEE DUM ((( I] eee Serre EY) ar er an ae [19 ree ESO rc aoe per earl Pen 

صفحه 25:
POR ل Fo) ee CC Dem) ved eee pee ‏ا‎ ‎22940 cso orlaiwl! alizro در میکروب شناسي باليني, با استفاده از اين روش امکان شناسايي جندين عامل بيماري در يك نمونه بطور همزمان ‎dl> 222 12215 sla crigat Yloi ino 9 YI 2925‏ 

صفحه 26:
۳0 POR WLOT-GTORT 

صفحه 27:
3 ‎cerniyery‏ ار رن ‎EVP re Cees re) ‏ا‎ Ye Cran ‎1 Calle cane eae ‎221131011111 ‎31000 ‏” تعيين توالي 00009 ‏” تشخيص اختلالات كرموزومي ‏” انكشت نكارى زنتيى ۲ تشخیص بیماریها :امروزه بسیاری از بیماریهای ژنتیکی مانند :تشخیص را ار ا ا ا | ‎GH eeG en ae ie eer anu ee‏ او ار وا ‎Winn‏ او ‏ا د ل 5 ‎ 

صفحه 28:
۷ را می‌تولن‌به منظور شناسائوىميكرواركانيسم هايىويه كار برد که قابل‌کشت دویا سرعوشد نها در محیط کش خیلی ‎(rss pon Orta higlun Vee ee‏ » abl eo lbw wiley Iolo Gauy ys 72 POR 4819 oalaiul % دارو‌های مدرد اسعفاده در درمان سرطان داروه‌ای ستوتوکسکه ۱ همراه دارند. به همين دليل نيز سرطان شناسان مايلند كه از 7 ‎eee a ee‏ الا ا ‎CULT eM SUE SD Scot‏ ا ا ا ‎PERE‏ ‏م ‎ee a‏ ۱39 استفاده از 0008) دقت تعيين سلولهاى سرطانى بسيار بالا مى رود. به هنين دليل 8046© منفى را فى تدان بد معناى بهبودى كامل در نظر كرفت 

صفحه 29:
7 م ا ل 3 رنك كردن زل با ماده اى است كه 00009 را قابل رويت ميسازد. ‎Tver‏ ا ا ا ل اك 30 است 

صفحه 30:
لاا رك 0 ‏ا ا‎ Yet Sern B ST res Re ‏دهید [ معیولا یک ولتاز تابت: فسات پرشانتی متر با‎ ۱ ‏ان‎ are coctera (auger ere 0 3 ‏ا‎ 1 a)| ‏که دارای ات‎ ۱۷۸ مدت زمان الكتروفورر يستكى به فاضله انتقال. جريان توليد شده تس رفه باه هرادن معاطات ‎ey Dal pau oS‏ ONE mp irT TC Sel) sb 0 NeTTne ‏اتيديوم برومايد و در دماى اتاق. در صورت امكان در تاريكى ( ترجيحا‎ 000 ‏ا ا ل‎ ‏صورت لزوم با نكهدارى زل به مدت 30-10 دقيقه رنك يس زمينه را‎ حذف كنيد 

صفحه 31:
لك در الکتروفورز وقتی 0۸۷۵ بر روی یک غربال مولکولی مثل ژل آگارز در حضور باقر و تحت بانیر یک میدان الکتریکی فرار داده مى شوذیر ‎PAM‏ ‏وج ‎eke eae eed‏ نا ا ا ۱ ی رن و ی شب ست. در نمونة ‎eal ny‏ ا استاند ارد اها كم ترأورد كرد ‎