کنترل کیفی در میکروب شناسی

صفحه 1:
00 كنترل كيفى در ميكروب شناسى ‎jal sya eee y‏ ا لات 

صفحه 2:
Laboratory Quality Assurance ایجاد اطمینان در پزشک . بیمار و خود پرسنل آزمایشگاه در مورد اعتبار » ارزش » دقت و صحت آزمایشاتی است که در آزمایشگاه انجام میگیرد. 

صفحه 3:
نکات زیر در اسنقرار یک برنامه کتتر ل کیفی در آزمایشگاه میکروبیولوژی می باید پی گیری سود : ۱- تهیه متد مناسب برای انتقال و جمع آوری نمونه ۲- انتخاب پرسنل مناسب برای انجام آزمایش ۳- فراهم نمودن وسایل و امکانات لازم برای آزمایشات میکروبیولوژی ۴- توجه و دقت بر روی روشهای آزمایشگاهی و گزارشات برای تعیین درستی و اطمینان از نتایج ۵- شناساتی خطاهای آزمایش و تصحیح آنها 

صفحه 4:
سه مرحله از فعاليت هايى كه نتايج روشهاى 1زمايشكاهى را تحت تاثير قرار مى دهند مت ‎Laced)‏ ‏پیش آزمایش ‎er adel)‏ آزمايش Post analytical ‏.بس آزمايش‎ نوع فعاليت درخواست آزمايش آماده سازى بيمار جمع اوری نمونه انتقال نمونه ‎So Ce Tee nC res acl‏ ارائه نتايج بازنگری نتایج ۳ 

صفحه 5:
نكات مورد توجه در هنكام دريافت نمونه 0 ‏ا ار‎ Soren e آیا در ظرف مناسبی جمع آوری شده است آيا از ورود فلور نرمال جل وكيرى شده است Ree Oren ee een ne reper Sere ry یک نمونه غیر قابل قبول دارای خصوصیات زیر است ‎Se nee ry ae‏ ۹[ Ont sohT pd ble. cS ie penal ye er ety ‏ا‎ LES Ey ecole lire] penny peep ens eee Oe [7 peer 

صفحه 6:
ل ل ‎See A)‏ ا ا 0 1 ‎ie Ce T esa‏ ات ا ا ا ‎Re‏ ۳ ۰ درصد وی کمتراز نمونه های ادرار باید دارای کلنی کانت ‎OG Sa oe‏ بعنوان انديكاتور آلودكى داشته باشند. 1۱ 8 1 chino ae ere tee Siro sarod) ۵) حجم خون کمتر از میزان استاندارد در ۵ بطری های کشت خون وجود داشته باشد . 

صفحه 7:
امکانات و تسهیلات مورد توجه در آزمایشگاه ا ل 1 فال روشنابى- © فضاء]زمايشكام -© اس ركه ew es ۳۳۵ دما سنج فريزر هود وسايل شيشيه اى 

صفحه 8:
كاليبراسيون ميزان الحراره ‎SAC aa es CASl‏ نحوه نگه داری: قرار دادن در گلیسرول (OCCT (OCA ‏ا لل‎ ARSE er eT an eer sia eee ee sn en eae en eras < ‏اختلاف ۱ درجه سانتی گراد‎ EOP pean es :نحوه كاليبر كردن ‎San eee en ae Saree Bd‏ ل ‎baad ae a ere een ee Se ee eee oe a 9 - ‏لنجام لین روش رلعدرجه حراردتهای۳۷ و ۵۶ درجه سانتی‌گراد‎ ‏ل ا ل بن‎ 

صفحه 9:
زمان کنترل دستگاه هر "ماه هر 1 ماه ۳1۳ هر ماه هر "ماه Oe ‏لع‎ روش‌های نگهداری و بازرسی زمان و درجه حرارت برای هر ازمان كارى ثبت شود پر ا اه روزانه ثبت شود ۱( 30020 شود روزانه ۲-۸ درجه سانتی‌گراد ا داخل دستگاه را ماهی یک بار تميز كرده و أب أن را عوش 559505-50 نحوه اجرا داخل فور هر ماه تمیز شود دیوار و قفسه‌ها هر ماه تمیز شود بعد از کار روزانه لنزها با کاغذ نز پاک‌کن تمیز شود. ‎Preece eae OPO)‏ ‎Bead‏ 0 ‎EN SS‏ برای محافظت از گرد و خاک روپوش آن کشیده شود. هر دو ماه یک بار یخچال را ا ۱ ۱ هر روز یادداشت نمائید ‎Peet eal)‏ سانتی گراد) تغیبرات مجاز وسایل و دستگاه‌ها فور [برای استریل کردن وسایل شیشه‌ای) اتو (انکوباتور میکروسکوپ بن‌ماری 

صفحه 10:
زمان كنترل دستكاه هر "ماه هر هفته هر 1 ماه گردگیرهای موتور سالینه عوض شود. 7 ماه و یا 6 ماه ادامه جدول - كنترل كيفى وسايل روش‌های نگههداری و بازرسی روزاته ۰- تا ۸- درجه سانتی‌گراد 0 ‎er rer‏ (ندیکاتو) تین بو با هر ار استفده ل شود Bere ers ‏بورسى انسود. ثييت زمان؛ حوارت و‎ ۱ Ree Se en eran een reer eT RC Ree gees] ‏با هر بار استفاده‎ 7 STO arses ‎a)‏ وتا ‎are rarer ry ‏بعد از هر دوره كارى دوماره فعال شود‎ )2 ‏ديجه سلترهراد‎ 18١ ‏لمينساعتو‎ ‏امحفظة يايد هسه ماد يسكيس عو‎ ‏شي‎ ‏همه تمر شده و آب آن عوضن شنود ‏ديواردهاى داخل سانتريفوز را ‏هر هفته یا بعد از شکستن و ‏ریختن مواد داخل آن با مواد ضدعفونی باید تمیز کرد. ‎Pete ‎ ‏وسایل و دستگاه‌ها ‏قریزر ‎ ‎ ‎ ‏بىهوازى ‏اتوکلاو ‏سانتريفوز ‏الام مقر ‎۳ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ 

صفحه 11:
کنترل کیفی محيط كشت ا م تاريخ مصرف محیط کت 00200 ‏ا‎ ed تاريخ استفاده بررسى ظاهر محيط 0 5 lo ear tere sod عدم مخلوط کردن محیط‌های جدید و قدیم ۱ استفاده از ارلن با ظرفیت بیشتر از نصف حجم محیط عدم حرارت‌دهی زیاد oe eee 

صفحه 12:
كنترل كيفى محيط كشت ج - بعد از ساخت و هنگام مصرف ۳ استريل بودن محيط امكان رشد میکروارگانیسم مورد نظر ايجاد ويكى مورد نظر عدم وجود شيار در محيط ارتفاع مناسب محيط ‎peeve) ad‏ ۳ 

صفحه 13:
جدول : علل اشکالات رایج در محیط های کشت 

صفحه 14:
کنترل کیفی ممیط از نظر رشد باکتری مورد نظر(مغذ ی بودن ) ا ‎ese‏ ‏۳ ‏تهیه رقت ۱/۱۰۰از سوسپانسیون و برداشت ۱۰میکرو لیتر و کشت بر روی پلیت و شمارثل کلنی ego tenant ie Sree كنترل كيفى محيط ١ز‏ نظر خصوصيات ممانعت كنندقى تهیه سوسپانسیون باکتری در سرم فیزیولوژی و ‎SSeS eB Roeser‏ ل ۱9 RO ‏ی‎ VU ‏م‎ UG) eee ee Ce A El ee ee nae ‏نتایج مورد انتظار: مشاهده وا کنش منفی و یا مثبت با باکتری‌های مورد نظر‎ ‎Re CLS ae Opie‏ يي ا ل ل 

صفحه 15:
نموه نگه‌داری ممیهاهای کشت پس از ساخت a ۱ ase caw ee ES EC 7 ery .پلیت‌ها در صورت نگه‌داری در کیسه‌های پلاستیک تا ۴ هفته قابل مصرف هستند ۱ eer mat ENE TIP) BOM sere Pr 

صفحه 16:
‎ow)‏ كاير ‏" در صورت خيس بودن سطح آكار در زمان مصرف, ظرف يتري را به مدت 30- 10 9 نيمه بازء زير هود كلاس |ادر حرارت ۱ قرار دهید تا رطوبت اضافی آن تبخیر گردد. براي تلقيح باكترى» سطح محيط كشت بايد مرطوب ولى ‎eID re kes)‏ ۱( 0 ۱۳ ‎0 ‏باشد. 

صفحه 17:
000 Antimicrobial Disks bole Tel Mold eee tet eer ‏ذخيره سازي‎ © ‏ىاوتط اقتطمى تأصساغمم)‎ © جهت نكهدارى ديسك ها توجه به شرايط زير ضرورى است: 01 ‏ل ا ا‎ ern ‏کمتر) یا در م کنید. دیسک ها‎ ‏تباید در فریزرهايي با قابلیت ذوب یخ خود به خودی نگهداری گردند. بسته‎ ۱ ‏ا‎ Se Ree eee is Tele Oe eet ieee oa hate ae Dee 9 ‏ا ا‎ See ed eo SS ee en ep ae See Sree ‏الل‎ ‎ee SES Ie ite eee ‏ا‎ © بسته هاي باز نشده حاوى ديسى را ©-1) ساعت قبل از مصرفء از يخجال يا ل ا ل ل زده و متعا 11111111111 

صفحه 18:
" يليت را بر روى دريوش آن ۹ قیفه از دیسک گذاری به انکوباتور 35 + 2 0 منتقل نمایید. دماى انكوباسيون بالاتر از35 5 © ممكن است مانع از رشد ۳ هاى مقاوم به متي سيلين كردد. 1 استريتوكك ها از قرار دادن يليت حاوى ديسك در انكوباتور ‎CO;‏ دار خوددارى نماييد» جون ‎CO;‏ 1 اك برخی دارو ها را به طور مشخصی تغییر مي دهد 

صفحه 19:
First streak Initial innoculum Second streak First Second quadrant | _ quadrant quadrant quadrant 1-2+ growth 4+ growth FIaURE 9.10 Streaking pattern for primary inoculation of plates to achieve isolated colonies, Growth in the initial half of the plate only is semiquantitated as 1+ or 2+ (sparse): growth into the third quadrant is reported as 3+ (moderate); and growth into the fourth quadrant is, reported as 4+ (heavy). If numbers of colonies can be counted, this number should be reported. 

صفحه 20:
کنترل کیفی ممیداهای کشت معمول با باکتری مورد نظر و نتایج مورد انتظار انتيجه قابل انتظار ‎See ererey‏ ۳ ۱0[ دارای همولیزآلقا منفی زرد AIA AIK/A ‏رز هام‎ ALK/ALK اركانيسمهاى كنترلى انتروكى ‎tol‏ 0 استريتوكك بيوزن استریتوکک پنومونیه هموقیلوس آنقلوانا نایسریا گونورد سالمونلا شیکلا 007 ‎ol‏ ‏007 ‏پروتئوس میرابیلیس انیت دااه‌ون5 ارات شالت 05 ل تیا زمان ۶ ساعت كه 4 ساعت 4 ساعت ۸ ساعت 8 ساعت 4 ساعت محيط بایل اسکولین/آگار بلاد أكار شكلات أكار لايزين دكرب و كسيلاز محيط ‎Ea‏ ترا فا يوشانده شود اورنيتين بنین (دی هیدرولاز) 001000 

صفحه 21:
کنترل کیفی ممیداهای کشت معمول با باکتری مورد نظر و نتایج مورد انتظار انتيجه قابل انتظار كلنىهاى قرمز رنك كلنىهاى بىرنك (بدون سوارمينكق) ت قرمز بعد از اضافه کردن معرف منفى عدم رنك قرمؤ در سطح محیط زرد ۱ تامع .ع پروتئوس ۳ ‎arr‏ كلبسيلاينومونيه EE Ear 5. ‏وتلتصععل امع‎ 0 ‏عبسی‎ ‎spp ‎E. Coli aon ‏تسس یت را‎ ‏سودوموناس‎ ‎0777 0 ۶ ساعت ۸ ساعت 4 ساعت ve 4 ساعت 24 مانیتول سالت آگار تا DNASE Agar UD AN Re} Roe ered Pee hl ears poe 

صفحه 22:
لعا ل ا ا ا لاا 00 بعد از ضاف كرتن كلرور شريئ ‎21١‏ ‎io‏ ‏کلنی‌های بی‌رنگ با مرکز سياه کلنی سبز به مرکز سیاه کلنی سبز شفاف رشد محدود شونده با کنینارنجی کلنی در مرکز سیاه در اطراف کلنی هالة قرمز كلنى بى رنك شفاف (قرمز) كلنى زرد ارانیسم‌های کنترلی ‎E. Coli‏ نایسریاگووره ‎eA rs ae Pay fey‏ 4 ساعت 4 ساعت 4 ساعت 4 ساعت 4 ساعت كك 558 bow CCCI) فنيل ألانين دأميناز 00 ی ۲۵ ار ۰8 پیت ا ا د 

صفحه 23:
لعا ل ا ا ا لاا ee 0 Lae (ea ‏سطح فش - عمق زرد‎ 110 سعطح قرمز - عمق زرد ‎oe tad‏ 0 بعد از کشت مجدد رشد نمی‌کند رشد منفى Peery کلنی‌های زرد رنگ ارشد منفى رشد متبت رشد مثبت 7 رشد خوب با جلای فلزی ere ere 3 اركانيسوهاى كنترلى تامع .ع شيكلا 007 00 000 تامع .ع تامع .ع عدععامط متءطآلا 3 سیسات een 1 ‏انايسرياكنوره‎ ‏تامعع‎ ‏كانديدا الييكائنس‎ 50 ‏تام .ع‎ ‏تیش یا یزاگ‎ raed 0 ساعت24 ساعت24 سعاعت48 ساعت24 ساعت24 ۳ 00 ساعت24 محيط لايزين آيرون أكار هلا ۱ ( سیمونز سیترات ی تتراتیونات براث Raa Peer E.M.B 

صفحه 24:
خطاهای رایج در تهیه محیط های کست : ‎-١‏ عدم دقت در وزن کردن محیط ‏۲- استفاده از محیط های تجزیه شده ‏۳- عدم دقت در اندازه گیری حجم آب 5 ۴- استفاده از ظروف و وسایل آغشته به دترجنت و سایر ‏مواد شیمیاتی ‏۵- خوب حل نشدن محیط ‏عب حرارت دادن بیش از حد در طی تهیه و هنگام استرلیزاسیون ‏۷- ۷« تامناسب محیط ‏۸- عدم دقت در اضافه تمودن مواد ‎Enrichment‏ ‏> مسائل مربوط یه عملکرد آزمایشگاه ‎ ‏خرید محیط هاتی که کیفیت خوبی ندارند. ‎ ‎ 

صفحه 25:


صفحه 26:
رش های مختلف ساخت رنگ گرم روس هاى 4 ۰ گرم ‎-١‏ كريستال ويوله ‎he‏ ‏= ع كرم ؟- يدكريستال ۷ يدور يتاسيم ۳ آب مقطر ۱ = ۳ ۰ میلی لیر اتانول ‎a‏ ‏؟- سافرانين ی تر أب مقطر 

صفحه 27:
22 ۱- کریستال ویوله ۲ گرم اتانول 780 ‎Yomi‏ ‏اگسالات آمونیوم ‎lhe‏ ‎Vee ml pune]‏ ۲- یدکریستال ۱ گرم ید ۲ گرم ان هار ‎feral‏ ‏© الكل ۵۰ ميلى ليتر ‎or oe‏ ۴- سافرانین وود اتانول ۱ ۰ ميلى ليتر به ‎٠٠١‏ ميلى ليتر أب مقطر اضافه شود 

صفحه 28:
‎Sus 1)‏ بردن ارگ ات ادك اكت ‎Mee its‏ 2 55 ‎Cees) ode esc!‏ > ضحیم بودن لام كر الزايش زمان تيتساسيرن ر نتش الثل در منانة ييتيدركلوتان. ‎Gy‏ نبودن زمان رنگ بر 

صفحه 29:
زمان کنترل هر ویال جدید هر بار استفاده ees 00000 ۳۹ Sea Pal CL ead هر ویال جدید. هر ویال جدید كنترل كيفى رنكها و معرفها ear ‏ديسك باسيتراسين‎ ‏كاتالاز‎ ‎(Greene) ‏رت‎ ار رنكأميزى كرم تاره ديسك ايتوجين اكسيداز (ديسكيانوار) فاکتور ۷ err) 2 2 5 ۳ xen ‏استربتوكك ينومونيه‎ 663ل عوط 0 ‎ro‏ نل ‎ ‏انتروكوى ‏فكاليس ‎ee) ‎5227 ‏ابيدرميديس‎ ‎Co eared ‏اشر يشسياكلى‎ ‏سالموثلا‎ ‏استرپتوکک‎ ‎et) ‏نای .ع‎ ‏هموفیلوس ‏۳ ‎ ‎۳۹ ‎8۸2 ‎iaeog‏ زرا ارت را ‎1.5. ‎ ‏ارو ‏در لام به صورت 00010000 ۳ ‏8.2 ‏ارو ‏ارو ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ 

صفحه 30:
با هر ویال جدید 2000007 ‎ey‏ 00000 ماه هر بار استفاده 000 00 Ey Lee Pa Es |i) معرف یا رنگ ‎aS‏ ‏0101000 ‏ل ‏رنگ آمیزی ۳ ‎RO Pee ea‏ آنتی سرم باكترى مورد نظر لیامت ‎Crt a)‏ ‎streptoccus‏ E. Coli ‏كوواكس‎ E. Coli Lis Klebsiella ۷۴ E. Coli ‏نتیرات‎ ‎ead‏ تا انواع غیر اسیدفاست ‎۳ ‎Enteroccus ‏وااعتوطء لكا ‎Par TY ae ‎Ray tas 9 ‎[bee ‏كنا ‏گسترش تهیه شده از 05 ‎15۸ ‎BA ‎BA ‏ات‎ ‎۳۴ ‎۷۴ ‎۱ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ ‎ 

صفحه 31:
‎LYN)‏ را ردان ‏الف - طولانى مدت ا م ا ل ا 1 در لولههاى كوجكك در بيجدار تقسيم مىشود و در ‎-٠١‏ درجه سانتى كراد نكهدارى ل 00000 ۱ م ا ل ا ل ال ‎Eee ree OEMs‏ ‎ToT‏ ل ا ل ا 0 ‎Pee 8‏ ا ‎Rea Ged ced Saat‏ ۱ ‎Err‏ ا ا ا ا يا ا ‎eS COA SINC‏ می‌شود): ‎Pe emer‏ ۱ ‎۱ ‎9 ‏ل سن كر حي اا ‎A ae a‏ 5 اد ای اه ۱۳1 ‎ 

صفحه 32:
0 ec ip vtrore tag ‏عت‎ ey lees NS | ‏ل‎ eel en ean تجدید کشت هر دو هفته یک بار 00 ‏و‎ Oe Ne ‏ا‎ pcan Cooked weat broth bow برای بی‌هوازی‌ها نگهداری در دمای آزمایشگاه تجدید کشت هر دو ماه یک بار ب - روش نگهداری کوتاه مدت a eee Ce Set ee Seo kan ee eal 000 mera قاری در حول تجدید کشت هر دو هفته یک بار 

صفحه 33:
" - استريتكوككها | aES mera ‏يس از رشد باكترى نكهدارى در يخجال‎ ‏تجدید کشت هر دو هفته یک بار‎ وس سس مر سر رس نوع محيط شكلات آكار تجدید کشت کمتر از یک هفته 1 9 0 2 1 een ie BEES VC 0 ‏ا‎ aes) 

صفحه 34:


صفحه 35:
0 از محلول ذخیره 022/100 رقت مد مسد و ‎5h 25k 1252 0625+‏ مقناز ماذةار ار ‎ 

صفحه 36:


صفحه 37:
Rapid Catalase Test for Enterobacteriaceae 6 ۱۷/۵۱۱-۱50۱3160-0 ۵0۲ 62016۲ 196 عبا0] ‎on SBA or‏ ۱۱ لإموامء وصناملا ‎MacConkey with a wooden stick to‏ ‎transfer to a clean ,dry glass slide‏ ‎Dose not test from Muller-Hinton Agar ®‏ ‎(MHA)‏ Place 1 drop of » . H,0, and observe ® immediately bubbles 

صفحه 38:
Citrate Utilization Test Simmons Streak slant back & forth with 9 #™ ۱11۱ ‏رت راد‎ In =)| isolated colony Place cap loosely on tube , aerobic ® environment Incubation at 35°C to 37°C for up to 27 ‏ج‎ ‎days Positive : growth + blue ® Negative : No growth + green ® 

صفحه 39:
Citrate Utilization Test Simmons Streak slant back & forth with 9 #™ ۱11۱ ‏رت راد‎ In =)| isolated colony Place cap loosely on tube , aerobic ® environment Incubation at 35°C to 37°C for up to 27 ‏ج‎ ‎days Positive : growth + blue ® Negative : No growth + green ® 

صفحه 40:
Citrate Utilization Test Simmons Agar Slant " Bromthymol blue ® pH 6.8 green (negative) to blue pH - > 7.6 (positive) Inspect agar for evidance of ® freezing ,cracks , dehydration , bubbles ,before use and discard any tube that Blue 

صفحه 41:
Citrate Utilization Test Simmons Do not inoculate from broth cultures , due to ® carryover of media To avoid false-positive reactions , use a light " inoculum to prevent carry over of substance from previous media Luxuriant growth without color change may ® indicated a positive test. if agar dose not turn blue on further incubation ,test should be repeated with less inoculum 

صفحه 42:
روش كار :_ + 1 باكترى را در روى سطح شيب دار محيط كشت دهيد ودرب لوله را محكم نبنديد. 1 1 لوله را در 00 ال 1 66 ساعت تا 6۴ روز انکوبه کنید. 

صفحه 43:
Spot Indol Test Colonies from SBA & rub on filter paper Tryptophanase breaks down ® tryptophan to realease indole ۳/۵ لطاع 320310 مصاع مطامط ۵( Blue color within 30 sec ® 

صفحه 44:


صفحه 45:
انيرا MR VP Incubate for minimum 48 hrs ® If results are equivocal at 48 hrs " repeat test for 4 to 5 days MR: 5 to 6 drop of MR reagent ® per 5 ml broth VP : 6 drop alpha naphtol & 2 ® drop KOH 

صفحه 46:


صفحه 47:
روش كار " الف) در © ميلى ليتر محيط ‎]/118-١/5‏ كشت دهيد وبمدت ©© ساعت در ©© درجه سانتى كراد انكوبه كنيد. ی * ج) 6 قطره از معرف متیل رد را بل .واکتش مثبت با رنگ قرمز واکنش منفی با رنگ زرد مایل به نارنجی 

صفحه 48:
Lysine Iron Agar (LIA) 

صفحه 49:


صفحه 50:


صفحه 51:


صفحه 52:
Presumptive report: Gram-Positive Cocci 

صفحه 53:
Serotyping / Serogrouping Typing Should be performed from a ® non-sugar containing medium ,such as 5% sheep blood agar (°.’) or LIA Use of sugar containing media , ® such as MacConkey or TS! agars , can cause the organism to autoagglutinate 

صفحه 54:
* روش ‎LIS‏ ‏- با استفاده از یک آنس از مرکز یک کلنی ایزوله برداشت کنید. ۷ نوک آنش را درداخل قسمت پائین لوله وارد کنید و بعد در سطح شیب دار کشت د. با ۹ 

صفحه 55:


صفحه 56:
نکات قابل توجه در مورد ساخت محیط ۱ ‏ف ا ل‎ 2 ‏ا‎ S SSB yee) eS Se See EES Teese eS ‏تيره تر ظاهر شوند.‎ 

صفحه 57:


کنترل کیفی در میکروب شناسی رشیدی-سوپروایزر بیمارستان باهنر سه مرحله از فعاليت هايي كه نتايج روشهاي آزمايشگاهي را تحت تاثير قرار مي دهند نوع فعاليت مرحله درخواست آزمايش ‏Pre analytical پيش آزمايش آماده سازي بيمار جمع اوري نمونه انتقال نمونه ‏Analytical آزمايش ‏Post analytical پس آزمايش انجام روش هاي آزمايش بر روي نمونه توضيح نتايج ارائه نتايج بازنگري نتايج عملكردهاي انجام شده بر اساس نتايج نكات مورد توجه در هنگام دريافت نمونه آيا نمونه معرفي كننده شرايط عفونت ميباشد آيا در ظرف مناسبي جمع آوري شده است آيا از ورود فلور نرمال جلوگيري شده است آيا نمونه در زمان مناسبي گرفته شده و در محيط ترانسپورت قرار داده شد يك نمونه غير قابل قبول داراي خصوصيات زير است 1م/شخصاتس/ت ا/ .ن//مون/ه ف///اقد .ق//سمتخ/ار/ج/يظ/رفن//مون/ه آ/لود/ه /م/يباشد2- .ن//مون/ه در ظ/رفن//ام/ناس/بيق//رار دارد 3- .ف///اص/له ز/ياد/يب///ينز/مانن//مون/ه ب///ردار/يو ت///حويلآنب///ه آز/مايشگاه /و/جود دارد 4- 5.م/يزا/نن//مون/ه ك///اف/ين//يست ميزان قابل قبول در ارزيابي موارد ذكر شده بصورت زير مي باشد 5 )1درصد ويا كمتر از كشتهاي خون بايد فقط شامل يك نمونه باشد. 3 )2درصد ويا كمتر از كشت هاي خون مي تواند حاوي فلور نرمال پوست باشد 10 )3درصد وياكمتراز نمونه هاي ادرار بايد داراي كلني كانت در رنج ()10^4 -10^2 بعنوان انديكاتور آلودگي داشته باشند. )4بيشتر از 3كشت خون در يك دوره 24ساعته بيش از سه نمونه مدفوع برای آزمايش انگل ويا نمونه گيري مجدد از هر نوع نمونه براي كشت نبايد شامل بيش از %2همه موارد باشد . )5حجم خون كمتر از ميزان استاندارد در %5بطري هاي كشت خون وجود داشته باشد . امكانات و تسهيالت مورد توجه در آزمايشگاه ت///هويه و در/ج/ه ح/رار/تو ر/طوب/ت1- رو/ش/نايي2- ف////ضايآز/مايشگاه3- / :و/سايل4- ترازو م/تر ‏PH CO2انكوباتور دما سنج فريزر هود وسايل شيشيه اي پالستيكي كاليبراسيون ميزان الحراره ‏Thermometer calibration نحوه نگه داري :قرار دادن در گليسرول نحوه كنترل بر اساس دستور العمل )NBS (NIST 2تا 8درجه سانتي‌گراد -20 ،درجه سانتي گراد 37 ،درجه سانتي گراد 56 ،درجه سانتي گراد معيار غيرقابل قبول: اختالف 1درجه سانتي گراد ≤ :نحوه كاليبر كردن ق//رار داد/نت///رموم/تر ا/س/تاندارد و س//اير ت///رموم/ترها در ي//خ – 1 /ت/دد ص//فر ت///رموم/تر ا/س/تاندارد ب///ا س//اير ت///رموم/ترها – 2 م/قايسه ق//را/ئ ع ا/ن/جام ا/ينرو/شب///را/يدر/ج/ه ح/رار/تهاي 37و 56در/ج/ه س//ان/تيگ///راد – 3 ث///بتر/ج/ه ح/رار/تب///ر رو/يك///اغذ ل//گار/يتمي– 4 د كنترل كيفي وسايل زمان كنترل دستگاه روش‌هاي نگهداري و بازرسي نحوه اجرا وسايل و دستگاه‌ها هر 6ماه زمان و درجه حرارت براي هر زمان كاري ثبت شود داخل فور هر ماه تميز شود فور (براي استريل كردن وسايل شيشه‌اي) درجه حرارت در شروع كار روزانه ثبت شود ±35/5 1 ديوار و قفسه‌ها هر ماه تميز شود اتو (انكوباتور) 4مرتبه در سال كندانسور هر ماه بايد تنظيم شود بعد از كار روزانه لنزها با كاغذ لنز پاك‌كن تميز شود. قسمت‌هاي مكانيكي هر هفته تميز و روغن زده شود .بعد از كار كردن با ميكروسكوپ براي محافظت از گرد و خاك روپوش آن كشيده شود. ميكروسكوپ هر 6ماه روزانه 2-8درجه سانتي‌گراد ميزان تغييرات هر دو ماه يك بار يخچال را تميز و عاري از برفك نمائيد يخچال هر 6ماه داخل دستگاه را ماهي يك بار تميز كرده و آب آن را عوش نمائيد هر روز سطح آب را كنترل نمائيد .درجه حرارت را اول هر روز يادداشت نمائيد ( 38-36و 55-57درجه سانتي‌گراد) تغييرات مجاز بن‌ماري هر 6ماه ادامه جدول -كنترل كيفي وسايل زمان كنترل دستگاه روش‌هاي نگهداري و بازرسي نحوه اجرا هر 6ماه روزانه -20تا -8درجه سانتي‌گراد -60تا -75درجه سانتي‌گراد در موارد برفك Defrost فريزر هر هفته زمان بي‌رنگ شدن نوار معرف (انديكXاتور) متيلن بلو با هر بار استفاده .كنترل شود هر هفته تميز شود .محفظه محتواي كاتاليست بعد از هر دوره كاري دوباره فعال شود ‌گXراد (2 اXين)سXXاعتو 160درXجXه سXXانXتي مXحفظه بXXايد هر سXXه مXاه XيXكبXXار عXوض .شXXود .ش جار بي‌هوازي هر 6ماه هر دفعه قبل از شروع كار سXطح آب آن بررسي شود .تثبيت زمان ،حرارت و فشار براي هر نوبت كاري ،كنترل (Sporeاتوكالو با نوار مخصوصدرهر هفته )Strip هر ماه تميز شده و آب آن عوض شود اتوكالو گردگيرهاي موتور ساليانه عوض شود. ماهانه با تاكومتر كنترل شود. ديواره‌هاي داخل سانتريفوژ را هر هفته يا بعد از شكستن و ريختن مواد داخل آن با مواد ضدعفوني بايد تميز كرد. سانتريفوژ آزمايش با محلول استاندارد pHبا هر بار استفاده تغييرات ± 0/1 - pHمXتXر 50فيت در هر دقيقه كنترل جريان هوا كابينت ايمني 6ماه و يا 4ماه وسايل و دستگاه‌ها كنترل كيفي محيط كشت الف – قبل از ساخت تاريخ مصرف محيط كشت ثبت زمان دريافت و كارخانه سازنده تاريخ استفاده بررسي ظاهر محيط نگه‌داري محيط در حرارت مساوي يا كمتر از 25درجه سانتي‌گراد ب – هنگام ساخت ترازوي دق/يق نكات نوشته شده بر روي قوطي عدم مخلوط كردن محيط‌هاي جديد و قديم آب‌كشي ارلن و ساير ظروف با آب مقطر استفاده از ارلن با ظرفيت بيشتر از نصف حجم محيط عدم حرارت‌دهي زياد بررسي پليت‌ها كنترل كيفي محيط كشت ج – بعد از ساخت و هنگام مصرف كنترل pH استريل بودن محيط امكان رشد ميكروارگانيسم مورد نظر ايجاد ويژگي مورد نظر عدم وجود شيار در محيط ارتفاع مناسب محيط عدم انجماد محيط آلودگي كنترل كيفي محيط از نظر رشد باكتري مورد نظر(مغذ ي بودن ) تهيه سوسپانسيون از رشد تازه باكتري در سرم فيزيولوژي استريل مقايسه كدورت با استاندارد كدورت 5/0مك فارلند تهيه رقت 1/100از سوسپانسيون و برداشت 10ميكرو ‌ليتر و كشت بر روي پليت و شمارش كلني نتايج مورد انتظار :رشد مناسب باكتري1-2 ×104 كنترل كيفي محيط از نظر خصوصيات ممانعت‌كنندگي تهيه سوسپانسيون باكتري در سرم فيزيولوژي تهيه رقت 1/10و كشت 0/01ميلي‌ليتر بر روي پليت نتايج مورد انتظار :ممانعت از رشد باكتري مورد نظر 1-2 ×105 كنترل كيفي محيط‌هاي ساخته شده در لوله آزمايش 0/01ميلي‌ليتر از سوسپانسيون باكتري در هر لوله كشت شود. نتايج مورد انتظار ‌:مشاهده واكنش منفي و يا مثبت با باكتري‌هاي مورد نظر كنترل كيفي محيط‌هاي كشت با هر محيط جديد انجام مي‌شود. نحوه نگه‌داري محيط‌هاي كشت پس از ساخت نگه‌داري در يخچال 2-8درجه سانتي‌گراد محيط تايوگليكوالت براث در دماي محيط .پليت‌ها در صورت نگه‌داري در كيسه‌هاي پالستيك تا 4هفته قابل مصرف هستند لوله‌هاي در پنبه‌اي تا 3هفته (قطر پنبه زياد باشد) لوله‌هاي در پيچ‌دار تا 3ماه رطوبت Moisture در صورت خيس بودن سطح آگار در زمان مصرف ،ظرف پتري را به مدت 10 -30 دقيقه در انکوباتور c °35و يا با درپوش نيمه باز ،زير هود كالس IIدر حرارت اتاق قرDار دهيد تا رطوبت اضافی آن تبخير گردد .براي تلقيح باکتری ،سطح محيط كشت بايد مرطوب ولی فاقد قطرات آب بر روی آگار يا درپوش ظرف پتري باشد. ديسك هاي ضدميكروبي ‏Antimicrobial Disks ‏ ‏ ‏ ‏ ذخيره سازي ديسک های ضدميكروبي (Storage of )Antimicrobial Disks جهت نگهداری ديسک ها توجه به شرايط زير ضروری است: ديسک ها را تا زمان انقضاء بايد در يخچال (دمای 8درجه سانتی گراد يا کمتر) يا در فريزر ( -14درجه سانتی گراد يا کمتر) نگهداری کنيد .ديسک ها نبايد در فريزرهايي با قابليت ذوب يخ خود به خودی ،نگهداری گردند .بسته های باز نشده ديسک های كالس بتاالکتام بايد در فريزر نگهداری شوند و به مقدار كم و مصرف حداكثر يک هفته ،از فريزر درآورده شوند و در يخچال نگهداری گردند .بعضی آنتی بيوتيک های حساس (مانند ايمی پنم ،سفاکلر ( )cefaclorو ترکيبات حاوی کالوالنيک اسيد) در صورت نگهداری در فريزر تا زمان مصرف ،از پايداری بيشتری برخوردار خواهند بود. بسته هاي باز نشده حاوی ديسک را 1-2ساعت قبل از مصرف ،از يخچال يا فريزر خارج كنيد تا به دمای اتاق برسد .اين کار تماس هوای گرم با ديسک يخ زده و متعاقبا" تغليظ دارو در سطح ديسک را به حداقل مي رساند.  پليت Dرا بر روDی درپوش آن برگردانده ،ظDرف مدت 15 Dدقيقه از ديسک گذاری به انکوDباتوDر co 2 ± 35منتقل نماييد. دمای انکوباسيون باالتر از c o 35ممکن است مانع از رشد استافيلوکک های مقاوDم به متي سيلين گردد. به استثنای گوDنه هموDفيلوس ،نيسريا مننژيتيديس و استرپتوDکک ها از قرار دادن پليت DحاوDی ديسک در انکوDباتوDر CO2دار خودداری نماييد ،چون CO2قطDر هاله عدم رDشد برخی دارو ها را به طDور مشخصی تغيير مي دهد كنترل كيفي محيط‌هاي كشت معمول با باكتري مورد نظر و نتايج مورد انتظار ارگانيسم‌هاي كنترلي زمان محيط نتيجه قابل انتظار انتروكك استرپتوكك پيوژن 24ساعت بايل اسكولين آگار رشد مثبت و داراي هموليز بتا رشد مثبت و داراي هموليز آلفا استرپتوكك پيوژن استرپتوكك پنومونيه 24ساعت بالد آگار رشد مثبت رشد مثبت هموفيلوس آنفلوانزا نايسريا گونوره 24ساعت شكالت آگار رشد مثبت و محيط سياهرنگ مي‌شود رشد منفي مثبت بنفش منفي زرد سالمونال شيگال اليزين دكربوكسيالز محيط به وسيله روغن استريل 24ساعت پوشانده شود مثبت بنفش منفي زرد سالمونال كلبسيال 48ساعت اورنيتين مثبت بنفش منفي زرد سالمونال پروتئوس ميرابيليس 48ساعت آرژينين (دي هيدروالز) ‏A/A ‏AlK/A ‏ALK/SH2 ‏ALK/ALK ‏E. Coli ‏Shigella ‏Salmonella ‏Psudomonas 24ساعت محيط KIAو TSI كنترل كيفي محيط‌هاي كشت معمول با باكتري مورد نظر و نتايج مورد انتظار نتيجه قابل انتظار كلني‌هاي قرمز رنگ كلني‌هاي بي‌رنگ (بدون سوآرمينگ) رشد منفي منفي (سبز رنگ) مثبت (آبي رنگ) كلني‌هاي زردرنگ كلني‌هاي قرمز رنگ رشد منفي ‏VP ‏VP -MR+ +MR- زون شفاف بعد از اضافه كردن اسيدكلريدريك N 1 بدون زون رشد خوب بدون رشد مثبت قرمز بعد از اضافه كردن معرف منفي عدم رنگ قرمز در سطح محيط زرد ارگانيسم‌هاي كنترلي زمان ‏E. Coli پروتئوس انتروكك 24 ساعت مك‌كانگي آگار ‏E. Coli كلبسيالپنومونيه 24ساعت محيط مالونات استافيلوكوك ارئوس استافيلوكوك اپيدرميديس اشريشياكلي 24ساعت مانيتول سالت آگار ‏E. Coli كلبسيال پنومونيه 48ساعت ‏MR VP ‏S. Aureus ‏S. Epidermidis 24ساعت ‏DNASE Agar ‏Streptococcus ‏spp ‏E. Coli 24 ساعت فنيل الكل بالدآگار ‏E. Coli ‏Acinetobacter 24ساعت نيترات براث يا آگار 24 سXXاعت محيط ofگلوكز بدون روغن سودوموناس محيط كنترل كيفي محيط‌هاي كشت معمول با باكتري مورد نظر و نتايج مورد انتظار ارگانيسم‌هاي كنترلي زمان محيط نتيجه قابل انتظار مثبت – قرمز منفي – بدون رنگ ‏E. Coli كلبسيال 24ساعت )Indol (SIM منفي مثبت سبز بعد از اضافه كردن كلرور فريك %10 ‏E. Coli پروتئوس 24ساعت فنيل آالنين دآميناز منفي كلني‌هاي بي‌رنگ با مركز سياه ‏E. Coli سالمونال 24ساعت سالمونال -شيگال آگار كلني سبز به مركز سياه كلني سبز شفاف رشد محدود شونده با كلني نارنجي سالمونال شيگال ‏E. Coli 24ساعت كلني در مركز سياه در اطراف كلني هال ‌ة قرمز كلني بي رنگ شفاف (قرمز) كلني زرد سالمونال شيگال ‏E. Coli 24ساعت منفي زرد مثبت صورتي صورتي در سطح ‏E. Coli پروتئوس كلبسيال 24ساعت كريستنسنس اوره آگار توليد رنگ زرد بدون تغيير رنگ نايسريا گونوره موراكسال كاتاراليس 24تا 48 ساعت ‏CTA ‏Cystine ‏tripticase agar- هكتون انتريك آگار ()HE ‏XLD كنترل كيفي محيط‌هاي كشت معمول با باكتري مورد نظر و نتايج مورد انتظار نتيجه قابل Xانتظار ارگانيسم‌هاي كنترلي زمان سطح و عمق بنفش (مثبت) سطح بنفش – عمق زرد (منفي) ( SH2مثبت) سطح و عمق بنفش ‌SH2+ سطح قرمز – عمق زرد ‏E. Coli شيگال سالمونال پروتئوس سXXاعت24 اليزين آيرون آگار ‏LIA بعد از كشت مجدد رشد مي‌كند بعد از كشت مجدد رشد نمي‌كند سالمونال ‏E. Coli سXXاعت24 ) (SFسلنيت براث رشد منفي رشد مثبت – رنگ آبي ‏E. Coli كلبسيال سXXاعت48 سيمونز سيترات ‏Vibrio cholerae سXXاعت24 آXگار T.C.B.S كلني‌هاي زرد رنگ محيط رشد منفي رشد مثبت ‏E. Coli ‏Salmonella تتراتيونات براث رشد مثبت رشد مثبت رشد منفي رشد منفي نايسريا مننژيتيديس نايسرياگنوره آ ‏E. Coli كانديدا آلبيكانس سXXاعت24 ) (CO2بXXا تاير مارتين آگار رشد مثبت باكتروئيدس فراجيليس سXXاعت24 تايوگليكوالت براث ‏E. Coli ‏K. Pneumoniae ‏S. Flexneri سXXاعت24 رشد خوب با جالي فلزي رشد خوب كلني بنفش رشد خوب كلني شفاف ‏E.M.B علتهای خطا در الم گرم .1کهنه بودن لوگل .2داغ بودن لوپ .3کشت کهنه .4اثر آنتی بیوتیک .5ضخیم بودن الم .6افزایش زمان فیکساسیون و نقش الکل در منافذ پپتیدوگلیکان .7کافی نبودن زمان رنگ بر كنترل كيفي رنگ‌ها و معرف‌ها زمان كنترل معرف يا رنگ مثبت منفي محيط هر ويال جديد ديسك باسيتراسين استرپتوكوك پيوژن انتروكوك فكاليس ‏BA هر بار استفاده كاتاالز ‏XبXكXسيXژنXه (3 )%آ ا استافيلوكوك ارئوس انتروكك ‏Typtic soy )Agar (T.S.A استافيلوكوك ارئوس استافيلوكوك اپيدرميديس ‏T.S.A كلبسيال پنومونيه ‏T.S.A در الم به صورت مخلوط ديده مي‌شود هر بار استفاده كوآگوالز (پالسما) هر بار استفاده بتاگلوكورو نيداز اشريشياكلي هر هفته و هنگام ساخت رنگ‌آميزي گرم استافيلوكك اشريشياكلي هر ويال جديد ‏ONPG ‏E. Coli سالمونال ‏T.S.I هر ويال جديد ديسك اپتوچين استرپتوكك پنومونيه استرپتوكك ويريدنس ‏B.A هر ويال جديد اكسيداز ‏Pseudomona ‏s ‏E. coli ‏T.S.A ‏XيسكXXا نXXوار( هموفيلوس پارا آنفلوانزا ي )د فاكتور V هموفيلوس آنفلوانزا ‏T.S.A هر ويال جديد كنترل كيفي رنگ‌ها و معرف‌ها زمان كنترل هر ويال جديد معرف يا رنگ ‏XيسكXXا نXXوار( ي )د فاكتور XV مثبت منفي محيط ‏T.S.A هموفيلوس آنفلوانزا هر بار استفاده رنگ آميزي ‏Ziehl-neelsen مايكوباكتريوم توبركلوزيس باكتريهاي مخلوط با انواع غير اسيدفاست گسترش تهيه شده از خلط هر ويال جديد – ماهيانه و هر 6ماه آنتي سرم باكتري مورد نظر باكتري مورد نظر ‏TSA ‏BA هر بار استفاده ‏CAMP ‏Group B ‏streptoccus ‏Enteroccus ‏BA ‏E. Coli ‏Klebsiella ‏SIM ‏Klebsiella ‏E. Coli ‏MR ‏VP ‏Acinetobect ‏er نيترات آگار و يا برات هر بار استفاده كوواكس هر بار استفاده ‏MR ‏VP ‏E. Coli ‏Klebsiella هر بار استفاده نتيرات ‏E. Coli نحوة نگهداري باكتري‌ها الف – طوالني مدت انتيگ راد – 1 استفاده از گ ليسرولدر -20درجه س ‌ از كش/ت خال/ص باكتري س/وسپانسيوني در گليس/رول اس/تريل تهي/ه شده و ب/ه ميزان 1-2ميلي‌ليتر در لوله‌هاي كوچ/ك در پيچ‌دار تقس/يم مي‌شود و در -20درج/ه سانتي‌گراد نگه‌داري مي‌گردد .تجديد كشت بعد از 12-18ماه صورت مي‌گيرد. – 2استفاده از روغن معدني و نگهداري در دماي آزمايشگاه محي/ط تريپتي/ك س/وي‌آگار ( )TSAب/ه ص/ورت س/طح شيب‌دار ك/م در لول/ه تقسيم مي‌شود. در مورد باكتري‌هاي س/خت رش/د ،خون و ي/ا خون حرارت داده شده اضاف/ه مي‌شود .پس از كش/ت بر روي س/طح محي/ط و رش/د باكتري ،روغ/ن معدن/ي و ي/ا پارافي/ن ك/ه در 170درجه س/انتي‌گراد ب/ه مدت ي/ك س/اعت اس/تريل شده ب/ه ارتفاع ي/ك س/انتي‌متر ب/ه س/طح محي/ط اضافه مي‌شود .تجدي/د كش/ت بع/د از 6-12ماه انجام مي‌گيرد( .كشت در دماي آزمايشگاه نگهداري مي‌شود). – 3كشت عمقي و نگه‌داري در دماي آزمايشگاه جهت استافيلوكك‌ و انتروباكترياسه نوع محيط TSA  – 4كشت عمقي در محيط CTA نگهداري نايسريا و استروپتوكك محيط به صورت عمقي در لوله در پيچ دار نگهداري نايسريا در 35درجه سانتي‌گراد تجديد كشت هر دو هفته يك بار استرپتوكك در دماي اتاق هر ماه تجديد كشت شود محيطCooked meat broth / براي بي‌هوازي‌ها نگهداري در دماي آزمايشگاه تجديد كشت هر دو ماه يك بار ب – روش نگهداري كوتاه مدت - 1كاربرد جهت باكتريهاي روتين آزمايشگاه (باكتري‌هاي سريع‌الرشد) نوع محيط TSA /با سطح شيبدار نگهداري در يخچال تجديد كشت هر دو هفته يك بار  – 2استرپتكوكك‌ها نوع محيط بالدآگار در لوله با سطح شيب‌دار پس از رشد باكتري نگهداري در يخچال تجديد كشت هر دو هفته يك بار – 3نايسريا مينجاتيديس و هموفيلوس نوع محيط شكالت آگار تجديد كشت كمتر از يك هفته نگهداري در دماي آزمايشگاه – 4نايسريا گونوره نوع محيط شكالت آگار نگهداري در دماي 35درجه سانتي‌گراد زمان تجديد كشت هر دو روز يك بار Rapid Catalase Test for Enterobacteriaceae Touch the center of well-isolated-1 young colony (18-24 hrs.) on SBA or MacConkey with a wooden stick to .transfer to a clean ,dry glass slide Dose not test from Muller-Hinton Agar (MHA)  Place 1 drop of 3% H2O2 and observe immediately bubbles   Citrate Utilization Test Simmons Streak slant back & forth with light inoculum picked from the center of a wellisolated colony Place cap loosely on tube , aerobic environment Incubation at 35°C to 37°C for up to 4-7 days Positive : growth + blue Negative : No growth + green      Citrate Utilization Test Simmons Streak slant back & forth with light inoculum picked from the center of a wellisolated colony Place cap loosely on tube , aerobic environment Incubation at 35°C to 37°C for up to 4-7 days Positive : growth + blue Negative : No growth + green      Citrate Utilization Test Simmons Agar Slant  Bromthymol blue  pH 6.8 green (negative) to blue pH – > 7.6 (positive) Inspect agar for evidance of  freezing ,cracks , dehydration , bubbles ,before use and discard any tube that Blue Citrate Utilization Test Simmons Do not inoculate from broth cultures , due to carryover of media  To avoid false-positive reactions , use a light inoculum to prevent carry over of substance from previous media  Luxuriant growth without color change may indicated a positive test. if agar dose not turn blue on further incubation ,test should be repeated with less inoculum  روش کار : باکتری را در روی سطح شیب دار محیط کشت دهید ودرDب لوله را محکم نبندید. لوله را در 35درجه سانتی گراد بمدت 24 ساعت تا 4روز انکوبه کنید. سیترات مثبت سیترات منفی Spot Indol Test Colonies from SBA & rub on filter paper Tryptophanase breaks down tryptophan to realease indole 1% paradimethylaminocinnamaldehyde  Blue color within 30 sec    IMViC MR VP Incubate for minimum 48 hrs  If results are equivocal at 48 hrs  repeat test for 4 to 5 days MR : 5 to 6 drop of MR reagent  per 5 ml broth VP : 6 drop alpha naphtol & 2  drop KOH روش کار الف) در 5میلی لیتر محیط MR-VPکشت دهید وبمدت 48ساعت در 35درجه سانتی گراد انکوبه کنید. ب) 5/2میلی لیتر آن رDا به لوله بارDیک منتقل کنید. ج) 5قطره از معرف متیل رد را به آن اضافه کنید . واکنش مثبت با رنگ قرمز واکنش منفی با رنگ زرد مایل به نارنجی Lysine Iron Agar (LIA) Presumptive report: Gram-Positive Cocci resembling Staphylococci Serotyping / Serogrouping Typing Should be performed from a  non-sugar containing medium ,such as 5% sheep blood agar (BAP) or LIA Use of sugar containing media ,  such as MacConkey or TSI agars , can cause the organism to autoagglutinate  روش کار: با استفاده از یک آنس از مرکز یک کلنی ایزوله برداشت کنید. نوک آنس را درداخل قسمت پائین لوله وارد کنید و بعد در سطح شیب دار کشت دهید. درب لوله را محکم نبندید. در 35درجه بمدت 18تا 24ساعت انکوبه کنید. نکات قابل توجه در مورد ساخت محیط محیط XLDباید قرمز روشن باشد .اگر Dمحیط موقع ساختن زیاد حرارت ببیند ،سبب رسوب سدیم دزاکسی کوالت می گردد که باعث می شود کلنی ها کوچکتر، تیره تر ظاهر شوند.