دانلود پاور پوینت بررسی اندازه بار میکروبی و هیستامین تولید شده توسط هیستیدین دکربوکسیلار در کنسرو ماهی دریایی

بررسی اندازه بار میکروبی و هیستامین تولید شده توسط هیستیدین دکربوکسیالر در کنسرو ماهی دریایی چکیده ماهیان منابع غنی از پروتئین با کیفیت باال ،ویتامین‌های ضروری و اسیدهای چرب غیر اشباع مفید هستند ،اما وجود مقادیر زیاد پروتئین می‌تواند به عنوان یک خطر در فرآیندهای فساد ماهی نیز محسوب شود .تجزیه پروتئین‌ها به پپتیدها و اسیدهای آمینه که به فساد حساس‌اند ،منجر به تشکیل آمین‌های بیوژنیک می‌گردند که می‌توانند به مقدار زیاد در غذاهای پروتئینی گسترش یابن د .آمین‌ه ای بیوژنی ک ترکیب اتی آلی ب ا وزن مولک ولی کم و ب ا س اختارهای آلیفاتی ک (پوترس ین ،ک اداورین ،اس پرمین ،اس پرمیدین) ،آروماتی ک (ت یرامین، فنی ل اتی ل آمین) ی ا هتروس ایکلیک (هیس تامین ،تریپت امین) هس تند ک ه ممکن است در بسیاری از مواد غذایی یافت شوند .تعداد 40نمونه ماهی کنسروی ب ا روش نمون ه ب رداری تص ادفی خوش ه ای م ورد نمون ه ب رداری ق رار گرفتند5.گرم از گوشت ماهی هر کنسرو جهت انجام آزمون های میکروبی و همچنین تعیین میزان هیستامین موجود ،تحت شرایط استریل نمونه برداری و مقدمه هیس تامین از طری ق دکربوکسیالس یون باکتری ایی مق دار زی اد هیس تیدین موج ود در ماهیچ ه ه ای این گ روه از ماهی ان تولی د می شود..مهم ترین باکتری مرتبط بااین بیماری ،گونه های مورگانال ،به ویژه مورگانال مورگانی می باشد .که به نظر می رسد تمام نژادهای آن به میزان بیش از ppm5000هیستامین تولی د می کنن د .ه دف از انج ام این پ ژوهش تع یین ان دازه ب ار میک روبی و هیس تامین تولی د ش ده توس ط هیس تیدین دکربوکسیالز در کنسرو ماهی است. یکی از روش‌ه ای نگه داری م واد غ ذایی اس تفاده از ح رارت در ظروف سر بسته است .این امر سبب بهبود کیفیت خوراکی مواد غذایی و توقف فعالیت شیمیایی ،آنزیمی و باکتریایی می‌شود.کلمه کنس رو س ازی از لغت یون انی Conserverب ه مع نی حف ظ ک ردن، مش تق ش ده اس ت .ه دف از کنس رو نم ودن م اهی تهی ه محص ولی اس ت ک ه بت وان آن را م دت ط والنی حف ظ نم ود و در طی م دت نگه داری با اطمینان خ اطر از س الم بودن محص ول آن را مصرف کرد. مسمومیت غذاهای دریایی در اثر مصرف ماهی یا سخت پوستان آسیب دیده از سموم دریا اتفاق می‌افتد .این امر در آمریکا عامل اصل بیماری های ناشی از مواد غذایی است .نشانه‌های معمول این مش هورترین س موم موج ود در م اهی و سخت‌پوس تان دریایی چندین نوع اصلی مسمومیت در ماهی و سخت‌پوستان دریایی وجود دارد مشهوترین سموم عبارت‌اند : روش‌های تشخیصی هیستامین روش‌های آزمایشگاهی مختلفی جهت تعیین میزان هیستامین ی‌شود .از جمله روش‌هاي طیف‌سنجی که در ماهی استفاده م ‌ ش امل کروم اتوگرافی الی ه ن ازك ،TLCکروم اتوگرافی م ایع، کروم اتوگرافی م ایع ب ا ق درت ب اال ،HPLCکروم اتوگرافی گ ازي ،GCکروم اتوگرافی تع ویض ی ونی IECو ...اس ت. روش‌هاي دیگر شامل اندازه‌گیري بر اساس حسگر اکسیژنی (برهمکنش بین هیستامین خالص و ترکیبات مس) ،روش‌هاي آنزیمی (دي آمین اکسیداز Real Time PCR ،)DAOبراي ژن هیس تامین دکربوکس یالز ،فلوروس کپی ،الک تروفورز و روش االیزا بر اساس آنتی بادي منوکلونال که روش سریع و ارزان  ELISAمخفف عبارت Enzyme-Linked Immunosorbent Assayیك روش آزمايشگاهي بيوشيميايي ساده با حساسيت بسيار باال است كه امكان آناليز تعداد زيادي نمونه را به صورت همزمان فراهم مي‌كند .تکنیک االیزا بر اساس تقابل آنتی ژن- آنتی بادی به علت حساسیت باال ،سرعت زیاد و بررسی حجم باالی نمونه ها روشی کار آمد برای سنجش توکسین‌ها محسوب می‌شود .نتایج حاصل از االیزا توسط دستگاهی به نام االيـزا ريـدر خوان ده می ش ود .االي زا ري در داراي فيلتره ای انكس اري ب وده ك ه گس تره ط ول م وج ه ا را مح دود ك رده و معم وًال بين 400تا 750نانومتر عمل مي‌كنند). مروری بر تحقیقات گذشته داخلی در بررسی مهتدی‌نیا و همکارانش در سال 60 ،1393نمونه کنسروماهی تن عرض ه ش ده در س وپرمارکت‌های ش هر ت بریز ب ه روش االی زا ارزی ابی شدند .نتایج نشان داد میزان هیستامین نمونه‌ها بین 5-3/200میلی‌گرم بر کیلوگرم متغیر بود .سطوح هیستامین در ٪ 30از کنسروها ،پایین تر و در ٪ 70از آنها باالتر از حد مجاز ( 50میلی‌گرم بر کیلوگرم) ایران بود. مسعود علیرضایی و همکارانش 96نمونه تن ماهی از کارخانجات مختلف را با استفاده از تکنیک االیزا مورد سنجش قرار دادند .میزان هیستامین در نمونه‌ها 26/14 -15/144میلی‌گرم بر کیلوگرم بود و از این میزان 5/11 درصد نمونه‌ها حاوی هیستامین باالتر از 100میلی‌گرم بر کیلوگرم بودند . طی بررسی ابراهیمی و همکارانش 30نمونه کنسرو ماهی تن با نام‌های تجاری متفاوت نمونه‌برداری و توسط تکنیک االیزا آنالیز گردید .که تنها میزان آلودگی هیستامین در 5درصد ازنمونه‌ها بیشتر از حد مجاز بود مروری بر تحقیقات گذشته خارجی در بررسی Karmiدر سال ،2014از 90نمونه ماهی (ماکرل ،تن و ساردین) جم ع آوری ش ده در مص ر 80 ،7/46 ،و 3/73درص د ب ه ت رتیب آل وده ب ه هیستامین بودند (.)Karmi et al.. 2014 در مطالعه ای که توسط Rogersو همکاران درسال 1996در ایاالت متحده آمریکا صورت گرفت تعداد 14نمونه ماهی با استفاده از روش فلومتریک مورد بررسی قرار گرفتند .نتایج مطالعه نشان داد که میزان هیستامین بین 6/0 -154میلی گرم در کیلوگرم می‌باشد (.)Rogers et al.1997 مطالعه Laurentو همکاران بر روی انواع ماهیان در کشور سنگال نشان داد که میزان هیس تامین در نمونه‌ه ای ماهی ت ازه کم تر از کنس رو آنه ا ب وده (3 میلی گرم در 100گرم) که کمی پایین‌تر از حد مجاز پذیرفته شده در کشور سنگال( 20میلی گرم در 100گرم) بود .)et al.1995 (Laurent . مواد و وسایل مورد نیاز تعیین بار میکروبی نمونه های کنسروی با هم اهنگی موسس ه تحقیق ات ش یالت ،از ش رکت ه ای کنس رو سازی فعال موحود در استان گیالن جهت نمونه برداری انتخاب ش دند.تعداد 40نمون ه م اهی کنس روی ب ا روش نمون ه ب رداری تص ادفی خوش ه ای م ورد نمون ه ب رداری ق رار گرفتن د5.گرم از گوش ت م اهی ه ر کنس رو جهت انج ام آزم ون ه ای میک روبی و همچ نین تع یین م یزان هیس تامین موج ود ،تحت ش رایط اس تریل نمونه برداری و به آزمایشگاه انتقال داده شدند ابتدا نمونه به وسیله دستگاه استو ماکر خرد شدند.بدین ترتیب که 40نمونه در داخل میکروتیوب ها نگهداری شدند و تا زمان انجام آزمایش در یخچ ال و ی ا فری زر نگه داری ش دند.از نمونه ه ای جم ع آوری روش تعیین رقت بدین ترتیب بود که شش لوله استریل انتخاب شد و به تمامی لوله ها 9میلی لیتر ماده رقیق کننده استریل ( بافر PBS ) اضافه شد و داخل لوله اول 1گرم نمونه گوشت ماهی کنسرو شده اضافه شد و به وسیله دستگاه همزن به خوبی مخلوط گردید و بنابراین رقت لوله اول 10-1شد و سپس 1میلی لیتر از محتویات لوله اول به لوله دوم اضافه شد و بنابراین رقت لوله دوم 10-2و به همین ترتیب تا رقت 10-6به دست آمد.رقت های مورد نیاز جهت آزمایشات 10-3و10-6بودند .جهت شمارش کلی باکتری ها از محیط کش ت Plate Count Agarو ش مارش و شناس ایی کلی ف رم ه ا و اشرش یا کلی از محی ط کش ت ه ای Mac Conkey Agarو EMB استفاده گردید .جهت شمارش کلی باکتری ها برای هریک از رقت های 10-3و 10- 6از سه محیط کشت Plate Count Agarاستفاده روش انجام آزمایش بدین ترتیب بود که ا میلی لیتر از هر یک از دو رقت فوق به داخل پلیت استریل ریخته شد و سپس مقداری از محیط کشت Plate Count Agarبه آن اضافه شد و بنابراین از روش پ ور پلیت استفاده شد (برای هر رقت از هر نمونه از سه محیط کشت استفاده شد و بنا براین برای هر نمونه از شش محیط کشت استفاده شد).یکی از محیط های کشت به جهت ش مارش ب اکتری ه ای س رما دوس ت در دم ای 15درج ه سلس یوس ب ه م دت 24ت ا 48س اعت و یکی از آنه ا ب ه جهت شمارش مزوفیل ها در دمای 35درجه سلسیوس به مدت 24تا 48س اعت و محی ط کش ت س وم ب ه جهت آش کار س ازی و ش مارش ب اکتری ه ای ترموفی ل در دم ای ب االی 55درج ه برای شمارش و شناسایی کلی فرم ها و اشرشیا کلی هریک از رقتها در دومحیط ( Mac Conkey Agarچهار محیط) کشت داده شدند که یکی از این محیط ها در دمای 35درجه سلسیوس و یکی از انها در دمای باال تر از 50درجه سلسیوس کشت داده شدند و هر یک از آنها به مدت 24تا 48 ساعت انکوبه شدند .همچنین برای شمارش و شناسایی کلی فرم ها و اشرشیا کلی هر یک از رقتها در دومحیط (EMBچهار محیط) کشت داده شدند که یکی از این محیط ها در دمای 35درجه سلسیوس و یکی از انها در دمای باال تر از 50درجه سلسیوس کشت داده شدند و هر یک از آنها به مدت 24تا 48ساعت انکوبه شدند.سپس به بررسی نتایج پرداخته شد و عمل شمارش باکتری ها صورت گرفت ،بدین ترتیب که تعداد کلنی ها در هر پلیت شمارش شد و در عکس رقت و میزان رقت مورد استفاده ضرب شد و تعداد باکتری ها در هر رقت به دست آمد. ان دازه گ یری هیس تامین موج ود در نمون ه ه ای کنس رو ماهی برا ی این آزمایش از آزمون ریدااسکرین هیستامین (آزمایش شماره R1601،96محفظه مواد /آزمایش شماره 1604،48محفظه مواد ) استفاده شد که یک روش ایمونواسی آنزیمی رقابتی است که برای تحلیل کمی هیستامین موجود در غذاها مورد استفاده قرار می گیرد. مق دار هیس تامین تولی د ش ده بس تگی ب ه گون ه ه ای باکتری ایی ،دم ا و زمان قرار گرفتن در معرض باکتری داشته و می توانند تا ppm 1000 افزایش یابد .)mg/kg(.ماهی شامل مقادیر ماهیهایی با کیفیت خوب دارای مق دار هیس تامین کم تر از ppm 10می باش ند .مق دار مج از هیس تامین در ماهیه ا و غ ذاهای مرتب ط mg/kg100و در بعض ی از اصول تست بعد از تهیه نمونه ،میزان هیستامین آن از لحاظ کمی با استفاده از معرف اسیالسیون در Nاسیالسیون به دست می آید .در ELISAرقابتی ،هیستامین اسیالسیون آزاد و هیستامین های پیوندی از لحاظ جایگاه اتصال به آنتی بادی مورد مقایسه قرار می گیرند. بعد از شستشو ،آنتی بادی های ثانویه که بر حسب پیروکسیداز(ترکیب شده با آنزیم ) که نشان گذاری شده اند افزوده می شوند .این آنتی بادی ها به ترکیبات آنتی بادی هیستامین متصل می شوند .هر آنتی بادی ترکیبی فاقد آنزیمهای متصل در مرحله شستشو پاکسازی می شوند .سوستبره آنزیم و کروماژون به مواد روی سطح مایع اضافه و آنکوبات می شوند.ترکیبات آنزیم متصل ،کروماتوژن را به صورت یک ماده آبی رنگ در می آورد .در مازاد محلول راکد تغییر آبی به زرد مشاهده می شود .اندازه گیری به صورت فتوم تری در nm450ص ورت می گ یرد .م یزان ج ذب ب ا م یزان هیس تامین معرفهای مورداستفاده هر کیت ش امل م واد ک افی ب رای ان دازه گ یری 96م اده (( )R601ش امل تحلی ل اس تاندارد) می باش د ه ر کیت آزمایشگاهی شامل: معرف هایی برای اسیالسیون نمونه می باشد. صفحه اسیالس یون :ص فحه اسیالس یون ب دون پوش ش ب ا 96 محفظه برای اسالسیون لوله های اسیالسیون R601× 96با × )R601( 48لوله های پالستیکی اسیالسیون برای انجام عمل اسیالسیون استاندارد ×6 1-6استاندارد هیستامین ( هر کدام )ML4 ‏Ppb oppb 5/0 ، ppb 5/1 ، ppb 5 ، ppb15 ، ppb50 کنترل :1کنترل )ML4( 1غلظت قابل مشاهده در ویال کنترل :2کنترل )ML4( ،2غلظت قابل مشاهده در ویال مع رف اسیالس یون × )R601( 2ب ا )R1004( ×1مع رف اسیالسیون ml 1،5آماده برای استفاده با فراسیالسیون :با فراسیالسیون ml2 2آماده برای استفاده معرف های ایمونوواسی آنزیم صفحه میکروتی تر :ص فحه میکروتی تر ب ا 96ی ا 48محفظ ه مواد( 12نوار R601 ،و یا 6نوار R604با 8محفظه پوشش دار با هیستامین ترکیب R601، ml12 :ی ا ،ml 6، R601پیروکس ید از ت رکیب شده با آنتی ب ادی آماده استفاده آنتی بادی ضد هیستامین : R601، ml12یا ،ml 6، R601آماده برای استفاده کروم اژن سوبس تر :کروم اژن سوبس تر R16004,6MLو ی ا R1601,12MLشامل تترامتیل بنزیدین آماده استفاده محل ول راک د :محل ول راک د ML12ش امل N 5/0س ولفوریک اسید آماده استفاده بافر شستشو :بافر شستشو با تراکم × 50 مواد مورد نیاز که ارائه نشده است. تجهیزات اسپکتروفتومتر مسطح میکرو تیتر nm 450 مفس ر.گریندر( آس یاب) ،موت ار( ه اون) و ی ا هموژنس اتورآزمایشگاهی سانتریفوژ و ویالهای پالستیکی سانتریفوژ شیکر مانند میکسر گردبادی ( ورتکس) متغیر ml 20 - ml 200و ml 200-100اندازه های میکرو پیپت برای کاهش زمان آنکوباسیون :از شیکر مسطح میکرو تیتر( ( )MTPکه لرزشی به بزرگی mm 3تقریبا rpm 600ایجاد می کند استفاده شده است. 2،5مصرف ها دستورالعمل های ذخیره سازی کیت را در دم ای 2-8درج ه س انتی گ راد ( 35 -45درج ه فارنهایت ) نگهداری کنید هیچ نوع کیت آزمایشگاهی حاوی معرف را فریز نکنید. هر میکروول استفاده نشده را به کیف فویل اصلی برگردانید ، آنها را با یکدیگر در جای خشک نگهداری کرد ،و در دمای 2-8 درجه سانتی گراد ذخیره سازی نمایید 35-46(.درجه فارنهایت) محلول سوبستره کروماتوژن به نور حساس بوده بنابراین از قراردادن آن ها درمعرض نور اجتناب نمایید. آماده سازی نمونه لوله های اسیالسیون و یا محازن واکنش دهنده صفحات اسیالسیون برای جلووگیری از آلودگی یکبار مصرف می باشند. برای آماده سازی نمونه تنها از ویال های پالستیکی استفاده شود. ماهی(کنسرو) هموژنیزه کردن 10گرم از نمونهاضافه کردن 9میلی لیتر آب مقطر به 1گرم از ماده هموژنه و به خوبیترکیب سانتریفوژ 5 :دقیقه 2500/گرم در دمای اتاق ( 20-25درجه سانتی گراد / 68درجه فارنهایت) ترکیب 1میلی لیتر از مواد روی آب با 9میلی لیتر آب مقطراس تفاده از 100میکرولی تر در ه ر لول ه اسیالس یون و ی ا در ه ر محفظ ه درصفحه اسیالسیون انجام آزمایش آماده سازی تست رساندن دمای همه معرفها به درجه حرارت اتاق( 20-25درجه سانتی گراد 68-77 /درجه فارنهایت) قبل از استفاده بافر شستشو داده شده به غلظت 50فولد ارائه می شود .بافر غلیظ شده به دمای 20-25درجه سانتی گراد ( 35-40درجه فارنهایت به مدت 50/1دقیقه به نسب ( )1+49قبل استفاده ، با آب مقطر رقیق می شود( مثال 10میلی لیتر بافر غلیظ شده 490 +میلی لیتر آب مقطر) .بافر رقیق شده در دمای 2-8 درجه سانتی گراد ( 35-40درجه فارنهایت ) به مدت تقریبی 4 معرف اسیالسیون آماده استفاده می شود .دارای نقطه انجماد 5/18درجه سانتی گراد ( 65درجه فارنهایت است) .در زمان استفاده باید مطمئن بود که معرف اسیالسیون می تواند به دمای اتاق 20-25درجه سانتی گراد(68-77 درجه فارنهایت) نگهداری شده و یا قبل از استفاده به دمای اتاق برسد. 5-100میکرولیتر در محلول ترکیبی را به هر محفظه اضافه می نماییم .با تکان دستی به آرامی تکان داده و به مدت 20دقیقه در دمای اتاق 20-25 درجه سانتی گراد 68-77 /درجه فارنهایت همزمان 10دقیقه با شیکر MTP ) (rpm600تکان می دهیم. -6مایع را از محفظه ها خارج کرده و از باال به پایین به گیره میکروول ها با شدت (سه بار در هر ردیف) برروی کاغذ خشک کن ( جاذب) ضربه می زنیم تا از پاکسازی کامل محفظه ها از مایع مطمئن شویم و تمام محفظه ها با 250میلی لیتر بافر شستشو پر کرده ( به 9 ،1مراجعه شود) و دوباره مایع را خارج کرده و این عمل را دوبار تکرار می نماییم.  7-100میکرولی تر از م ایع سوبس تره /کروم اتوژن را ب ه ه ر محفظه اضافه نموده و با تکان دادن آرام دستی ترکیب کرده و به مدت 15دقیقه د ردمای اتاق تاریک نگهداری می کنیم. 25-20درجه سانتی گراد 68 -77 /درجه فارنهایت).همزمان به مدت 15دقیقه با شیکر MTPتکان می دهیم(.تقریبا rpm .)600 8-100میکرولیتر از محلول راکد را به هر محفظه اضافه کرده به آرامی با تکان دادن دستی روی صفحه ترکیب کرده و میزان جذب را در nm450د رمعرض هوا اندازه گیری می نماییم و مقدار اندازه گیری شده را 10دقیقه بعد از افزودن مایع راکد نتایج یک ن رم اف زار وی ژه بن ام ( RIDA SOFT WINآزم ایش ش ماره Z9999برای اندازه گیری آنزیم ایمونواسی ایداسکرین موجود است. تراکم هیستامین بر حسب میکروگرم /کیلوگرم ( )ppbمربوط ب ه ج ذب ه ر نمون ه از رئی منح نی کالیبراس یون قاب ل خوان دن بوده و مابقی ضربدر رقیق سازی مربوطه می شود. مراحل تست ELISA تعداد مناسبی از محفظه ها به میکروول هولدر وارد شدند تاتمامی مراحل تست انجام شدند .استانداردها و وضعیت های نمونه ثبت شدند.  100میکرولیتر از محلول آنتی بادی ضد هیستامین به هر محفظهاضافه شد .به آرامی به صورت دستی تکان داده شده و ترکیب به مدت 40دقیقه در دمای اتاق نگهداری شد. مایع را خارج از محفظه ها ریخته و گیره میکروولها را گرفته و ازباال به پایین به شدت ( سه بار در هر ردیف) روی کاغذ جاذب ضربه زده شد تا از پاکسازی کامل محفظه ها از روی محفظه ها مطمئن حاصل شد .همه محفظه ها با 250میکرولیتر بافر شستشو پر شدند و دوباره مایع خارج شد .دوبار دیگر کار تکرار شد. -نمونه های رقیق شده اضافی با میزان جذب کمتر از 4/0و تحلیلمجدد تحلیل مجرد هر نمونه-کنترل ها با باالترین میزان انحراف 30 0/0اندازه گیری شد. می انگین تع داد کل نی ب اکتری ه ای ) )Total Count جداش ده از های ماهی کنسروی نمونه در محیط کشت Plate Count ‏Agar هم انطوری ک ه در روش ک ار بی ان ش د جهت ش مارش ک ل ب اکتری ه ای موج ود در م اهی کنس روی از محی ط کش ت Plate Count Agarجهت شمارش باکتری های سرما دوست ،مزوفیل و گرما دوست استفاده شد و نتایج حاصل نشان داد که (جدول )1-4میانگین تعداد کل باکتری های سرما دوست بعد از 24ساعت انکوباسیون در رقت های 10 -6 ،10 -3به ترتیب 52/14و 0بوده و بع د از 48س اعت انکوباس یون در رقت ه ای فوق ب ه ترتیب 57/14، 1/29بود .همچنین میانگین تعداد کلنی های باکتری های مزوفیل بع د از انکوباسیون 48 ،24س اعته در رقت های 10-6 ،10-3به ت رتیب 07/26 ، 75/8، 5/22و 77/28ب وده و می انگین تع داد کل نی ه ای میزان و می انگین مق دار هیس تامین ( )PPBموج ود در نمونه های کنسروی میانگین مقدار هیستامین اندازه گیری شده با روش الیزا در40 نمون ه م اهی کنس روی ب ه م یزان )PPB( 887/4ب ود .همچ نین تعداد کلنی های باکتری های کل شمارش شده و همچنین تعداد کل نی ه ای اشرش یا کلی و کلی ف رم ه ا و همچ نین مق دار هیستامین اندازه گیری شده در نمودارهای 1-4تا 10-4نشان داده شده است .به طوری که در نمودار 1-4میانگین هر یک از موارد فوق در سه نمونه و در 9-4 ، 8-4 ، 7-4 ، 6-4و 10-4 به ترتیب 5نمونه 4 ،نمونه 4،نمونه 4 ،نمونه 3 ،نمونه نشان میانگین تعداد کلنی کلی فرم های جداشده از نمونه های ماهی کنسروی در محیط کشت Mac Conkey Agarدر رقت های 10-3و 10- 6 میزان و میانگین مقدار هیستامین( ) PPBو می انگین تعداد کلنی ک ل ب اکتری ه ا در ، Plate Count Agarکلی ف رم ه ا در محی ط Mac Conkey Agarو اشرشیا کلی در محیط EMBدر سه نمونه اول ماهی کنسروی 0 میزان و می انگین مق دار هیس تامین( ) PPBو می انگین تع داد کل نی ک ل ب اکتری ه ا در ، Plate Count Agarکلی ف رم ه ا در محی ط Mac Conkey Agarو اشرش یا کلی در محی ط EMBدر نمون ه ه ای چهارم تا دهم ماهی کنسروی میزان و میانگین مقدار هیستامین( ) PPBو می انگین تعداد کلنی ک ل ب اکتری ه ا در ، Plate Count Agarکلی ف رم ه ا در محی ط Mac Conkey Agarو اشرش یا کلی در محی ط EMBدر نمون ه های یازدهم تا چهاردهم ماهی کنسروی میزان و می انگین مق دار هیس تامین( ) PPBو می انگین تع داد کل نی ک ل باکتری ها در ، Plate Count Agarکلی فرم ها در محیط Mac Conkey Agarو اشرش یا کلی در محی ط هیجدهم ماهی کنسروی EMBدر نمون ه ه ای پ انزدهم ت ا میزان و می انگین مق دار هیس تامین( ) PPBو می انگین تع داد کل نی کل باکتری ها در ، Plate Count Agarکلی فرم ها در محیط Mac Conkey Agarو اشرش یا کلی در محی ط نوزدهم تا بیست و یکم ماهی کنسروی EMBدر نمون ه ه ای میزان و می انگین مق دار هیس تامین ( ) PPBو می انگین تع داد کل نی ک ل باکتری ها در ، Plate Count Agarکلی فرم ها در محیط Mac Conkey Agarو اشرش یا کلی در محی ط EMBدر نمون ه ه ای بیس ت و دوم ت ا بیست و ششم ماهی کنسروی میزان و می انگین مق دار هیس تامین( ) PPBو می انگین تع داد کل نی ک ل ب اکتری ه ا در ، Plate Count Agarکلی ف رم ه ا در محی ط Mac Conkey Agarو اشرشیا کلی در محیط EMBدر نمونه های بیست و هفتم تا سی ام ماهی کنسروی میزان و می انگین مق دار هیس تامین( ) PPBو می انگین تع داد کل نی ک ل باکتری ها در ، Plate Count Agarکلی فرم ها در محیط Mac Conkey Agarو اشرشیا کلی در محیط EMBدر نمونه های سی یکم تا سی و چهارم ماهی کنسروی میزان و می انگین مق دار هیس تامین( ) PPBو می انگین تع داد کل نی کل باکتری ها در ، Plate Count Agarکلی فرم ها در محیط Mac Conkey Agarو اشرش یا کلی در محی ط EMBدر نمون ه ه ای سی و پنجم تا سی وهشتم ماهی کنسروی میزان و می انگین مق دار هیس تامین( ) PPBو می انگین تع داد کل نی ک ل ب اکتری ه ا در ، Plate Count Agarکلی ف رم ه ا در محی ط Mac Conkey Agarو اشرشیا کلی در محیط EMBدر نمونه های سی و نهم تا چهلم ماهی کنسروی بحث مشاك و همکارانش در سال 1390شمارش کلی باکتري‌هاي مزوفیل و س ایکروفیل و م یزان هیس تامین را در 60م اهی ق زل آالي رنگین کم ان خریداري ش ده از مراکز فروش م اهی در تهران را با تکنیک االیزا مورد بررسی قرار دادند .نتایج نشان داد ميزان هيستامين در نمونه ها بين 4تا mg/100g 28با ميانگين mg/100g 18/14بود .از اين ميان 50/12درصد نمونه‌ه ا داراي م يزان هيس تامين ب االتر از ح د مج از بين المللي بودن د ( .)mg/100g20اما در مطالعه ما میانگین مقدار هیستامین در 40نمونه م اهی کنس روی ب ه م یزان )PPB( 887/4ب ود .ب ر اس اس نت ايج حاص ل از آزمون همبستگي دو طرفه پيرسون نیز مشاهده شد که رابطه مستقيمي بين ميزان هيستامين و تعداد باکتري ها در نمونه هاي ماهي برقرار است ()P<0.01 همچنین در مطالعه‌ای که در سال 2007در ایران توسط رضایی و همکاران در ارتباط با اث ر نگه داری و انبار کردن بر تولید هیستامین صورت گ رفت ،مش اهده گردید که مقادیر آمینهای بیوژنیک از جمله هیستامین در طول نگهداری 18روزه به میزان سه برابر افزایش می‌یابد (.)Rezaei et al. 2007 تولید هیستامین در pHهای پایین بهتر صورت می گیرد؛ اما در صورتی که محصوالت در دماهای باالتر از دمای یخچال نگه داری شوند ،تولید آن بیشتر می شود. این بیماری از طریق خوردن انواع ماهی های تازه یا فرآوری شده انتقال یافته و عالیم بیماری در عرض چند دقیقه تا سه ساعت و در بیشتر موارد در عرض 1ساعت پس از مص رف غ ذای مس موم ظ اهر می ش وند .معم وال نش انه ه ای آن ش امل براف روختگی ص ورت و گ ردن هم راه ب ا احس اس گرم ای زی اد ،ض عف عم ومی و اس هال و س پس خارش صورت و گردن می باشند.به دنبال برافروختگی صورت و گردن ،یک سر درد ضربانی و شدید بروز می کند که به یک درد کسل کننده ی مداوم تبدیل می شود. سایر نشانه های این بیماری شامل سرگیجه ،خارش ،ضعف ،سوزش دهان و گلو و عدم توان ایی در بلع می باشند( .)50حداقل مقدار هیستامین الزم جهت ب روز عالیم mg/dl100می باشد .حضور تعداد زیاد مورگانال مورگانی در ماهیان مذکور و مقدار گوشت ماهي منبع بسيار غني از تمام اسيدهای آمينه ی ضروری بدن نظير آرژنين ،والين ،ايزولوس ين ،لوس ين ،ل يزين ،ميت ونين ،فني ل آالنين ،ترئ ونين، تريپتوفان و هيستيدين مي‌باشد ( .) Gudarzi et al. 2016اما محصوالت دریایی ب ه مانن د س ایر غ ذاها ،هم واره در مع رض آل ودگی باکتری ایی ،اتولی تیکی و اکسیداسیون قرار دارند .ترکیبات شیمیایی مختلفی در حین مراحل صید ماهی، حم ل و نق ل و ش رایط نگه داری آن تش کیل می‌ش وند .از جمل ه این ترکیب ات می‌توان به آمین‌های بیوژنیک اشاره کرد که در نتیجه فعالیت باکتری‌ها بر روی پوس ت ،فلس و باله‌ه ای م اهی ایج اد می‌ش ود .هیس تامین ج زء مهمی از آمین‌ه ای بی وژن اس ت ک ه ب ه عن وان ان دیکاتور کیفیت غ ذا و فس اد آن بک ار می‌رود ( ..)2،3مطالع ات مختل ف نش ان داده اس ت ک ه ماهی ان خ انواده اس کومبریده و اسکومبروسوس یده عم دتًا در ش یوع م وارد مس مومیت‌های هیستامینی دخالت دارند ،به همین دلیل در برخی منابع این مسمومیت با عنوان مس مومیت "اس کومبرو توکس ین ی ا اس کمبروئیدی" ش ناخته ش ده اس ت. پیشنهادات تعداد بیشتری از نمونه های کنسروی از نظر میزان هیستامین و تعداد باکتری ها مورد سنجش قرار گیرند. میزان اندازه گیری هیستامین با سایر روش ها مثل HPLCنیز مورد سنجش قرار گیرد. ارتب اط می ان تولی د هیس تامین و وج ود ب اکتری ه ای موج ود در کنسرو های ماهی دقیقا مورد بررسی قرار گیرد. باکتری های تولید کننده هیستامین مورد شناسایی قرار گیرند. منابع افشار منش ،شیوا .بررسی میزان آمین‌های بیوژن (هیستامین .پوترسین و کاداورین) ماهی گیدر ( )Thunnus albacaresو رابطه آن با بار میکروبی حاص ل از دو روش (نگه داری ب ا یخ و ب ه ص ورت منجم د) .دانش گاه عل وم کشاورزی و منابع طبیعی گرگان .پایان نامه کارشناسی ارشد.1389 . جه انمردی ،عبدالرض ا .بررس ی م یزان هیس تامین ،پوترس ین ،ک اداورین در ماهیهای تن خام و کنسرو شده .انستیتو تغذیه دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی .پایان نامه کارشناسی ارشد.۱۳۷۳ . علیرضایی م ،فاطمه برزویی ،شقایق آرمان بروجنی .مروری بر مسمومیت با هیستامین و استفاده از کیت االیزا جهت آلودگی نمونه های تن ماهی به هیستامین .مجله تحقیقات آزمایشگاهی دامپزشکی .دوره ،4شماره ،1ویژه نامه شماره .1391 .1ص .176 مد شکرزاده م ،عبدالغفار عبادی ،حسین مکرمی و همکاران .بررسی میزان هیستامین ماهیان کنسرو شده تولیدی داخل کشور در سال . 1384نهمین Abbott, s. l., R, P. Kokka, and J. M. Janda. 1991. Laboratory investigations on the low pathogenic potential of Plesiomonas shigelloides. J. Clin. Microbial. 29: 148-153. Afilal MA., Daoudi H, Jdaini S, Asehraou A, Bouali A. Study of the Histamine Production in a Red Flesh Fish (Sardina pilchardus) and a White Flesh Fish(Dicentrarchus punctatus). Turkish Journal of Fisheries and Aquatic Sciences .2006; 6: 43-48. Annapurna, E. and S. C. Sanyal. 1977. Enterotoxicity of Aeromonas hydrophila. J. Med. Microbial. 10:317-323. Askary Sary, A. Rajabzadeh Ghotremi, E. Setayeh Far, E, Velayatzadeh, M. Comparison of histamine concentration in Katsuwonus pelamis muscles (White and dark) and canned from Hormozgan Province. Journal of Food Hygiene, Vol. 6, No 22, Summer 2016 Becker, K., Southwick, K., Reardon, J., Berg, R., MacCormac, J.N. "Histamine poisoning associated with eating tuna burgers".J Amer Med Assoc. 2001; 285:1327-30.