محیط های کشت در میکروب شناسی
اسلاید 1: روش تهیه محيط هاي كشت و کنترل کیفی آنهامهرداد احمدیازمایشگاه رفرانس همدان زمستان 92Mehdad.ahmadi@gmail.com
اسلاید 2: انواع محیط کشت از لحاظ قواممحیط کشت مایع ( براث ) :این محیط فاقد آگار و فقط در لوله آزمایش یا فلاسک استفاده میشود . مثل محیط نوترینت براث.محیط کشت جامد :این محیط حاوی ۵/۱ تا ۲ درصد ماده آگار است که بعد از سرد شدن منعقد می شود . محیط کشت جامد را درون لوله آزمایش یا پلیت استفاده می کنند.مثل محیط TSI و MAcدلیل بکارگیری محیط جامد ، تشخیص باکتریها به وسیله :تشکیل کلنی ؛ تولید پیگمانت ، خصوصیات خاص هر کلنی،تشخیص انواع باکتریها که چند نوع باکتری در نمونه میکروبی وجود دارد ، موکوئیدی بودن باکتری ، دیدن منطقه همولیز .محیط کشت نیمه جامد :این محیط در ترکیب خود مقدار کمی آگار دارد . بنابراین کاملا منعقد نمی شود و نیمه جامد باقی می ماند . مثل محیط SIM .
اسلاید 3: انواع محیط کشت از نظر نوع مواد تشکیل دهنده و کاربرد محیط کشت پایه Basic Media : این محیط کمترین مقدار مواد غذایی برای رشد باکتریها را دارد . و مبنای تهیه انواع و اقسام محیطهای کشت می باشد . اکثر انواع باکتریها در آن رشد می کنند زیرا فاقد ماده ضد میکرب است . مانند محیط نوترینت آگار ، نوترینت براث .محیط کشت غنی کننده Enrichment Media : محیط مقوی بوده که دارای مواد تغذیه ای زیادی نظیر ویتامین ها ، لیپید ها ، اسید های آمینه برای رشد باکتری است . بنابراین تعداد زیادی از باکتریها روی آن بخوبی رشد می کنند . مانند شکلات آگار، بلادآگار محیط کشت افتراقی Differential Media : محیط کشت تشخیصی بوده که کلنی باکتریهای مختلف روی آن کاملا از همدیگر متمایز می گردد. مانند محیط E.M.B ، این محیطها دارای املاح صفراوی ، قند و معرف شیمیایی هستند که باکتریهای لاکتوز مثبت برروی آنها کلنی های صورتی رنگ و باکتریهای لاکتوز منفی نظیر سالمونلا ، شیگلا بر روی این محیط ها کلنی های سفید رنگ تشکیل می دهند . از محیطهای افتراقی دیگر محیط TSI ، سیمون سیترات را میتوان نام برد . این محیط ها برای رشد باکتریهای گرم – منفی روده ای (انتروباکتریاسه) مناسب هستند . چون وجود املاح صفراوی در محیط مانع از رشد باکتریهای گرم مثبت در محیط می شوند.
اسلاید 4: محیط کشت اختصاصی Special Media : این محیطها برای رشد باکتریهای خاصی مناسبند . از این محیطها برای ایزوله نوع خاصی از باکتری در یک مخلوط میکربی استفاده می شود . مانند محیط s.s آگار که برای جدا کردن سالمونلا و شیگلا بکار میرود یا مانیتول سالت آگار که برای تشخیص گونه بیماریزای استافیلوکوکوس اورئوس استفاده می شود .محیط کشت انتخابی :Selective Media محیط هایی وجود دارند که دارای یک ماده مهار کننده رشد می باشند این مواد رشد تمام ارگانیسم ها بجز ارگانیسم مورد نظر را مهارمی کنند . درمرحله اول از رنگ هایی که دارای خواص ضد میکروبی هستند استفاده می شود ودر مرحله بعد استفاده از آنتی بیوتیک ها و مرحله آخر شامل وارد کردن مواد ترکیبی به محیط کشت جهت فعالیتهای متابولیکی ارگانیسم مورد نظر می باشد . از آنجا ئیکه این محیط ها جهت ارگانیسم مورد نظر انتخاب شده اند و برای سایر ارگانیسم ها مضر می باشند آنها را محیط های انتخابی می نامند . مثالی از این نوع محیط ها ، محیط کشت فنیل اتیل الکل آگار است که از رشد باسیل های گرم منفی هوازی و بی هوازی اختیاری ممانعت بعمل آورده و به ارگانیسم های گرم مثبت اجازه رشد می دهد .
اسلاید 5: طرز تهیه کلی محیط های کشت :همانطوریکه می دانید محیطهای کشت به سه دسته جامد ، نیمه جامد ، مایع تقسیم می شوند . برای ساختن محیط های کشت باکتری، ما از پودر مخصوص که در شیشه های مربوطه قرار دارد، استفاده می کنیم. در روی این شیشه ها ترکیب محیط بطور کامل و همچنین طرز ساختن آن نوشته شده است . مثلاً برای ساختن نوترینت آگار ابتدا مقدار لازم از پودر آن را وزن کرده ودر مقدار معینی آب مقطر که قبلاً در یک ارلن مایر یا بطری ریخته اید اضافی نموده و آنرا کاملاً حل نمائید وسپس با پنبه درب ارلن مایر را مسدود کرده و آن را روی سه پایه چراغ گازی حرارت می‌دهید ، تا زمان جوشیدن آنرا چند بار تکان دهید تا خوب حل شود و بمدت یک دقیقه بجوشد پس از آنکه مایع بجوش آمد ، آنرا برداشته و در اتوکلاو می‌گذارید تا در فشار ۱۵ پاند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل شود . بعد از استریل کردن بگذارید تا خنک شود تا حدود 45- 40درجه
اسلاید 6: ادامه ...سپس در حالیکه ارلن را در دست راست گرفته و پنبه آنرا با دست چپ کنار شعله خارج کرده‌اید ، دهانه ارلن را یکبار از درون شعله گاز عبور دهید وبعد درون پلیت های استریل شده بین cc20- 15 از محل محلول بریزید . بعد پلیت ها را در کناری بگذارید تا سرد شوند وازتکان دادن آن خودداری نمائید وپس از جامد شدن محیطهای کشت نوترینت آگار را جمع کرده ودر 37 درجه بمدت ۲۴ ساعت قرار دهید . اگر محیط ها آلوده نشده باشند آنها را از 37درجه بیرون آورده و در یخچال قرار می‌دهید .طرز ساختن سایر محیطهای کشت، همینطور می‌باشد منتهی بعضی از محیطهای جامد در لوله مستقیم، پس از جوشاندن ریخته شده و بعد استریل می‌شوند که این محیطها را پس از استریل شدن، به طور ایستاده می‌گذاریم مثل محیط SIM و یا کج می‌گذاریم مثل محیط TSI تا سرد شوند .برای ساختن محیط مایع (براث) پس از جوشاندن، محیط را در لوله ها تقسیم می‌کنیم و سپس با پنبه‌ای درب آنها را مسدود کرده و جهت استریل داخل اتوکلاو قرار می‌دهیم .
اسلاید 7: فرمولاسيون محيط هاي كشتفرمولاسيون همة محيط هاي كشت، قابل تقسيم به نقش ها يا وظايف مختلف است: 1- مواد مغذي: پروتئين ها، پپتيدها، اسيد هاي آمينه 2- انرژي: كربوهيدرات ها 3- فلزات و مواد معدني ضروري: كلسيم، منيزيم، آهن، عناصر كمياب (فسفات ها، سولفات ها و ...) 4- عوامل بافري: فسفات ها، استات ها و ... 5- انديكاتورهاي تغيير:pH فنل رد، بروموكرزول و ... 6- عوامل انتخابي: مواد شيميايي، عوامل ضد ميكروبي 7- عامل ژله اي شدن: معمولاً آگار
اسلاید 8: رعايت نكات مهم در تهية محيط هاي كشت
نقد و بررسی ها
هیچ نظری برای این پاورپوینت نوشته نشده است.