آزمایشگاه بیوشیمی

صفحه 1:


صفحه 2:


صفحه 3:


صفحه 4:
بطور كلي هر اسپکتروفتومتر: . يك منبع نوراني» ۰ يك وسیله ایجاد نور تکرنگ با طول موج مشخص ‎٠‏ يك سلول يا لوله مخصوص براي جادادن محلول رنگي ‎٠‏ يك سلول فتوالکتريك و يك گالوانومتر دارد. 

صفحه 5:


صفحه 6:
ليميا ۱ O} 

صفحه 7:


صفحه 8:


صفحه 9:


صفحه 10:
‎Ss‏ در مورد جذب وعبور ‎ 

صفحه 11:
نحوه درجه بندی دستگاه اسپکتروفوتومتر 

صفحه 12:
روش کار و اندازه گيري جذب يك محلول 

صفحه 13:
نتخاب طول موج مناسب جهت اندازه گیری جذب 

صفحه 14:


صفحه 15:
صفر دستگاه را با لوله شماره 6 میزان کنید. مقدار دانسیته اپتيك لوله هاي بعدي را در 0000 ميلي میکرون اندازه بگیرید منحني تغییرات دانسیتهايتيك بر حسب غلظت محلول رسم نمائيد. در صورتیکه منحني از قانون بیر متابعت کند به صورت يك خط مستقیم خواهد بود. 

صفحه 16:


صفحه 17:


صفحه 18:


صفحه 19:


صفحه 20:


صفحه 21:


صفحه 22:
محلول ید با نشاسته و گلیگوژن ایجاد رنگ مي نماید. 

صفحه 23:
Sa ‏اوزازون‎ ... 

صفحه 24:
واكنشهاي اختصاصي قندها 0 - واکنش مولیش این واکنش به تمام قندها جواب مثبت مي دهد. قندها در مجارت اسيدهاي غلیظ آب از دست داده و تبدیل به فورفورال یا مشتقات آن مي شوند؛ اين جسم با محلول الكلي آلفا- نفتل ماده رنگي ایجاد مي کند. خلاصه واکنش ها به قرار زیر است: ‎Stas‏ تا ‎Bet 05 —s aw ‎ue wT‏ فورفرال ‏قرمول احتعالى تركيب رنگیدرواکتش ‎ele ‎ 

صفحه 25:


صفحه 26:


صفحه 27:


صفحه 28:


صفحه 29:


صفحه 30:
‎Jamey cll gales ply‏ حساين اسبت. اگر قندهاي ديگري با غلظت زیاد يعني بیش از 96 بدان اضافه شود همین رنگ را تولید مي نماید. ‏ساکارز اگر کمي بیشتر از زمان ذکر شده حرارت داده شود چون هیدرولیز مي شود لذا به واکنش سلیوانف جواب مثبت مي دهد. ‏فرمول احتمالي ترکیب قرمز رنگ در آزمایش سلیوانف : ‎ 

صفحه 31:


صفحه 32:


صفحه 33:
زمان تشکیل اوزازن براي قندهاي مختلف به شرح زیر است: فروكتوز ‎١‏ © دقيقه گلوکز 0-6 دقیقه اکتوز پس از سرد شدن كاملاً سرد مي كند. 35 * مالتوز پس از سرد شدن کامل رسوب مي کند. ‎nee oe‏ ساکارز در مدت آزمایش رسوبي ایجاد نمي کند بلورهاي اوزازان از بالا و به ترتیب عبارتند از: گلوکزازن گالاکتوزان آرابینوزازن لاکتوزازن مالتوزازن گزیلوزازن 

صفحه 34:


صفحه 35:


صفحه 36:


صفحه 37:
براي تشخيص يك قند مجهول از جدول زیر استفاده میکنیم. اگر آزمایش مولیش مثبت باشد. t بندیکت و نوساکاریدیادی‌ساکاریداحیا نند > هيدروليز با [ميزو حرارت آزمایش بافود 1 اگربا بندیکت احیاء وبه‌سلیوا نف جواب مثبت‌داد .لش = ‎a |‏ شارت | ‎rr‏ ‏تفكيك ب : أوزارن أسبدموسيك ‎ia‏ آزمایش سلیوانق اغا دا فروکتوز اكلوكزياكالاكتوز يا بنتوي 5 ان 1 آزمایش‌پیال و تائوسو ‎(I (+)‏ پنتوز ۱ [كلوكز با تشكيل اوزازن | 

صفحه 38:


صفحه 39:


صفحه 40:


صفحه 41:
, سنجش گلوکر در ه ‎en‏ 

صفحه 42:


صفحه 43:


صفحه 44:


صفحه 45:


صفحه 46:
‎st‏ ریاد ‎ ‎ 

صفحه 47:
_ E> 0 el ce 

صفحه 48:


صفحه 49:


صفحه 50:


صفحه 51:


صفحه 52:
اس ]گیب ‎en‏ 

صفحه 53:


صفحه 54:


صفحه 55:
Pa ج) تشخیص چربيهاي اشباع شده از چربيهاي اشباع نشد چند قطره اسید اولئيك یا روغن زیتون را در لوله آزمایش مي ريزیم. و يك تا دو قطره محلول اسید اسميك 960 بدان مي افزاییم رنگ سياهي ایجاد مي شود. اين آزمايش با اسيد بالميتيك خالص منفي خواهد بود. اسید اسميك محل پیوندهای دو كانه.را اكسيد می کند . استرهاي اسید اسميك که سیاه رنگ مي باشند تشکیل مي شود: ‎Oy, - 0-0‏ ات ‎S00, — 1 ۵‏ + 2 5 07 ‎ ‎_cn 

صفحه 56:
- شناسايي گلیسرول درترکیب يك گلیسرید در لوله آزمايش كاملاً خشكي يك تا دو قطره روغن زيتون مي ريزيم. و سيبس قدري بودر سولفات يتاسهم بدان مي افزاييم. و مخلوط را روي شعله حرلرت مي دهيم . ابتدا بي سولفات پتاسیم در 00000 درجه حرارت ذوب مي شود. و سپس در اثر حرارت روغن زیتون تجزیه مي شود و گلیسرول آن آزاد مي گرددبو در اثر بي سولفات پتاسیم که به شدت آبگیر است؛ گلیسرول تبدیل به آلدئيدي بنام اکرولئین مي شود. بخارات سفید اکرولئین که از لوله متصاعد مي شود داراي بوي مشخصي است و باعث تحريك دستگاه تنفسي مي گردد. میاه م OH 

صفحه 57:


صفحه 58:


صفحه 59:


صفحه 60:


صفحه 61:


صفحه 62:


صفحه 63:


صفحه 64:


صفحه 65:


صفحه 66:


صفحه 67:


صفحه 68:


صفحه 69:


صفحه 70:


صفحه 71:


صفحه 72:


صفحه 73:


صفحه 74:


صفحه 75:


صفحه 76:
(| 015 0 

صفحه 77:


صفحه 78:


صفحه 79:


صفحه 80:
See) 

صفحه 81:
انديس يراكسيد بر حسب <= = الا اليته مكلول لير 

صفحه 82:


صفحه 83:


صفحه 84:


صفحه 85:


صفحه 86:


صفحه 87:


صفحه 88:


صفحه 89:


صفحه 90:


صفحه 91:


صفحه 92:
محا سبه مقدار میلی گرم اسید آمینه سح ار ی و 

صفحه 93:
بسا 3 أسيدي و قليابي. در ساختمان مولگولي ‏ ۳ a 

صفحه 94:


صفحه 95:


صفحه 96:


صفحه 97:


صفحه 98:


صفحه 99:


صفحه 100:
کلسترول از گروه الکل هاي جامد حلقو: 

صفحه 101:


صفحه 102:


صفحه 103:


صفحه 104:
ادامه روش کار 

صفحه 105:


صفحه 106:
آذآ ۳۳ نت اهر انز یمی ار ۳ مت غيرپروتئيني بنام ريث 

صفحه 107:


صفحه 108:


صفحه 109:


صفحه 110:


صفحه 111:


صفحه 112:


صفحه 113:
نيلي لیتر اسید : 

صفحه 114:
ادامه آزمایش اثر ,4۳0 روی فعالیت آنزیم 

صفحه 115:
ادامه آزمایش اثر ‎PW‏ 

صفحه 116:


صفحه 117:


صفحه 118:


صفحه 119:
شتاعلی»بوسفت:کامیاب» — Sed J ‏تورات‎ 

صفحه 120:


صفحه 121:
برای عضویت در شیکه دانشجویان ایران عدد 

مادسیج یعنی دهکده علم و دانش ایران!! مادسیج ،شبکه آموزشی پژوهشی دانشجویان ایران ‏Madsg.com بسمه تعالی آزمایشگاه بیو شیمی (جهت رشته شیمی) (یک واحد درسی ) بر ا,ساس سر فصلهای مصوب دانشگاه تهیه کننده :علی مولوی دانشگاه پیام نور مشهد 1385 کاربرد اسپکترو فتو متری در بیو شیمی 1 – اسپكتروفتومتري بوسيله اسپكتروفتومتر شدت رنگ محلولها را با دقت اندازه گيري مي كنند. دستگاههائي كه براي رنگ سنجي به كار برده مي شوند الكتروفتومترو يا اسپكتروفتومتر ناميده مي شوند. شماي ساده زير قسمتهاي مختلف يك الكتروفتومتر را نشان مي دهد. بطور كلي هر اسپكتروفتومتر: • يك منبع نوراني، • يك وسيله ايجاد نور تكرنگ با طول موج مشخص • يك سلول يا لوله مخصوص براي جادادن محلول رنگي • ،يك سلول فتوالكتريك و يك گالوانومتر دارد. اندازه گيري غلظت يك محلول به دو روش مي توان غلظت يك محلول را اندازه گيري كرد: الف) از راه اندازه گيري نوري كه از محلول رنگي خارج مي شود و به آن ، Transmitance،یا عبور می گویند؛ ب) اندازه گيري مقدار نوري ك,ه جذب محلول رنگ,ي م,ي شود و ب,ه آ,ن دانس,يته اپتيك ( O.D )OPTICAL DENSITYيا آبسوربنس مي گويند. الف) دانسيته اپتيك يا آبسوربنس نوري كه از يك محلول رنگي عبور مي كند مقداري از آن جذب محلول رنگي مي شود . اگ,ر Ioشدت نور اوليه و Iشدت نور خارج شده از محلول باش,د بنابراين I aشدت نوري ,اس,ت ك,ه جذب محلول رنگي گرديده است. ‏Ia = I - Io ‏Log Io - log I =OD = Absorbanc ‏logI/I0=OD ()1 ‏log I0/I=OD  جذب از دو قانون پيروي مي كند: مطابق قانون بيروالمبرت ( )BEER & LAMBERTهنگاميكه نور يك رنگ از محلول رنگي عبور ميكند مقدار نوري كه به وسيله محلول جذب مي شود ويا مقدار نوري كه از محلول خارج مي شود؛ به غلظت ماده رنگي موجود در محلول به ضخامت لوله ايكه نور از آن عبور كرده بستگي دارد گردد.یعنی: ‏OD=KCL  = ج,ذ ب قانون بیر المبرت ‏logIo/I= KCL كه در آن Kضريب جذب ماده مورد آزمايش C ،غلظت جسم مورد آزمايش و Lقطر لوله مي باشد و چون معموالً قطر لوله را مساوي يك سانتي متر اختيار ميكنند بنابراين خواهيم داشت: ‏OD= log I0/I=KC Kيا ض,,ريبج,ذبماده ,ب,,,را,يمواد مختلفف,,,رقميك,ند و ب,,,ه ,آ,سانيق,,ابلا,ندازه, ,ست گ,,,يريا . میزان عبور یا ترا نسمیتا نس ب) ترانسميتانس ) عبور: ), مقدار نوري اس,ت ك,ه از محلول رنگ,ي مورد آزمايش خارج مي شود، اگر شدت نور اولي I0و نور خارج شده Iباشد: ‏I0-I=Ia ‏Log I0/I=Log1/T ‏OD=Log1/T ‏I/I0=T مثال در مورد جذب وعبور اگ,ر نور وارد شده در محلول 100و نور خارج شده از آ,ن 10درص,د نور اوليه باشد خواهيم داشت: ‏OD= log 100 –log 10 ‏OD= 2-1 ‏OD =1 نحوه درجه بندی دستگاه اسپکتروفوتومتر روي صفحه مدرج دستگاه در قسمت باال درصد نور عبور كرده يا ترانسمیتانس در قس,مت پائين درس,ت در مقاب,ل درجات ترانس,میتانس ،ODی,ا اب,ز ربن,س قرار م,ي هند. ، درجات میزان عبور همه با هم مساوي است. درجات O Dبه علت لگاريتمي بودن نامساوي هستند. روش كار و اندازه گيري جذب يك محلول آزمايش – 1بهترين طول موج براي اندازه گيري غلظت يك محلول رنگي چيست؟ مي دانيد كه از تجزيه نور سفيد نورهاي مختلف رنگي حاصل مي شود كه در قسمت مرئي داراي طول موجهاي زير مي باشد. بنفش ،430-420آبي ،490-470سبز، 550-520 زرد580 انتخاب طول موج مناسب جهت اندازه گیری جذب محلول مورد آزمايش رادرمعرض تابش نورهايي با طول موجهاي مختلف قرارداده ODهاي قرائت شده را يادداشت مي كنيم. نمودار جذب برحسب طول موج را رسم می کنیم. طول موج منا سب ،طول موجی است که ماکز یمم جذب را دارد. روش انجام آزمایش آزمايش – 2جهت رسم منحني دانسيته اپتيك بر حسب غلظت هاي مختلف: 6 لوله آزمايش انتخاب كرده آن ها را از 1تا 6شماره گذاری کنید ب,ه ترتی,ب در آنه,ا 0؛ 6 ،4 ،2 ،1و 8میل,ی لیت,ر محلول بروموفنل( ) mg/L10بریزید. سپس به ترتیب 4، 6 ، 8، 9 ، 10و 2میلی لیتر آب مقطر بریزید. • صفر دستگاه را با لوله شماره 1ميزان کنید. • مقدار دانسيته اپتيك لوله هاي بعدي را در 580ميلي ميكرون اندازه بگيريد • منحني تغييرات دانسيته اپتيك بر حسب غلظت محلول رسم نمائيد. • در ص,ورتيكه منحن,ي از قانون بير متابع,ت كن,د ب,ه ص,ورت يك خ,ط مس,تقيم خواهد بود.  دو نكته :عملي – 1 در قرائت ODنتايج ،زماني قابل اطمينان است که: ‏ ‏OD <0.1 < 0.7 بنابر اين غلظت مجهول اگر زياد باشد بايد آنرا با حالل مربوطه طوري رقيق نمود كه ODآن در حدود بيان شده قرار گيرد. در اين صورت ضريب رقت را باید در محاسبه منظور نمود. – 2 اگر قرائت ODچندين مجهول پشت سر هم بخواهد انجام گيرد در فواصل قرائت بايد دستگاه را با شاهد ( )BLANKروي صفر ODتنظيم نمود. ر,وشهاي جدا كردن مواد از يكديگر دياليز ،با استفاده از كيسه هاي سلوفان. ژل فيلتراسيون “..”GEL FILTRATION كروماتوگرافي هاي مختلف (اليه نازك – جذبي – تعويض يوني – كاغذي) الكتروفورز آزمايش قندها يا گلوسيدها قندها يا ساكاريدها را به سه دسته تقسيم مي كنند: دسته اول – منوساكاريدها پلي الكلهاي 3تا 7كربني هستند كه يكي از عاملهاي الكلي به عامل كربنيل تبديل شده است و به ترتيب آنها را تريوز – تتروز -پنتوز -هگزوز -هپتوز مي نامند. منوساكاريدها ممكن است داراي عامل آلدئيدي يا ستني باشند كه در حالت اول آلدوز و در حالت دوم ستوز ناميده مي شوند. مهمترين پنتوزها :آرابينوز – گزيلوز – ريبوز و… مهمترين هگزوزها :گلوكز-مانوز-گالكتوز-فروكتوز … مي باشند.  دسته دوم – اليگوساكار,يدها از اليگو ساكاريدها ،دي ساكاريدها داراي اهميت بيشتري هستند. بعضي از دي ساكاريدها داراي خاصيت احياكنندگي مي باشند مانند :مالتوز و الكتوز. برخي ديگر داراي خاصيت احياء كنندگي نيستند .مانند ساكارز يا سوكروز. دسته سوم – پلي ساكاريدها ‏ مهمترين پلي ساكاريدها شامل نشاسته ،سلولز و گليكوژن مي باشد. واكنش رنگي قندها مهمترين واكنش هاي رنگي قندها به قرار زيرند: – 1 واكنش موليش ( - : )Molischنفتل +اسيد سولفوريك غليظ ؛ اين واكنش براي تمام ساكاريدها مثبت است. – 2 واكنش بارفود ( : )Barfoedاستات مس در اسيد استيك %1؛ اين واكنش مخصوص منوساكاريدهاست. – 3 واكنش بيال ()Bialاورسينول در اسيد كلريدريك FeCl3 +؛ به پنتوزها مانند گزيلوز جواب مثبت مي دهد. 4–  ‏ واكنش سليوانف ( : )Selivanoffرزورسينول در HCl؛ اين واكنش مخصوص ستوهگزوزها مانند فروكتوز مي باشد آلدوهگزوزها بكندي واكنش مي كنند. – 5 واكنش بنديكت ( : )Benedictمحلول قليائي سيترات مس ؛ ‏ اين واكنش به تمام قندهاي احياء كننده جواب مثبت ميدهد مانند منوساكاريدها (گلوكز –فروكتوز) و دي ساكاريدهاي احيا كننده نظير الكتوز و مالتوز ‏ محلول فهلينگ ( )Fehlingنيز نظير بنديكت واكنش می دهد.  --6واكنش يد (: )Iodine test محلول يد با نشاسته و گليگوژن ايجاد رنگ مي نمايد. در حاليكه با سلولز و دكسترين و اينولين رنگي نمي دهد. 7 –7 واكنش تشكيل اوزازون (Osazone formation منو و دي ساكاريدهاي احياء كننده با محلول فنيل هيدرازين قليایی توليد بلوريهاي مشخص مي نمايند. اوزازون گلوكز – فروكتوز و مانوز شبيه يكديگرند . بعضي از اوزازون ها مانند الكتوزازون در گرما محلولند. واكنشهاي اختصاصي قندها – 1واكنش موليش اين واكنش به تمام قندها جواب مثبت مي دهد. قندها در مجارت اسيدهاي غليظ آب از دست داده و تبديل به فورفورال يا مشتقات آن مي شوند؛ اين جسم با محلول الكلي آلفا -نفتل ماده رنگي ايجاد مي كند. خالصه واكنش ها به قرار زير است:  – 2 واكنش بارفود ()Barfoed اين واكنش وجود منوساكاريدها را مشخص مي نمايد. به 4ميلي ليتر معرف بارفود يك ميلي ليتر از قند مورد آزمايش اضافه مي كنيم. لوله آزمايش را به مدت 3تا 5دقيقه در آب جوش قرار مي دهيم. در منوساكاريدها رسوب قرمز اكسيد كوئيورو در ته لوله تشكيل مي گردد .  اين آزمايش را با يك پنتوز (گزيلور) ،گلوكز يا فروكتوز ،الكتوز انجام دهيد.  –-3 واكنش مور ()Moor اين واكنش به قندهاي احياء كننده جواب مثبت مي دهد. ، به 5ميلي ليتر محلول قند 1ميلي ليتر سود %10افزوده و آنرا در آب جوش قرار مي دهيم. بعد از 5دقيقه ايجاد رنگ قهوه اي و بوي مشخص دليل بر مثبت بودن واكنش است. محلول گلوكز ،مالتوز ،ساكارز ،و نشاسته را آزمايش کنید.  – 4واكنش بنديكت ()Benedict به قندهاي احياء كننده جواب مثبت مي دهد. به 5ميلي ليتر معرف بنديكت كيف,ي 8تا 10قطره از محلول مورد آزمايش اضاف,ه کنید. براي 5دقيقه در آب جوش بگذا رید . پ,س از س,رد شدن در ص,ورتي ك,ه رس,وب س,بز ،زرد يا قرم,ز ايجاد شود دليل بر وجود قند احياء كننده است. اين آزمايش را بر روي گلوكز ،فروكتوز ،گزيلوز ،ساكارز و مالتوز انجام دهيد.  5-واكنش فهلينگ ()Fehling ‏ فهلينگ Aمحتوي سولفات مس است. ‏ فهلينگ Bمحتوي تارترات سديم و پتاسيم و كمي هيدروكسيد سديم است. ‏ 1ميلي ليتر فهلينگ Aو 1ميلي ليتر فهلينگ Bرا مخلوط می کنیم. ‏ 2ميلي ليتر از محلول مورد آزمايش روي آن ريخته و مي جوشانيم. ‏ اگر محلول مورد آزمايش قند احيا كننده باشد رسوبي توليد مي شود؛ ‏ كه رنگ آن از زرد به قرمز متغيير است – 6واكنش سليوانوف ()Selivanoff • اين واكنش به ستوزهائي كه داراي عامل ستني هستند جواب مثبت مي دهد. • ب,,ه 5ميل,,ي ليت,,ر معرف س,,ليوانف 5قطره از محلول قن,,د مورد آزمايش افزوده آنرا در حمام ماري جوشان براي 90ثانيه و يا روي شعل,ه مس,تقيم براي 45 ثانيه حرارت مي دهيم . رنگ يا رسوب قرمز دليل وجود ستوز است. • اگررسوب را در الكل اتيليك حل كنيم الكل به رنگ قرمز در مي آيد. • واكنش سليوانف بسيار حساس است. • اگ,ر قندهاي ديگري ب,ا غلظ,ت زياد يعن,ي بيش از %2بدان اضاف,ه شود همين رنگ را توليد مي نمايد. • س,اكارز اگ,ر كم,ي بيشت,ر از زمان ذك,ر شده حرارت داده شود چون هيدروليز م,ي شود لذا به واكنش سليوانف جواب مثبت مي دهد. • . • فرمول احتمالي تركيب قرمز رنگ در آزمايش سليوانف : – 7واكنش بيال ()Bial ‏ براي تشخيص پنتوزها از واكنش بيال و تائوبر استفاده مي شود. ‏ بر روي 5ميلي ليتر معرف بيال 2ميلي ليتر از محلول مورد آزمايش اضافه مي كنيم ‏ .به ماليمت حرارت مي دهيم تا بجوشد سپس آنرا سرد مي كنيم. ‏ رنگ آبي تا سبز وجود پنتوز را مشخص مي كند. 8واكنش تشكيل اوزازناين واكنش مخصوص تمام منوو دي ساكاريدهاي احياء كننده است. ‏ درهر يك از چهار لوله 2ميلي ليتر از معرف فنيل هيدرازين. ‏ و سپس بترتيب 2ميلي ليتر از قندهاي آرابينوز ،گلوكز ،الكتوز و مالتوز. ‏ لوله ها را براي مدت 15تا 30دقيقه در آب جوش قرار مي دهيم. ‏ سپس در حرارت آزمايشگاه خنك می کنیم . ‏ با يك پيپت يك قطره از رسوب را روي الم گذارده و با المل آنرا می پوشانیم. ‏ در زير ميكروسكوپ بلورهاي آنها را مشاهده مي‌كنيم. زمان تشكيل اوزازن براي قندهاي مختلف به شرح زير است: فروكتوز گلوكز الكتوز مالتوز ساكارز 2دقيقه 19-15دقيقه پس از سرد شدن كامالً سرد مي كند. پس از سرد شدن كامالً رسوب مي كند. در مدت آزمايش رسوبي ايجاد نمي كند بلورهاي اوزازان از باال و به ترتيب عبارتند از: گلوكزازن گاالكتوزان آرابينوزازن الكتوزازن مالتوزازن گزيلوزازن – 9هيدروليز ساكارز ‏ در 3ميلي ليتر از محلول ساكارز يك تكه كاغذ قرمز كنگو ابیاندازید. ‏ قطره قطره اسيد كلريدريك %1بیافزائید تا كاغذ به رنگ آبي درآيد ( PHدر حدود .)2-3 مخلوط را براي مدت 5دقيقه بجوشانید. ‏ روي محلول هيدروليز شده واكنشهاي بنديك,,ت – بارفود – س,,ليوانف را انجام داده و نتيجه را شرح دهيد. ‏ 10واكنش يد ‏ اين واكنش مخصوص پلي ساكاريدهايي نظير نشاسته و گليكوژن است. ب,ه چن,د ميل,ي ليت,ر از چس,ب نشاس,ته يك قطره محلول يد – يدوره اضاف,ه م,ي كنيم رنگ آبي بنفش توليد مي شود. ‏ اگ,,ر مخلوط را بجوشانيم بيرن,,گ شده و پ,,س از س,,رد كردن رن,,گ آ,,بي دوباره ظاهر مي شود. ‏ يد با گليكوژن رنگ قهوه اي توليد مينمايد. تعيين مقدار گلوكز يا ساير قندهاي احياكننده به وسيله معرف بنديكت كمي تئوری محلول بنديكت كمي شامل مواد زیر است؛ سولفات مس ،كربنات سديم ،سيترات سديم ،تيوسيانات‌ پتاسيم و فروسيانور پتاسيم. م,س دو در محيط قليايي و در مجاورت قندهاي احيا كننده ب,ه م,س يك ظرفيتي ()Cu2O تبدیل می شود. براي تشخيص يك قند مجهول از جدول زير استفاده ميكنيم. تعیین تیتر محلول بندیکت در يك ارلن ماير صد ميلي ليتري 20ميلي ليتر بنديكت كمي مي ريزيم. 3تا 5گرم كربنات سديم و كمي خرده شيشه بر روي آن مي افزاييم.، آن را در روي شعله به ماليمت مي جوشانيم. از بورت گلوكز 2گرم در ليتر قطره قطره در حال جوش اضافه مي كنيم تا رنگ آبي محلول از بين برود. تيتر محلول بنديكت از رابطه زير بدست مي آيد: ‏t.N =T ‏N تيتر, ,Tعبار,ت است از:, مقدارگرم قند احيا كننده ای كه بتواند يك ليتر محلول بنديكت را احيا نمايد. ‏t ‏N ‏T= t.n/N دررابطه ؛ غلظتگ,,,لوكز ( 2گ,,,رم ,در هزار) nميلي ليتر گلوكز مصف شد ,ست ميليل,,يتر ب,,,نديكت( )ml 20ا . تعیین مقدار قند احیا کننده قنداحياء كننده مورد آزمايش را در بورت ريخته. عمليات را عينا ً مانند آزمايش قبل (تيتراسيون بنديكت) انجام مي دهيم . غلظت قند را بر حسب گرم در ليتر از تساوي زير بدت مي آوريم: ‏T.N =X ‏n Tت,,,يت,ر ب,,,نديك,تو Nحج,م ,ب,,,نديك,تمورد مص,رف( )ml 20و nل,,يت,ر محلولق,,ن,د ,ست مصرفش,,ده ,ا . تبص,ره :م,ي توان اندازه گيري غلظ,ت گلوك,ز را ب,ا محلول فهلين,گ در مجاورت فروس,,يانور پتاس,,يم نيز انجام داد ول,,ي محلول بنديك,,ت ب,,ه عل,,ت خواص زير بر محلول فهلينگ رجحان دارد: – 1خاص,,يت قليايي محلول بنديك,,ت از محلول فهلين,,گ كمت,,ر اس,,ت لذا باع,,ث پليمريزاسيون شدن قندها نمي شود. – 2محلولهاي احياء كننده ضعيف مانن,د اس,يد اوريك بر محلول بر محلول بنديك,ت اثر نداشته در صورتيكه محلول فهلينگ را احياء مي نمايد. بنابر اين س,نجش گلوك,ز در مجاورت احيا كننده هاي ضعيف ديگ,ر (مانن,د تركيب ادرار) به كمك بنديكت به سهولت انجام پذير است. گلوكزاوری گلوكز اوري glucosuriaيعني وجود گلوكز در ادرار . گليكوز اوري glycosuriaيعني وجود هر نوع قندي . جواب مثب,ت كاذب ممك,ن اس,ت در بيمارانيك,ه س,اليسيالت ،مورفين و بعضي از داروهاي ديگر خورده اند ،ديده شود. به طور معمول يك انسان سالم حداكثر يك گرم گلوكز از راه ادرار دفع مينمايد درگلوكزاوري مقداري گلوكز دفع شده از اين مقدار بيشتر است. گاهي گلوكز به طور اتفاقي از ادرار دفع مي شود كه در حاالت ،هيجان، شوك ،تحريك ،ورزشكاران در ورزش هاي سنگين، 15درصد از بيماراني كه گلوكز در ادرار دارند ،مربوط به بيماري قند نيست. بهترين تست براي گلوكز؛ تست گلوكز اكسيداز است. گلوكز در اثر آنزيم گلوكز اكسيداز تبديل به اسيد گلوكونيك gluconicو آب اكسيژنه (هيدروژن پراكسيد) می شود . هيدروژن پراكسيد حاصل ،در مجاورت پراكسيداز ،اورتولوئيدين را اكسيد (كه آبي رنگ است) مي نمايد. جستجوي گلوكز و قندهاي احيا كننده به روش بنديكت تهيه معرف بنديكت براي گلوكز 3/17 گرم سولفات مس در 100میلی لیتر آب حل کنید. 173 گرم-سیترات تری سدیک دو آبه و100گرم کربنات سدیم ایندر، در 600میلی لیترآب بکمک حرارت حل کرده به حجم 1لیتر برسانید. دو محلول فوق را با یکدگر مخلوط وبه حجم یک لیتر برسانید. جستجوی گلوکز در ادرار طريقه آزمايش: 5 ميل,ي ليت,ر معرف بنديك,ت در لول,ه آزمايش ريخت,ه و روي آ,ن 8ت,ا 10قطره ادراربریزید. 1-2 دقيقه روي شعله نگاه دارید.. اگ,ر گلوك,ز در ادرار زياد باش,د تمام محتوي لول,ه زرد آجري شده و رس,وب م,ی کند ،اگر مقدار آن متوسط باشد داراي رسوب و رنگ آن كامالً آجري می شود . اگر مقدار آن كم باشد ،زرد مايل به سبز مي شود ليپيدها يا چربي ها تعريف – ليپيدها يا چربيها مواد طبيعي حيواني يا گياهي هستند كه: در آب نامحلول اند. در بعضي از حاللهاي آلي مانند: اتر – كلروفرم – بنزن و الكل گرم و غيره حل مي شوند. طبقه بندي ليپيدها ليپديها را به دسته هاي مختلف زير طبقه بندي مي كنند. -1اسيدهاي چرب – 2چربيهاي خنثي (گليسيريدها) – 3مومها -4فسفوليپيدها الف -گليسروفسفوليپيده ب -اسفنگوفسفوليپيدها – 5استروئيدها آزمايشهاي ليپيدها – 1حالليت مقدار جزئي پيه گوسفند را در هر يك از چهار لوله آزمايش بریزید. ب,ه ه,ر كدام ب,ه ترتيب 3ميل,ي ليت,ر از حاللهاي آ,ب – الك,ل اتيليك ـ اتروكلروفرم بیلفزائید. ومیزان حاللیت یا عدم حاللیت چربی را در هر کدام مشاهد ه و گزارش کنید. سپس محتوي لوله چربي و الكل اتيليك را گرم نموده و نتيجه را يادداشت کنید.  – 2هيدروليز گليسريدها 25 ميلي ليتري آ,ب و 50ميلي ليت,ر س,ود %10و 4ميل,ي ليتر از يك تري گليسريد (پيه ذوب شده)در یک بشر مي‌ريزيم . مدت يك س,اعت مخلوط را مي‌جوشانيم .بای,د از ك,م شدن حج,م محلول جلوگيري نمود. تری گلیسرید هیدرولیزوصابونی می شود. واکنش صابون با یون کلسیم به 5ميلي ليتر محلول صابون 5ميلي ليتر آب افزوده سپس چند ميلي‌ليتر كلرور كلسيم اضافه مي‌كنيم رسوبي تشكيل مي شود اين رسوب چيست؟ چرا صابون در آب سخت ،خوب کف نمی کند ؟ واکنش صابون با اسید 20 تا 25ميلي ليتر از محلول صابون را در يك بشربریزید. بتدريج آنقدر اس,يد كلريدريك ب,ه آ,ن بیافزاييد و ب,ه ه,م بزنی,د ت,ا ديگ,ر رس,وبي تشكيل نشود. محلول را سرد کنید ،در سطح آن اسید چرب جمع می شود.  – 3آزمايش چربيهاي اشباع نشده الف) واکنش چربيهاي اشباع نشده با يد. چند قطره روغن زيتون را در 2تا 3ميلي ليتر كلروفرم حل کنید. چن,د قطره محلول الكل,ي كلرور مركوريك 5درص,د و چن,د قطره محلول الكل,ي يد رقيق بدان بیافزائید. رنگ قهوه اي يد از بين مي رود Cl2Hg ( .نقش كاتاليزور را دارد).چرا؟ ب) اكسيداسيون چربي هاي اشباع نشده به وسيله پرمنگنات پتاسيم چند قطره روغن زيتون را در چند ميلي ليتر محلول كربنات سديم حل کنید. سپس چند قطره محلول رقيق پرمنگنات پتاسيم بدان بیافزائید. رن,گ پرمنگنات از بين م,ي رود (كربنات س,ديم ب,ا ايجاد PHقليايي موج,ب ح,ل شدن چرب,ي در فاز آب مي شود). ‏ ازبين رفت,ن رن,گ پرمنگنات ب,ه عل,ت اكس,يداسيون چربيهاي اشباع نشده اس,ت ك,ه در مح,ل پیوند های دوگانه چربيها و اسيدهاي چرب انجام مي گيرد ج) تشخيص چربيهاي اشباع شده از ,چر,بيهاي اشباع نشده چند قطره اسيد اولئيك يا روغن زيتون را در لوله آزمايش مي ريزيم. و يك ت,ا دو قطره محلول اس,يد اس,ميك %2بدان م,ي افزاييم ،رن,گ س,ياهي ايجاد م,ي شود. اين آزمايش با اسيد پالميتيك خالص منفي خواهد بود. اسيد اسميك محل پیوندهای دو گانه را اکسید می کند . استرهاي اسيد اسميك كه سياه رنگ مي باشند تشكيل مي شود:  – 4شناسايي گليسرول در,تر,كيب يك گليسريد در لوله آزمايش كامالً خشكي يك تا دو قطره روغن زيتون مي ريزيم. و سپس قدري پودر سولفات پتاسيم بدان مي افزاييم. و مخلوط را روي شعل,ه حرا,رت مي دهيم . ابتدا بي سولفات پتاسيم در 200درجه حرارت ذوب مي شود. و س,پس در اث,ر حرارت روغ,ن زيتون تجزيه م,ي شود و گليس,رول آ,ن آزاد م,ي گردد,.و در اث,ر ب,ي س,ول,فات پتاسيم كه به شدت آبگير است ،گليسرول تبديل به آلدئيدي بنام اكرولئين مي شود. بخارات س,فيد اكرولئين ك,ه از لول,ه متص,اعد م,ي شود داراي بوي مشخص,ي اس,ت و باع,ث تحريك دس,تگاه تنفسي مي گردد.  – 5روشهاي مختلف تشخيص گليسر,ول گليسرول را به چند طريق مي توان مشخص كرد: ال,ف) تبديل گليس,رول ب,ه اكرولئين و تشخيص اكرولئين ب,ه وس,يله بوي مخص,وص آ,ن و يا به وسيله معرف شيف (.)Schiff ب) تبديل گليس,,,,,,رول ب,,,,,,ه آلدئيد گليس,,,,,,ريك و دي هيدروكس,,,,,,ي اس,,,,,,تن ب) تبديل گليسرول به آلدئيد گليسريك و دي هيدر,وكسي استن اگر 1ميلي ليتر گليسرول را با 20قطره آب برم مخلوط كنيم . و براي مدت 20دقيقه در آب جوش بگذاريم رنگ محلول كامالً از بين مي رود. در ص,ورتيكه رن,گ ب,ه كل,ي از بين نرود ،باز محلول را م,ي جوشانيم ت,ا بيرن,گ شود. در اين عم,,ل مخلوط,,ي از آلدئيدگليس,,ريك و دي اكس,,ي اس,,تن در اث,,ر اكس,,يداسيون گليسرول به وسيله آب برم به وجود مي آيد. كلسترول ‏ كلسترول در اكثر نسوج حيواني يافت مي شود. ‏ و به مقدار زياد در نسج عصبي و صفرا وجود دارد. ‏ تحقيق روي بيوسنتزو متابوليسم اين استرول اخيراً خيلي مورد توجه قرار ‏ زيرا در آترواسكلروز ( )Atherosclersisمقدار اين تركيب خيلي زياد مي ‏ [ ‏ ]1 گرفته است. شود. شنا سایی کلسترول الف) آزمايش سالكوفسكي ()Salkowski چند ميلي گرم از ماده را در لوله آزمايش ریخته ودر 3میلی لیتر کلروفرم حل کنید. 3 میلی لیتراسيد سولفوريك خالص‌اضافه كرده و به آرامي تكان دهید. بگذارید دو اليه محلول جدا شود رنگ ظاهر شده را يادداشت كنيد. اليه كلروفرمي كدام يكي است؟ رنگ اليه اسيد سولفوريكي را بنويسيد. ب) آزمايش ليبرمن – بورشارد ()Liebermann-Burchard يك نمونه محلول كلروفرمي كلسترول مانند آزمايش قبل تهيه کنید. و ب,ه آ,ن 10قطره انيدريد اس,تيك و 2قطره اس,يد س,ولفوريك غليظ اضاف,ه كرده ب,ه آرامي تكان دهید وبگذارید 5دقيقه بماند. رنگ حاصله داخل لوله را يادداشت كنيد. اين دو آزمايش را از نظر حساسيت با يكديگر مقايسه كنيد. ج) رسوب کلسترول باديژيتونين دو ميلي گرم كلسترول را در 2ميلي ليتر الكل حل کنید. اين محلول را به 2ميلي ليتر محلول الكلي %1ديژيتونين اضافه کنید. رسوب تشكيل شده كلسترول آزاد است.  – 7انديس صابوني كردن ()Saponification تعريف – عدد ص,,ابوني ؛مقدار ميل,,ي گرم پتاس,,ي اس,,ت ك,,ه براي ص,,ابوني كردن كردن يك گرم چربي الزم است. عدد ص,ابوني اطالعات مفيدي از چگونگ,ي اس,يدهاي چرب,ي ك,ه ب,ا گليس,رول تركيب شده اند بما مي دهد. کار برد عدد صابونی مقدار پتاس,,ي ك,,ه براي ص,,ابوني كردن اس,,يدهاي چرب مختل,,ف الزم اس,,ت ب,,ا وزن ملكولي آنها نسبت معكوس دارد. براي هر نوع چربي طبيعي عدد صابوني شناخته شده است. با اندازه گيري عدد صابونی مي توان به درجه خلوص چربي ها پي برد. در كنترل و بازرس,ي مواد غذايي و شناخ,ت تقل,ب چربي‌ه,ا ،اندازه گيري انديس صابون متداول مي باشد.  – 8انديس يد ()Iodine Number تعريف – انديس يد چرب,ي ه,ا عبارت از مقدار گرم يدي اس,ت ك,ه ص,د گرم چرب,ي مي تواند جذب كند. يد جذب شده پيوندهاي دو گانه اسيدهاي چرب غيراشباع را ،اشباع مي كند . چرب,ي هايي مايع و غن,ي از اس,يدهاي چرب غير اشباع نس,بت ب,ه چرب,ي هاي جام,د يا نيمه جامد ،انديس يد بزرگتري خواهند داشت. صابونی کردن چیست؟ صابوني كردن :هيدروليز يك استر به الكل و اسيد و يا نمك مربوطه است. در مورد چربيها صابوني كردن واكنش بين قليايي و چربي است كه ؛ منجر به تشكيل صابون و گليسيرين مي شود. از طرف ديگ,ر اص,طالح ص,ابوني كردن ب,ه ه,ر نوع هيدروليز چرب,ي نيز اطالق م,ي شود. اندیس صابونی انديس صابوني که بعضي مواقع عدد صابوني نيز ناميده مي شود؛ عبارتس,ت از مقدار ميل,ي گرم هيدروكس,يد پتاس,يمی ك,ه براي ص,ابوني كردن يك گرم روغن الزم است. انديس صابوني مربوط به ميانگين وزن مولكولي روغن است.  معادل ص,ابوني][1 – عبارتس,ت از مقدار گرم روغن,ي ك,ه ب,ه وس,يله يك مولكول گرم ( 108/56گرم) هيدروكسيد پتاسيم صابوني مي شود. انديس خنث,ي و معادل خنث,ي]-[2 ب,ه ترتيب همان تعاريف فوق م,ي باشد كه به جاي گليسيريدها اختصاصا ً براي اسيدهاي چرب بكار مي روند. ‏ ].Saponification equivalent - [1 .Neutralization Vilue, Neutralization equivalent - ]2[  اندازه گيري انديس صابوني اساس روش: حرارت دادن هيدروكسيد پتاسيم با مقدار معلوم روغن تا تكميل صابوني شدن؛ و تيتراسيون قلياي اضافی به وسيله اسيد استاندارد است. انديس صابوني از مقدار قليائي كه با نمونه واكنش مي دهد محاسبه مي شود. ‏C3H5(COOR)3 + 3KOH→ 3RCOOK + C3H5(OH)3 مواد و محلولهاي الزم ‏ محلول تقريبا ً يك دوم نرمال پتاس الكلي ‏ محلول اسيد كلريدريك يك دوم نرمال دقيقا ً استاندارد شده ‏ شناساگر فنل فتالئين وسایل الزم: • بالن 250میلی لیتری • بن ماری جوش • مبرد تر جیحا حلزونی روش كار اگر روغن مايع نباشد آنرا ذوب كرده و با كاغذ صافي صاف كنيد . ‏ حدود 2گرم روغن صاف شده دقيقا ً وزن كرده وآنرا به بالن 250ميلي ليتري منتقل نمائيد. با يك پيپت دقيقا ً 25ميليمتر محلول پتاس الكلي نيم نرمال به بالن اضافه كنيد . بالن را به مدت یک ساعت در حالت رفلو قرار دهید. همزمان یک شاهد را اجرا کنید. پس از یک ساعت با محلول اسید نیم نرمال تیتر( فنل فتالئین ) کنید.  .انديس صابوني را از رابطه زير بدست آوريد: )A-B(28.05 ‏W ‏A = مقدار ميليل,,يتر ا,سيد ك,لريدريك 5/0ن,,رما,,لب,,,كار رفته ,ب,,,را,يت,,,يترا,سيونش,,اهد. =Bمق,دار ميليل,,يتر ا,سيد ك,لريدريك 5/0ن,,رما,,لب,,,كار رفته ,ب,,,را,يت,,,يترا,سيونن,,مونه., = Wوزنروغنب,,,ر حسبگ,,,رم., انديس پراكسيد اندازه گيري انديس پراكسيد بهترين وسيله موجود براي ارزيابي اكسيداسيون روغن مي باشد. زيرا وقت,ي ك,ه در روغ,ن پراكس,يدها ياف,ت شون,د مس,لما ً در آ,ن اكس,يداسيون بوجود آمده است. ام,ا س,ؤالي ك,ه جواب دقيق ب,ه آ,ن مشك,ل اس,ت اينس,تكه روغ,ن ت,ا چ,ه ح,د اكس,يد شده است. انديس پراكسيد را معموالً با روش يدومتري تعيين ميكنند . دو منبع اصلي خطا با روش يدومتري عبارتند از: الف – جذب يد در باندهاي اشباع نشده مواد چرب ب – آزاد شدن يد از يدور پتاس,يم ب,ه عل,ت اكسيژن موجود در محلول تيترشونده. الف – ,خطاي ناشي از اكسيژن اكس,يژن محلول در نمون,ه ،حالل و س,اير مواد واكن,ش كننده باع,ث آزاد شدن يد ازيدور پتاسيم مي شود 4I+ O2 2I2+2H2O اين واكن,ش ك,ه ب,ه نام واكن,ش خطاي اكس,يژن ناميده شده اس,ت ،باع,ث م,ي شود ك,ه انديس پراكسيد بيش از حد واقعي بدست آيد. (ر,وش سرد) نمونه شماره 1 (ر,وش سرد) نمونه شماره 2 (روش داغ) نموه شماره 1 (روش داغ) نمونه شماره 2 141 - 150 121 123 135 - 113 115 116 116 121 - 113 112 112 110 116 139 112 حالل مناسب برای اندازه گیری پر اکسید بهترين حالل مخلوط,,ي از اس,,يد اس,,تيك و كلروفرم ب,,ه نس,,بت حجم,,ي ()3 +2 است در حال حاضر نيز از اين مخلوط استفاده مي‌شود. در ص,ورتي ك,ه نس,بت اس,يد اس,تيك ب,ه كلروفرم تغيير كن,د نتيج,ه آزمايش ممك,ن است تغييرنمايد. ج – شرايط واكنش زمان واكنش در روشهاي مختلف از يكدقيقه تا يك ساعت است. درجه حرارت آزمايشگاه تا نقطه جوش محلول پيشنهاد شده است. در مورد نمون,ه هائيك,ه انديس پراكس,يد باالئ,ي دارن,د ،واكن,ش يكس,اعته نتايج بهتري م,ي دهد. محلولهای الزم در ,اندازه گيري انديس پر,اكسيد مخلوط اسيد استيك و كلروفرم(. 3 : )2 محلول يدور پتاسيم اشباع شده تازه. محلول تيوسولفات سدم 1/0نرمال محلول شناساگر نشاسته ،محلول 1درصد. ر,وش اندازه گیری اندیس پرکسید 5 گرم نمونه در ارلن وزن کنید. 30 میلی لیتر مخلوط اسید استیک وکلروفرم. 5/0 میلی لیتر محلول یدید پتاسیم. 30 میلی لیتر آب مقطر. با تیو سولفات 1/0تیتر کنید ،پس از زایل شدن رنگ زرد ،نشاسته اضافه کنید تا از بین رفتن رنگ آبی ادامه دهید. محاسبه انديس پراكس,يد بر حس,ب ميل,ي اك,ي واالن پراكس,يد در 1000گرم نمون,ه برابر است با: ‏S×N×1000 ‏W = ميليل,,يتر ت,,,يوسولفاتمصرفي ‏S = Nنرماليته محلول تيوسولفات سديم ‏W = وزنن,,مونه ,ب,,,ر حسبگ,,,رم, اسيدهاي آمينه و پروتئين ها پروتئين ها پلي مرهاي اسيدهاي آمينه می باشند. وزن ملكولي پروتئن ها زياد مي باشد. بيست اسيد آمينه مختلف در پروتئينهاي حيواني و گياهي شركت مي كنند. واكنشهاي اختصاصي اسيدهاي آمينه – 1حالليت حالليت اسيدهاي آمينه در آب متفاوت است. در حدود 50ميل,,,ي گرم از اس,,,يدهاي آمين,,,ه گليس,,,ين ،تيروزين را در دو لول,,,ه جداگانه مي ريزيم . به هر يك 10ملي ليتر آب مقطر افزوده و خوب تكان مي دهيم حالليت اين دو را در آب مشاهده ونتیجه را گزارش می کنیم.  – 2واكنش گزانتو پروتئيك ()Xanthoproteic يك ميل,ي ليت,ر از اس,يد آمين,ه گليس,ين و يك ميل,ي ليت,ر تيروزين (ك,ه قبالً تهيه كرده‌ايم) در دو لوله جداگانه مي ريزيم. يك ميلي ليتر اسيد نيتريك غليظ افزوده و مي جوشانيم . رن,گ محلول تيروزين زرد م,ي شود چنانچ,ه كم,ي س,ود غليظ ب,ه آ,ن اضاف,ه كنيم محلول نارنجي مي گردد. ايجاد رنگ زرد مربوط به حلقه بنزني است.  – 3واكنش ميلون ()Millon 2 ت,ا 3ميل,ي ليت,ر از محلول گليس,ين و تيروزين را جداگان,ه در دو لول,ه آزمايش م,ي ريزيم .و چن,د قطره از معرف ميلون (نيترات و نيتريت جيوه در اس,يد نيتريك) به هر يك اضافه مي كنيم . محلول را مي جوشانيم لوله محتوي تيروزين قرمز رنگ مي شود. پيدايش اين رنگ مربوط به وجود بنيان حلقه فنلي تيروزين است.  – 5واكنش نين هيدرين ()Ninhydrine كليه اس,يدهاي آمين,ه ك,ه داراي آلف,ا آمينوي آزاد هس,تند (ب,ه اس,تثناي پرولين و هيدروكسي پرولين) بانين هيدرين (هيدرات تري ستوهيدرندن)واکنش می دهند. انيدريد كربنيك و آمونياك آزاد می شود. يك تركيب آبي رنگ ایجاد می شود. روش آز,مایش با نین هیدرین 3 ميلي ليتر از محلول يكي از اسيدهاي آمينه را در لوله آزمايش بریزید. چند قطره از محلول 0.1درصد نين هيدرين در استن به آن اضافه کنید. لوله را به مدت 10دقيقه در حمام آب جوش قرار دهید. ر نگ آبي حاصل را مشاهد کنید.  – 6آزمايش اسيدهاي آمينه گوگرد دار ()Sulfur Test در يك لوله آزمايش مقدار كمي سيستين ودرلوله دیگرمتيونين بریزید. %اضافه کنید. بهر كدام 5ميلي ليتر سود ‌ 10 . لوله ها را 15دقيقه در حمام آب جوش قراردهید. 10 قطره استات سرب %5بهر يك اضافه ي كنيد. رنگ محلول تيره شده به سياهي مي گرايد. به آرامي 2ميلي ليتر اسيد كلريدريك غليظ اضافه کنید. بوي نامطبوعي استشمام ميشود(؟)  – 7آزمايش ساكا گوچي ()Sakaguchi يك ميلي ليتر محلول آرژي نين را در لوله آزمايش تهيه مي كنيم . مقدار جزئ,ي محلول الكل,ي آلفانفت,ل و 2ت,ا 3قطره محلول هيپوبرميت س,ديم و مقدار كمي هيدروكسيد سديم بدان مي افزائيم. رنگ قرمزي ايجاد مي شود. اين واكن,ش مربوط ب,ه ريش,ه گوانيدين م,ي باش,د و براي يك در ميليون محلول آرژ,ي نين مثبت است. اين آزمايش را با محلول اسيدهاي آمينه تيروزين يا تريپتوفان نيز انجام دهيد. تشخيص و تعيين مقدار يك اسيد آمينه به وسيله فرمل تيتراسيون ابتدا به وسيله فرمالدئيد عامل آميني را مهار كرده. سپس جسم حاصل را مثل اسيد آلي مي سنجيم . اين آزمايش به نام روش سورنسن Soraensenيا فرمل تيتراسيون ناميده مي شود. ‏NH2 ‏HN-CH2OH ‏HOCH2-NCH2OH ‏H2C=O ‏R-C-COO ‏H ‏H2C=O ‏R-C-COO- ‏R-C-COO- ‏H ‏H تعيين مقدار يك اسيد آمينه در يك ارلن كوچك 10ميلي ليتر از اسيد آمينه می ریزیم. 10 ميلي ليتر فرمل با PHحدود 1 9اضافه می کنیم. با سود 1/0نر مال تیترمي كنيم تا رنگ صورتي كم رنگ مجدداً ظاهر گردد از مقدار سود مصرفي غلظت اسيد آمينه را محاسبه ميکنیم. 1ب,ه روي 20ميل,ي ليت,ر فرم,ل در مقاب,ل فن,ل فتالئين قطره قطره س,ود دس,ي نرمال م,ي افزائيم ت,ا رن,گ ص,ورتي كمرن,گ ايجاد شو.د .PH= 9 محا سبه مقدار ,میلی گرم اسید آمینه ‏M 100 ‏n ‏mg% 10 10 =nمیلی لیتر سود مصرف شده =Mوزن مولکولی اسید آمینه نقطه ايزو الكتريك اسيدهاي آمينه و پروتئينها مقدمه پروتئينها ،اسيدهاي آمينه ،فسفوليپيدها و ... در ساختمان مولكولي خودعامل اسيدي و قليايي توائم دارند .اين تركيبات داراي خاصيت آمفوتري هستند . يعني هم خاصیت اسيدی دارند وهم خاصیت بازی. تعريف PHايزو الكتريك يونيزاسيون اسيدهاي آمينه و پروتئينها در PHمعيني به حداقل مي رسد. ،در نتيجه يونهاي مثبت و منفي آن برابر مي شوند، اين PHرا نقطه ايزوالكتريك ميگويند. اغلب پروتئين ها در PHايزوالكتريك به مقدار ناچيزي در آب حل مي شوند، نقطه ايزوالكتريك چند اسيد آمينه و پروتئين به قرار زير است: تركيبات PHدر ن,,قطه, ا,يزوا,,لكتريك 6 گليسين 3.2 اسيد گلوتاميک 4.6 سيستين 6 لوسین 5.9 تریپتوفان 5.7 تیروزین 10.8 آرژینین 4.8 آلبومین تخم مرغ 5.4 سرم گلوبولین 4.7 سرم آلبومین 4.7 کازئین 4.7 ژالتین اندازه گيري PHايزو الكتريك كاز,ئين روش کار : در يك بال,ن ژوژ,ه 100ميل,ي ليتري 0.5گرم كازئين خال,ص و 40ميل,ي ليتر آب و 10ميلي ليتر سود نرمال مي ریزیم. پس از حل شدن كامل كازئين 10ميلي ليتر اسيد استيك نرمال افزوده . حجم را تا 100ميلي ليتر با آب مقطر كامل مي كنيم . خوب مخلوط مي نمائيم. در 9لوله آزمایش ،طبق جدول بعد ،محلولهاي الزم را در هر يك مي ريزيم. 9 8 7 6 5 4 3 2 - - - - - - - 0.6 1.2اسید استیک 0.01نرمال 2 5 - 8 4 2 1 - - - - 0.2 0.5 5 - 5 7 8 4. 4.1 3.8 4 4. 7 8.3 7.7 8.7 8.5آب مقطر 8 5 5 PH 5.9 5.6 5.3در 5 محدود - 1.6 7. 4 3. 5 1 1 - شماره لوله ها اسید استیک 0.1نرمال اسید استیک نرمال  به هر يك از لوله ها يك ميلي ليتر از محلول كازئين افزوده؛ ‏ لوله ها را بالفاصله تكان مي دهيم ، ‏ كدورت حاصله را بعد از 10و 30دقيقه مالحظه مي كنيم، ‏ نتيجه را بر حسب شدت كدورت از صفر تا چهار ( )+مشخص مي نمائيم. در كدام يك از لوله ها رسوب بيشتر ايجاد شده است ؟ ,ست PHن,,قطه ,ا,يزوا,,لكتريك ك,ازئينچقدر ا ؟ كلسترول ‏ كلسترول از گروه الكل هاي جامد حلقوي به نام استرول مي باشد . ‏ كه به ‏ با اسيدهاي چرب ايجاد استريدها (يك نوع ليپيد) مي نمايد، ‏ كلس,ترول ب,ه طور ط,بيعي در خون و س,لولهاي تمام بافتهاي حيوان,ي ب,ه مقادير مختل,ف ياف,ت مي شود. ‏ عالوه بر كلسترول كه توسط مواد غذايي به بدن مي‌رسد ‏ تقريبا ً در تمام س,لولهاي بدن و ب,ه ويژ,ه در كب,د كلس,ترول از طريق متراك,م شدن ريش,ه هاي دو كربن دار ا,ستات توليد مي شود.، ‏ كلس,ترول در كب,د ب,ه اس,يدهاي ص,فراوي ،در غدد فوق كليوي و غدد مترشح,ه هورمونهاي جنس,,ي ب,,ه هورمونهاي اس,,تروئيدي و باالخره در زير پوس,,ت (مشت,,ق دهيدروكلس,,ترول) ب,,ه ويتامين Dتبديل مي گردد. اصول ر,وش انداز,ه گیر,ی کلسترول در سرم ‏ كلسترول را به كمك حاللهاي آلي از سرم و پروتئينها جدا نموده. ‏ بر روي محلول آن يك واكنش رنگي انجام مي دهيم. شدت رنگ حاصل را با يك محلول استاندارد كلسترول مي سنجيم. معرف ها: ‏ محلول استاندارد كلسترول 100ميلي گرم درصد ميلي ليتر كلروفرم محلول اتر و الكل (يك حجم اتر و سه حجم الكل) انيدريد استيك خالص اسيد سولفوريك خالص كلروفرم روش کار – 1ده ميل,ي ليت,ر مخلوط ات,ر و الك,ل را در يك لول,ه س,انتريفوژ ريخت,ه 0.2ميل,ي ليتر سرم به آن اضافه مي نمائيم. – 2دهان,ه لول,ه را بس,ته و يك ال,ي دو دقيق,ه ب,ه شدت تكان م,ي دهيم و ده دقيق,ه ب,ه حال خود مي گذاريم. – 3پنج دقيقه سانتريفوژ مي نمائيم. -4محلول را با دقت در داخل يك بشر كوچك ) )Tمی ریزیم. – 5بشر را بر روي بن ماري جوش قرار مي دهيم تا محلول تبخير شود. ادامه روش کار 0.5 – 6ميل,ي ليت,ر محلول اس,تاندارد كلس,ترول در بش,ر كوچ,ك ديگري( ) Sم,ي ريزيم. – 7دقيقا ً 6ميل,ي ليت,ر كلروفرم ب,ه بش,ر Tو 5.5ميل,ي ليت,ر ب,ه بش,ر Sاضاف,ه كرده كامالً مخلوط مي نمائيم. – 8به هر يك از دو بشر دو ميلي ليتر انيدريد استيك اضافه و مخلوط مي نمائيم. – 9ب,ه ه,ر يك از دو بش,ر 0.1ميل,ي ليت,ر اس,يد س,ولفوريك خال,ص م,ي افزائيم و كامالً مخلوط مي نمائيم و. بشره,ا را براي مدت 5دقيق,ه در حرارت 25درج,ه (حرارت آزمايشگاه) و در محل تاريكي قرار مي دهيم تا رنگ کامل شود . اندازه گيري دانسيته اپتيك ومحاسبه – 1طول موج 660ميلي مو را نتخاب می کنیم. – 2با يك لوله حاوي كلروفرم (بالنك) جذب را صفر مي‌ کنیم. – 3دانسيته اپتيك محلولهاي بشر Tو Sرا به ترتيب مي خوانیم. -4درصد کلسترول را محاسبه می کنیم آنزيم ها آنزيم ها يا كاتاليزورهاي حياتي ساختماني پروتئيني دارند. بعضي آنزيمها از پروتئين هاي ساده تشكيل شده اند (مانند پپسين) . ولي اكثر آنزيمها از پروتئين هاي تركيبي به وجود آمده اند؛ ساختمان آنها از دو قسمت تشكيل شده است: يكي قسمت پروتئيني به نام آپوآنزيم ، و یک قسمت غيرپروتئيني بنام ريشه پروستتيك كه به آن كوآنزيم گفته مي شود. واكنش هاي عمومي آنزيم عوامل موثربر سرعت واكنش آنزيم ها : – 1درجه حرارت – 2همبستگي فعاليتهاي آنزيمی با غلظت سوبسترا و غلظت آنزيم. PH – 3روي فعاليت آنزيمها – 4اختصاصي بودن عمل آنزيمها – 5اثر مهار كننده ها و مواد ضد عفوني كننده. – 1بررسی اثر درجه حرارت روي فعالیت آنزيمها در هر يك از 4لوله آزمايش 5ميلي ليتر شير (سري .)A در ه,ر يك از 4لول,ه ديگ,ر (س,ري ( Bيك ميل,ي ليت,ر محلول 0.5درص,د Rennin مي ريزيم. از هر سري يك لوله انتخاب مي كنيم. دو لوله محتوي شير و رنين را به ترتيب لوله هاي اول را در بشر آب و يخ لوله هاي دوم را در حرارت آزمايشگاه لوله هاي سوم را در آب 37تا 40درجه و لوله هاي چهارم را در آب 80درجه قرار مي دهيم. ادامه بررسی اثر دما روی فعالیت انزیم بعد از چند دقيقه محلول رنين را به لوله هاي محتوي شير نظير خود مي افزائيم . فوراً مخلوط كرده و زمان را يادداشت مي كنيم. لخته شدن شير را در لوله ها به دقت تحت نظر قرار مي دهيم. بع,د از يك دقيق,ه 5 ،دقيق,ه 10 ،دقيق,ه و 30دقيق,ه تغييرات حاص,له در لول,ه ه,ا را بررسي ميكنيم. در كدام يك از لوله ها انعاقد انجام نگرفته است .بهترين درجه حرارت براي فعالیت رنين رامشخص می کنیم.  – 2فعاليت آنزيم الف ) اثر غلظت آنزيم در س,ه لول,ه آزمايش ب,ه ترتيب 1ميل,ي ليت,ر 0.5ميل,ي ليت,ر 0.25 ،ميل,ي ليت,ر رنين 0.2درصد مي ريزيم. سپس به لوله دومي 0.5و به سومي 0.75ميلي ليتر آب اضافه مي كنيم. در سه لوله ديگر و در هر يك 5ميلي ليتر شير مي ريزيم.  لوله هاي محتوي آنزيم و شير را در حمام 37تا 40درجه قرار مي دهيم. پ,س از چن,د لحظ,ه ه,ر يك از لول,ه هاي شير را ب,ه محتوي ه,ر لول,ه آنزيم اضاف,ه م,ي كنيم. لوله ها را مخلوط كرده و زمان را يادداشت مي كنيم. ‏ زمانی را که طول مي كشد تا هر يك از لوله ها منعقد گرددتعیین کنید.. ب) اثر غلظت سوبسترا در سه لوله آزمايش به ترتيب 10و 8و 6ميلي ليتر شير ميريزيم. ‏ هر يك را با آب به 10ميلي ليتر مي رسانيم. ‏ لوله ها را در حمام 37تا 40درجه قرار مي دهيم. ‏ به هر لوله 2ميلي ليتر رنين 2/0اضافه مي كنيم. ‏ زماني كه جهت انعقاد هر لوله الزم است يادداشت مي كنيم. از اين دو آزمايش (الف – ب) چه نتيجه اي مي گيريم؟  – 3اثر PHروي فعاليت آنزيمها با جويدن پارافين جامد مقداري از بزاق خود را جمع آوري کنید. سپس آنرا با كلرور سديم %1تا 5بار رقيق کنید. در چهار لوله آزمايش به ترتيب: در اولي 2ميلي ليتر اسيد كلريدريك 0.4درصد((،PH=1 در دومي 2ميلي ليتر اسيد الكتيك 0.1درصد(،)PH=5 در سومي 2ميلي ليتر آب مقطر()PH=7 و در چهارمي 2ميلي ليتر كربنات سديم )PH=9( %1بریزید. ادامه آزمایش اثر PHروی فعالیت آنزیم به هر لوله 2ميلي ليتر نشاسته ( %1پخته) ؛ ‏ 2ميلي ليتر بزاق رقيق شده اضافه کنید . لوله ها را خوب مخلوط كرده و در حمام 37تا 40درجه قراردهيد. پس از 15دقيقه لوله ها را از حمام بيرون آورده ؛ در مورد هر يك آزمايش يد را انجام دهید. ادامه آزمایش اثر PH در روي يك كاش,ي س,فيد(يا 4لول,ه آزمايش) 4قطره يد ب,ه طور جداگان,ه قرار دهید. . ازهر لوله يك قطره نشاسته به قطره يد مربوطه اضافه کنید. ايجاد رنگ آبي دليل بر وجود نشاسته هضم نشده است. در كدام لوله هضم نشاسته بهتر صورت گرفته است ؟ بهترين را PHمشخص كنيد.  – 4اختصاصي بودن عمل آنزيمها هر آنزيمي روي سوبستراي مشخصي عمل مي نمايد. اوره آز روي اوره اثر كرده و آمونياك آزاد مي كند . در حاليكه روي تيواوره كه از نظر فرمول كامالً شبيه اوره مي باشد اثري ندارد اوره ( 2 2 ‏CO(NH تیواوره CS(NH2)2 آزمایش اختصاصی بودن آنزیمها در دو لول,ه آزمايش در اول,ي 5ميل,ي ليت,ر اوره %1و در ديگري 5ميل,ي ليت,ر تيو اوره %1مي ريزيم. به هر دو لوله چند قطره فنل رد و سپس 1ميلي ليتر اوره آز فعال اضافه مي كنيم لوله ها را در حمام آب 37تا 40درجه قرار مي دهيم. پس از 15دقيقه تغيير رنگ را در دو لوله مشاهده مي كنيم. فنل رد در محيط اسيدي زرد رنگ و در محيط قليايي قرمز رنگ است. از اين آزمايش چه نتيجه اي مي گيريم؟  – 5اثر مهار كننده ها و ضد عفوني كننده ها در چهار لوله و در هر يك 5ميلي ليتر شير مي ريزيم . سپس 7تا 8قطره ؛ تولوئن به لوله اول كلروفرم به لوله دوم ،فنل %5به لوله سوم و آب مقطر به لوله چهارم اضافه مي كنيم . لوله ها را در حمام آب 37تا 40درجه قرار مي دهيم . سپس به هر يك از چهار لوله يك ميلي ليتر رنين 0.2درصد اضافه مي كنیم. پ,س از 5دقيق,ه انعقادرا در لول,ه ه,ا نس,بت ب,ه لول,ه كنترل مورد توج,ه قرار م,ي دهيم. انعقاد در كدام يك از لوله ها صورت نمي گيرد؟ چرا؟ منابع فارسی -1شامل,و،یوس,ف.کامیاب،ثریا.آموزش آزمایشگاه,ی بیوشیم,ی عموم,ی،مرک,ز نش,ر دانشگاهی تهران .1361، -2هاشم,ی تنکابن,ی،س,ید ابراهیم.آزمای,ش روغنه,ا وچربیه,ا،مرک,ز نش,ر دانشگاهی ،چاپ اول . 1364، -3مورای ،روبرت,.ک،گرانر.داری,ل ،ک.ترجم,ه مل,ک نی,ا ،ناص,ر.شهبازی ،پرویز.بیوشیمی هارپر.جلد اول .جلد دوم .نشر شهر آب. 1380، - 4دانیال زاده،آلبرت.اصول بیوشیمی.جلد اول.نشر دانشگاهی .چاپ چهارم. 1372. -5رض,ا،رضایی .روش های نوی,ن آزمایشگاه,ی ،جل,د اول.انتشارات دفتر مرکزی جهاد دانشگاهی. 1364. منابع انگلیسی Lehninger,Albert.Principles of Biochemistry Worth -6 publisher,Inc.First Edition . 1982 Bishop,Nichael L.Duben-von Laufen Janet L. Clinical-7 .Chemistry.J.B.Lippincott Company ,1985 .Tietz Norbert W.Fundamentals of clinic Chemistry-8 Title Lorem ipsum dolor sit amet,  consectetuer adipiscing elit. Vivamus et magna. Fusce sed sem sed magna .suscipit egestas Lorem ipsum dolor sit amet,  consectetuer adipiscing elit. Vivamus et magna. Fusce sed sem sed magna .suscipit egestas