کنترل کیفی آزمایش های سرولوژی

کنترل کیفی آزمایش های سرولوژی

اسلاید 1: کنترول کیفی آزمایشهای سرولوژیبنا م خداوند بخشنده مهربان

اسلاید 2:

اسلاید 3: 1. Labeled Immunoassay Enzyme Linked Immuno Sorben Assay ( ELISA ) Radio Immuno Assay ( RIA ) Immuno Flurescent Antibody Technique ( IFAT ) Electrochemilominsance ( ECL )2.Non Labeled Immunoassay. Agglutination tests Precipitation tests Fluccolation tests

اسلاید 4: Agglutination ReactionsDirect agglutinationPassive agglutinationAgglutination inhibitionAb + particulate AgAgglutination (clumping)

اسلاید 5: Direct agglutinationExample # 2 – Using bacteria (Ag) looking for Ab in serum.

اسلاید 6: Indirect or Passive agglutinationResults when inert particles are coated with soluble Ags which may react with Ab. Particles include latex, rbc’s, charcoal, etc.Example – Ag attached to latex particle (known) + serum looking for (unknown) Ab. If Ab present, you get visible agglutination.

اسلاید 7: Reverse passive agglutinationInvolves the adherence of Ab to inert particles which can then be used to detect the presence of Ag.Example – latex particle coated with Ab (known) + serum looking for (unknown) Ag. If Ag present, then you get visible agglutination. (CRP test)

اسلاید 8: Agglutination inhibition - pos

اسلاید 9: Agglutination inhibition - neg

اسلاید 10: عوامل موثر در واکنشهای آگلوتیناسیونPH

اسلاید 11: عوامل موثر در واکنشهای آگلوتیناسیون Ionic strengthقدرت یونی محیط در حقیقت مولاریته نمکهای محلولی است که آنتی زن و آنتی بادی در آن محلول قرارمیگیرند

اسلاید 12: Yعوامل موثر در واکنشهای آگلوتیناسیونYYYYYYYYYYYYYYYYYAmount of latticeexcess antibodyexcess antigenLATTICEDilution of antibodies

اسلاید 13: نحوه جلوگیری از منفی کاذب در آزمایش CRP CRP Serum 10 uL Serum 50 uL < 6 mg / L _ _ 6 – 20 mg /L _ + 20 – 200 mg/L + + > 200 mg/L + _

اسلاید 14: عوامل موثر در واکنشهای آگلوتیناسیون TemperatureCold agglutinin test

اسلاید 15: عوامل موثر در واکنشهای آگلوتیناسیون Incubation time

اسلاید 16: Direct Coombs’ Test

اسلاید 17: Differential DiagnosisAnti-IgG Positive + Anti-C3 Negative -Antibodies to Rh protein, Drug induced warm AIHA (penicillin, methyldopa)Anti-IgG Positive + Anti-C3 Positive + SLE, idiopathic warm AIHA, rarely drug associated3. Anti-IgG Negative - Anti-C3 Positive +Cold agglutinin disease, Paroxysmal cold hemoglobinuria, rarely warm AIHA if low-affintiy IgG

اسلاید 18: عوامل موثر در تفسير نتايج آزمايشهاي سرولوژيسن و سابقه قبلي بيمار : تيتر آنتي بادي بيشتر از افراد تازه بيمار شده.آيا بيمار تاكنون واكسينه شده است: تيتر بالا مربوط به واكسني كه تازه دريافت كرده ، اشتراك آنتي ژن با عامل بيماري جديد، به همان بيماري كه واكسينه گشته است.وضعيت جغرافيائي محيط: محل شايع و يا آندميك در اين مناطق حد نصاب تيتر قابل قبول براي آن بيماري خاص بالاتر از ساير مناطق مي باشد.شغل بيمار: تماس مكرر تيتر قابل قبول براي آنها با ساير افراد متفاوت است.موقع بيماري علائم+ افزايش تيتر قرابت يا تشابه آنتي ژني: افزايش غير معمول آنتي بادي

اسلاید 19: ...نقص در سيستم ايمني بيمار : كاهش گاماگلوبولين ارثي يا اكتسابي يا بيماري ثانويه _لوسمي –تومورپيشرفته نتايج آزمايشات منفي موسسه توليد كننده آنتي ژن: حد نرمال و عدم فريز آنتي ژن ها مصرف دارو: تجويز بي موقع- مصرف كورتون-پرتو درماني مرحله بيماري : اكثر در اواخر هفته دوم بيماري ظاهر مي گردندخطا در آزمايشگاه : جواب آزمايش –پي پت آلوده – قرائت نتيجه – مواد فاسد و آلوده

اسلاید 20: Reported problemsSample Equipment MethodsPersonnel AssayTrouble Shooting

اسلاید 21:

اسلاید 22:

اسلاید 23: بررسی کيفيت کيت ها TP Sensitive = ------------- *100 TP+FN TN Specificity = --------------* 100 TN+FP TP Predictive valve of positive= -----------* 100 TP+FP TNPredictive valve of Negative= ------------* 100 TN+FN

اسلاید 24: Variables that affect the quality of resultsThe educational background and training of the laboratory personnelThe condition of the specimensThe controls used in the test runsReagentsEquipmentThe interpretation of the resultsThe transcription of resultsThe reporting of results

اسلاید 25: TESTPositiveNegative455545abcdPresentAbsentDISEASEPositive predictivevalue a = 45 = 90%a+b 50Prevalence = 50%Negative predictivevalue d = 45 = 90%c+d 50Sens = 45/50i.e. 90%Spec = 45/50i.e. 90% The Impact of Prevalence on Predictive Value

اسلاید 26: Different of Cold Autoantibodies Primary cold Agglutinin diseaseSecondary cold autoantibodiesParoxysmal cold HemoglobinuriaIgClonalityDATHemolysisTarget RBC antigenIgMMonoclonalC3Chronic ,mildIIgMMono/polyclonalC3Self-limited,mild to severeI,iIgGPolyclonalC3Episodic, self-limtied: mild to severeP

اسلاید 27: Cold Auto Antibodies (IgM)IgM directed against ‘Antigen I’ on red cellsSeen inElderlyLymphomasInfections - EBV, mycoplasmaDAT (Coombs) - + for C3, negative for IgGTreat - stay warm

اسلاید 28: Warm AIHA - TreatmentFolic acid supplementationSteroidsSplenectomyImmunosuppressivesCyclophosphamideAzathioprineIntravenous immune globumin (IVIG)Plasmapheresis

اسلاید 29: Differential DiagnosisAnti-IgG Positive + Anti-C3 Negative -Idiopathic Warm AIHA, Drug induced warm AIHA (penicillin, methyldopa)Anti-IgG Positive + Anti-C3 Positive + SLE, idiopathic warm AIHA, rarely drug associated3. Anti-IgG Negative - Anti-C3 Positive +Cold agglutinin disease, Paroxysmal cold hemoglobinuria, rarely warm AIHA if low-affintiy IgG

اسلاید 30: YAntibody and antigen can form a latticeYYYYYYYYYYYYYYYYYAmount of latticeexcess antibodyexcess antigenLATTICEDilution of antibodies

اسلاید 31: c. Applications These include detection of anti-rhesus factor (Rh) antibodies. Antibodies to the Rh factor generally do not agglutinate red blood cells. Thus, red cells from Rh+ children born to Rh- mothers, who have anti-Rh antibodies, may be coated with these antibodies. To check for this, a direct Coombs test is performed. To see if the mother has anti-Rh antibodies in her serum an Indirect Coombs test is performed. 

اسلاید 32: patient red cells+AHG=agglutination

اسلاید 33: Flocculation testsFlocculation tests for Ab detection are based on the interaction of soluble Ag with Ab, which results in the formation of a precipitate of fine particles. (Ag consists of lipid type particles)Examples VDRL & RPR’s. (See syphilis tests – to follow)

اسلاید 34: Concentration of Ag and Ab also affects agglutination reactions, both the first and second stages.

اسلاید 35: Affinity = ∑ attractive and repulsive forcesAbAgHigh AffinityAbAgLow AffinityAffinityStrength of the reaction between a single antigenic determinant and a single Ab combining site

اسلاید 36: AvidityThe overall strength of binding between an Ag with many determinants and multivalent AbsYKeq =104AffinityY106AvidityYYYYY1010Avidity

اسلاید 37: Cross ReactivityThe ability of an individual Ab combining site to react with more than one antigenic determinant.The ability of a population of Ab molecules to react with more than one AgAnti-A AbAg AAnti-A AbAg BShared epitopeAnti-A AbAg CSimilar epitopeCross reactions

اسلاید 38: آب مصرفي آزمايشگاه نوع 1: هدايت الكتريكي 1o. < ميكروزيمنس بر سانتي متر مكعب جهت كشت سلولي تهيه Standard نوع 2: هدايت الكتريكي 1 < ميكروزيمنس بر سانتي متر مكعب براي آزمايشات نوع 3 : هدايت الكتريكي 10 < ميكروزيمنس بر سانتي متر مكعب جهت شست وشو و غيره دستگاه مربوطه : Conductometer جهت مقاومت هر چه مقاومت بيشتر باشد آب خالص تر است يعني آبي كه 10 مگااهم مقاومت ، داشته باشد خالص تر است. از 5 اهم يا كمتر

اسلاید 39: كنترل آب مقطرA : يك قطره روي لامB : جهت تشخيص كلر+ كمي نيترات نقره آب آلوده به كلر كدر میشود. C : مواد آلي در يك بالن ژوژ 500 ميلي ليتري 1CC ، SO4H2 غليظ + 3% از محلول پر منگنات پتاسيم 10/1 نرمال اگز بعد از 1 ساعت رنگ ثابت ماند آب د يونيزه است ولي اگر رنگ پر منگنات از بين رفت آب آلوده به مواد آلي است.

اسلاید 40: سانتريفورژنوع 1: سطح رسوب افقي است، عيب گرما توليد مي كند.نوع 2: سطح رسوب مايل زاويه 40-25 درجه سرعت زيادتر از نوع1 و زودتر مي ايستد.نوع 3: اولترا سانتريفوژ ضمناً سانتريفوژ با دستگاه تاكامترهر 3 ماه يكبار چك مي شود و تا 5% خطا اشكال ندارد.

اسلاید 41: برنامه هاي اطمينان از كيفيتتست بايد داراي صحت و دقت كافي باشد.روش كار –سرعت – هزينه –اهميت و نقش آزمايش در كارهاي كلينيكي. جهت رسيدن به كيفيت مطلوب بايستي با پزشك ارتباط برقرار نمود .آيا نتيجه تست صحيح است.آيا وقتي تكرار شود نتيجه مناسبي بدست مي آيد.آيا براي استفاده پزشك در درمان از سرعت كافي برخوردار است.آيا هزينه و استفاده بيمار جهت درمان منطقي است .

اسلاید 42: منابع خطا فردي –تجربه –آموزش – شرايط استخدامي عوامل محيطي فضاي كار – نور – تهويه – دما- سروصدا زياد- عدم ايمنينمونه ها روش و زمان نمونه برداري –انتقال –ذخيره-آماده سازيحمل ونقلمواد آزمايشگاهي –كيفيت مواد- ظروف شيشه اي –رنگهاروش انجام تست (آسان –سخت) دستگاه : غير استاندارد-نتايج غيرققابل اطمينان مي دهندقرائت آزمايش: قرائت عجولانه گزارش نتيجه : نظم –تكرار

اسلاید 43:

اسلاید 44:

اسلاید 45: Direct agglutinatio