کنترل کیفی در میکروب شناسی

کنترل کیفی در میکروب شناسی

اسلاید 1: کنترل کیفی در میکروب شناسی رشیدی-سوپروایزر بیمارستان باهنر

اسلاید 2:

اسلاید 3:

اسلاید 4: سه مرحله از فعاليت هايي كه نتايج روشهاي آزمايشگاهي را تحت تاثير قرار مي دهند

اسلاید 5: نكات مورد توجه در هنگام دريافت نمونه آيا نمونه معرفي كننده شرايط عفونت ميباشد آيا در ظرف مناسبي جمع آوري شده است آيا از ورود فلور نرمال جلوگيري شده است آيا نمونه در زمان مناسبي گرفته شده و در محيط ترانسپورت قرار داده شد يك نمونه غير قابل قبول داراي خصوصيات زير است 1-نمونه فاقد مشخصات است. 2-قسمت خارجي ظرف نمونه آلوده ميباشد. 3- نمونه در ظرف نامناسبي قرار دارد. 4- فاصله زيادي بين زمان نمونه برداري و تحويل آن به آزمايشگاه وجود دارد. 5-ميزان نمونه كافي نيست.

اسلاید 6: ميزان قابل قبول در ارزيابي موارد ذكر شده بصورت زير مي باشد 1) 5 درصد ويا كمتر از كشتهاي خون بايد فقط شامل يك نمونه باشد. 2) 3 درصد ويا كمتر از كشت هاي خون مي تواند حاوي فلور نرمال پوست باشد 3) 10 درصد وياكمتراز نمونه هاي ادرار بايد داراي كلني كانت در رنج (2^10- 4^10) بعنوان انديكاتور آلودگي داشته باشند. 4) بيشتر از 3 كشت خون در يك دوره 24 ساعته بيش از سه نمونه مدفوع برای آزمايش انگل ويا نمونه گيري مجدد از هر نوع نمونه براي كشت نبايد شامل بيش از 2% همه موارد باشد . 5) حجم خون كمتر از ميزان استاندارد در 5% بطري هاي كشت خون وجود داشته باشد .

اسلاید 7: امكانات و تسهيلات مورد توجه در آزمايشگاه 1- تهويه و درجه حرارت و رطوبت 2- روشنايي 3- فضاي آزمايشگاه 4- وسايل : ترازو PH متر انكوباتور CO2 دما سنج فريزر هود وسايل شيشيه اي پلاستيكي

اسلاید 8: كاليبراسيون ميزان الحرارهThermometer calibrationنحوه نگه داري: قرار دادن در گليسرولنحوه كنترل بر اساس دستور العمل NBS (NIST)2 تا 8 درجه سانتي‌گراد، 20- درجه سانتي گراد، 37 درجه سانتي گراد، 56 درجه سانتي گرادمعيار غيرقابل قبول: اختلاف 1 درجه سانتي گراد ≤نحوه كاليبر كردن:1 – قرار دادن ترمومتر استاندارد و ساير ترمومترها در يخ2 – مقايسه قرائت عدد صفر ترمومتر استاندارد با ساير ترمومترها3 – انجام اين روش براي درجه حرارت هاي 37 و 56 درجه سانتي گراد4 – ثبت درجه حرارت بر روي كاغذ لگاريتمي

اسلاید 9: كنترل كيفي وسايل

اسلاید 10: ادامه جدول - كنترل كيفي وسايل

اسلاید 11: كنترل كيفي محيط كشت الف – قبل از ساختتاريخ مصرف محيط كشتثبت زمان دريافت و كارخانه سازندهتاريخ استفادهبررسي ظاهر محيطنگه‌داري محيط در حرارت مساوي يا كمتر از 25 درجه سانتي‌گرادب – هنگام ساختترازوي دقيقنكات نوشته شده بر روي قوطيعدم مخلوط كردن محيط‌هاي جديد و قديمآب‌كشي ارلن و ساير ظروف با آب مقطراستفاده از ارلن با ظرفيت بيشتر از نصف حجم محيطعدم حرارت‌دهي زيادبررسي پليت‌ها

اسلاید 12: كنترل كيفي محيط كشت ج – بعد از ساخت و هنگام مصرفكنترل pHاستريل بودن محيطامكان رشد ميكروارگانيسم مورد نظرايجاد ويژگي مورد نظرعدم وجود شيار در محيطارتفاع مناسب محيطعدم انجماد محيطآلودگي

اسلاید 13:

اسلاید 14: كنترل كيفي محيط از نظر رشد باكتري مورد نظر(مغذ ي بودن )تهيه سوسپانسيون از رشد تازه باكتري در سرم فيزيولوژي استريلمقايسه كدورت با استاندارد كدورت 5/0 مك فارلندتهيه رقت 1/100از سوسپانسيون و برداشت 10ميكرو ‌ليتر و كشت بر روي پليت و شمارش كلنينتايج مورد انتظار: رشد مناسب باكتري104× 2-1كنترل كيفي محيط از نظر خصوصيات ممانعت‌كنندگيتهيه سوسپانسيون باكتري در سرم فيزيولوژيتهيه رقت 1/10 و كشت 0/01ميلي‌ليتر بر روي پليتنتايج مورد انتظار: ممانعت از رشد باكتري مورد نظر 105× 2-1كنترل كيفي محيط‌هاي ساخته شده در لوله آزمايش0/01 ميلي‌ليتر از سوسپانسيون باكتري در هر لوله كشت شود.نتايج مورد انتظار:‌ مشاهده واكنش منفي و يا مثبت با باكتري‌هاي مورد نظركنترل كيفي محيط‌هاي كشت با هر محيط جديد انجام مي‌شود.

اسلاید 15: نحوه نگه‌داري محيط‌هاي كشت پس از ساختنگه‌داري در يخچال 8-2 درجه سانتي‌گرادمحيط تايوگليكولات براث در دماي محيطپليت‌ها در صورت نگه‌داري در كيسه‌هاي پلاستيك تا 4 هفته قابل مصرف هستند.لوله‌هاي در پنبه‌اي تا 3 هفته (قطر پنبه زياد باشد)لوله‌هاي در پيچ‌دار تا 3 ماه

اسلاید 16: رطوبت Moistureدر صورت خيس بودن سطح آگار در زمان مصرف، ظرف پتري را به مدت 30- 10 دقيقه در انکوباتورc °35 و يا با درپوش نيمه باز، زير هود كلاس IIدر حرارت اتاق قرار دهيد تا رطوبت اضافی آن تبخير گردد. براي تلقيح باکتری، سطح محيط كشت بايد مرطوب ولی فاقد قطرات آب بر روی آگار يا درپوش ظرف پتري باشد.

اسلاید 17: ديسك هاي ضدميكروبي Antimicrobial Disksذخيره سازي ديسک های ضدميكروبي (Storage of Antimicrobial Disks)جهت نگهداری ديسک ها توجه به شرايط زير ضروری است:ديسک ها را تا زمان انقضاء بايد در يخچال (دمای 8 درجه سانتی گراد يا کمتر) يا در فريزر (14- درجه سانتی گراد يا کمتر) نگهداری کنيد. ديسک ها نبايد در فريزرهايي با قابليت ذوب يخ خود به خودی، نگهداری گردند. بسته های باز نشده ديسک های كلاس بتالاکتام بايد در فريزر نگهداری شوند و به مقدار كم و مصرف حداكثر يک هفته، از فريزر درآورده شوند و در يخچال نگهداری گردند. بعضی آنتی بيوتيک های حساس (مانند ايمی پنم، سفاکلر (cefaclor) و ترکيبات حاوی کلاولانيک اسيد) در صورت نگهداری در فريزر تا زمان مصرف، از پايداری بيشتری برخوردار خواهند بود.بسته هاي باز نشده حاوی ديسک را 2-1 ساعت قبل از مصرف، از يخچال يا فريزر خارج كنيد تا به دمای اتاق برسد. اين کار تماس هوای گرم با ديسک يخ زده و متعاقبا تغليظ دارو در سطح ديسک را به حداقل مي رساند.

اسلاید 18: پليت را بر روی درپوش آن برگردانده، ظرف مدت 15 دقيقه از ديسک گذاری به انکوباتور co 2 ± 35 منتقل نماييد. دمای انکوباسيون بالاتر ازc o 35 ممکن است مانع از رشد استافيلوکک های مقاوم به متي سيلين گردد. به استثنای گونه هموفيلوس، نيسريا مننژيتيديس و استرپتوکک ها از قرار دادن پليت حاوی ديسک در انکوباتور CO2 دار خودداری نماييد، چون CO2 قطر هاله عدم رشد برخی دارو ها را به طور مشخصی تغيير مي دهد

اسلاید 19:

اسلاید 20: كنترل كيفي محيط‌هاي كشت معمول با باكتري مورد نظر و نتايج مورد انتظار

اسلاید 21: كنترل كيفي محيط‌هاي كشت معمول با باكتري مورد نظر و نتايج مورد انتظار

اسلاید 22: كنترل كيفي محيط‌هاي كشت معمول با باكتري مورد نظر و نتايج مورد انتظار

اسلاید 23: كنترل كيفي محيط‌هاي كشت معمول با باكتري مورد نظر و نتايج مورد انتظار

اسلاید 24:

اسلاید 25:

اسلاید 26:

اسلاید 27:

اسلاید 28: 1. کهنه بودن لوگل علتهای 2. داغ بودن لوپ خطا در 3. کشت کهنه لام گرم 4. اثر آنتی بیوتیک 5. ضخیم بودن لام 6. افزایش زمان فیکساسیون و نقش الکل در منافذ پپتیدوگلیکان 7. کافی نبودن زمان رنگ بر

اسلاید 29: كنترل كيفي رنگ‌ها و معرف‌هامحيطمنفيمثبتمعرف يا رنگزمان كنترلBA انتروكوك فكاليساسترپتوكوك پيوژنديسك باسيتراسينهر ويال جديدTyptic soy Agar (T.S.A)انتروككاستافيلوكوك ارئوسكاتالاز (آب اكسيژنه 3%)هر بار استفادهT.S.Aاستافيلوكوك اپيدرميديساستافيلوكوك ارئوسكوآگولاز (پلاسما)هر بار استفادهT.S.Aكلبسيلا پنومونيهاشريشياكليبتاگلوكورو نيدازهر بار استفادهدر لام به صورت مخلوط ديده مي‌شوداشريشياكلياستافيلوككرنگ‌آميزي گرمهر هفته و هنگام ساختT.S.IسالمونلاE. ColiONPG هر ويال جديدB.Aاسترپتوكك ويريدنساسترپتوكك پنومونيهديسك اپتوچينهر ويال جديدT.S.A E. coliPseudomonasاكسيدازهر ويال جديدT.S.Aهموفيلوس آنفلوانزاهموفيلوس پارا آنفلوانزا(ديسك يا نوار)فاكتور Vهر ويال جديد

اسلاید 30: كنترل كيفي رنگ‌ها و معرف‌ها محيطمنفيمثبتمعرف يا رنگزمان كنترلT.S.Aهموفيلوس آنفلوانزا(ديسك يا نوار)فاكتور XVهر ويال جديدگسترش تهيه شده از خلطباكتريهاي مخلوط با انواع غير اسيدفاستمايكوباكتريوم توبركلوزيسرنگ آميزي Ziehl-neelsenهر بار استفادهTSABAباكتري مورد نظرباكتري مورد نظرآنتي سرمهر ويال جديد – ماهيانه و هر 6 ماهBAEnteroccusGroup B streptoccusCAMPهر بار استفادهSIMKlebsiellaE. Coliكوواكسهر بار استفادهMRVPKlebsiellaE. ColiE. ColiKlebsiellaMRVPهر بار استفادهنيترات آگار و يا براتAcinetobecterE. Coliنتيراتهر بار استفاده

اسلاید 31: نحوة نگهداري باكتري‌ها الف – طولاني مدت1 – استفاده از گليسرول در 20- درجه سانتي‌گراداز كشت خالص باكتري سوسپانسيوني در گليسرول استريل تهيه شده و به ميزان 2-1 ميلي‌ليتر در لوله‌هاي كوچك در پيچ‌دار تقسيم مي‌شود و در 20- درجه سانتي‌گراد نگه‌داري مي‌گردد. تجديد كشت بعد از 18-12 ماه صورت مي‌گيرد.2 – استفاده از روغن معدني و نگهداري در دماي آزمايشگاهمحيط تريپتيك سوي‌آگار (TSA) به صورت سطح شيب‌دار كم در لوله تقسيم مي‌شود. در مورد باكتري‌هاي سخت رشد، خون و يا خون حرارت داده شده اضافه مي‌شود. پس از كشت بر روي سطح محيط و رشد باكتري، روغن معدني و يا پارافين كه در170 درجه سانتي‌گراد به مدت يك ساعت استريل شده به ارتفاع يك سانتي‌متر به سطح محيط اضافه مي‌شود. تجديد كشت بعد از 12-6 ماه انجام مي‌گيرد. (كشت در دماي آزمايشگاه نگهداري مي‌شود).3 – كشت عمقي و نگه‌داري در دماي آزمايشگاهجهت استافيلوكك‌ و انتروباكترياسهنوع محيط TSA نحوه كشت عمقي بدون سطح شيب‌دار (كشت مجدد بعد از يك سال)

اسلاید 32: 4 – كشت عمقي در محيط CTAنگهداري نايسريا و استروپتوككمحيط به صورت عمقي در لوله در پيچ دار نگهداري نايسريا در 35 درجه سانتي‌گرادتجديد كشت هر دو هفته يك باراسترپتوكك در دماي اتاق هر ماه تجديد كشت شودمحيط Cooked meat broth براي بي‌هوازي‌هانگهداري در دماي آزمايشگاهتجديد كشت هر دو ماه يك بارب – روش نگهداري كوتاه مدت1 - كاربرد جهت باكتريهاي روتين آزمايشگاه (باكتري‌هاي سريع‌الرشد)نوع محيط TSA با سطح شيبدار نگهداري در يخچالتجديد كشت هر دو هفته يك بار

اسلاید 33: 2 – استرپتكوكك‌هانوع محيط بلادآگار در لوله با سطح شيب‌دارپس از رشد باكتري نگهداري در يخچالتجديد كشت هر دو هفته يك بار3 – نايسريا مينجاتيديس و هموفيلوسنوع محيط شكلات آگارتجديد كشت كمتر از يك هفتهنگهداري در دماي آزمايشگاه4 – نايسريا گونورهنوع محيط شكلات آگارنگهداري در دماي 35 درجه سانتي‌گرادزمان تجديد كشت هر دو روز يك بار

اسلاید 34:

اسلاید 35:

اسلاید 36:

اسلاید 37: Rapid Catalase Test for Enterobacteriaceae1-Touch the center of well-isolated young colony (18-24 hrs.) on SBA or MacConkey with a wooden stick to transfer to a clean ,dry glass slide.Dose not test from Muller-Hinton Agar (MHA)Place 1 drop of 3% H2O2 and observe immediately bubbles

اسلاید 38: Citrate Utilization Test SimmonsStreak slant back & forth with light inoculum picked from the center of a well-isolated colonyPlace cap loosely on tube , aerobic environmentIncubation at 35°C to 37°C for up to 4-7 daysPositive : growth + blueNegative : No growth + green

اسلاید 39: Citrate Utilization Test SimmonsStreak slant back & forth with light inoculum picked from the center of a well-isolated colonyPlace cap loosely on tube , aerobic environmentIncubation at 35°C to 37°C for up to 4-7 daysPositive : growth + blueNegative : No growth + green

اسلاید 40: Citrate Utilization Test SimmonsAgar Slant Bromthymol blue pH 6.8 green (negative) to blue pH > 7.6 (positive) Inspect agar for evidance of freezing ,cracks , dehydration , bubbles ,before use and discard any tube that Blue

اسلاید 41: Citrate Utilization Test SimmonsDo not inoculate from broth cultures , due to carryover of media To avoid false-positive reactions , use a light inoculum to prevent carry over of substance from previous media Luxuriant growth without color change may indicated a positive test. if agar dose not turn blue on further incubation ,test should be repeated with less inoculum

اسلاید 42: روش کار : باکتری را در روی سطح شیب دار محیط کشت دهید ودرب لوله را محکم نبندید. لوله را در 35 درجه سانتی گراد بمدت 24 ساعت تا 4 روز انکوبه کنید.سیترات مثبتسیترات منفی

اسلاید 43: Spot Indol TestColonies from SBA & rub on filter paperTryptophanase breaks down tryptophan to realease indole 1% paradimethylaminocinnamaldehydeBlue color within 30 sec

اسلاید 44:

اسلاید 45: IMViC MR VPIncubate for minimum 48 hrsIf results are equivocal at 48 hrs repeat test for 4 to 5 daysMR : 5 to 6 drop of MR reagent per 5 ml brothVP : 6 drop alpha naphtol & 2 drop KOH

اسلاید 46:

اسلاید 47: روش کار الف) در 5 میلی لیتر محیط MR-VP کشت دهید وبمدت 48 ساعت در 35 درجه سانتی گراد انکوبه کنید.ب) 5/2 میلی لیتر آن را به لوله باریک منتقل کنید.ج) 5 قطره از معرف متیل رد را به آن اضافه کنید.واکنش مثبت با رنگ قرمز واکنش منفی با رنگ زرد مایل به نارنجی

اسلاید 48: Lysine Iron Agar (LIA)

اسلاید 49:

اسلاید 50:

اسلاید 51:

اسلاید 52: Presumptive report: Gram-Positive Cocci resembling Staphylococci

اسلاید 53: Serotyping / SerogroupingTyping Should be performed from a non-sugar containing medium ,such as 5% sheep blood agar (BAP) or LIAUse of sugar containing media , such as MacConkey or TSI agars , can cause the organism to autoagglutinate

اسلاید 54: روش کار: - با استفاده از یک آنس از مرکز یک کلنی ایزوله برداشت کنید.نوک آنس را درداخل قسمت پائین لوله وارد کنید و بعد در سطح شیب دار کشت دهید.درب لوله را محکم نبندید.در35 درجه بمدت 18تا 24ساعت انکوبه کنید.

اسلاید 55:

اسلاید 56: نکات قابل توجه در مورد ساخت محیط محیط XLD باید قرمز روشن باشد. اگر محیط موقع ساختن زیاد حرارت ببیند، سبب رسوب سدیم دزاکسی کولات می گردد که باعث می شود کلنی ها کوچکتر، تیره تر ظاهر شوند.