روش تیتراسیون فرمل

صفحه 1:
عنوان ارائة : ۱۱ oul sie ig ارائه ذهنده : Se Ncw - 5 

صفحه 2:
rir 

صفحه 3:
مسبت او راد بر رای رن سس ترس سل در سباورت ثتل فتالتین با سود تیترد نسودد نز از ری عبارت بروتثين به نسبت درصد بروتفيئةاى سوستود در شير بى برد ‎OE Caos ee‏ ا ل 0 عبارتت از ‎sks‏ سيل ليترهاى سودكه براى 23 ميلي ليتر شير لازم است تا يس از اضافه تردن فرهالدتيد در ستعازرت فل فتالئين رنك استاندارد بدست آيد عيار يروتئين در شيرهاى تازه نسبت درصد مقدار يروتئين را نشان ميدهد. 

صفحه 4:
وسائل لازم برای آزمایش: 0 ree seme ee ‏ل‎ eee 7 یک پیپت 25 ميلي لیتری. یک پیپت 5/0 ميلي لیتری برضورت استان سی توارن از دستناد ستبعش پروتتینبای شیر اعفار الا رد رو لكا مال رت ره سترن سر آزن تست درف برركه! را ستی در 21 سل لستر شیر نشان میدهد. 

صفحه 5:
ل * محلول سود (00629/0©) 00/8 عارى ازه000© رن درجه بد ۱00 سیل, لیتر سیرسالییر/ ‎Rene a eed coe‏ ل ل را با آب مقطر به 100 ميلي لیتر مبرسانیم). ‏* محلول تجارتی فرمالین 40 درصد ‏ا 0 آب مقطر به 100 ميلي لیتر میرسانیم). ‎rir 

صفحه 6:
مشخصات نمونه مورد ازمایش: SS eae Nei Cn py a ‏درس با ترس بات ند رات از ارقا سارك زاك‎ ‏درجه سانتيكراد رسانده و بدون اينكه كف كند خوب بهم‎ ميزنيم. | »ا 

صفحه 7:
رز حور > الف) تهبه رنک استاندارد: 112 اكسالات دويتاس و 0 ميلي ليتر از ‎pes‏ درجد سولفات كوبالت ميريزيم رنك استاندارد بايد هر ساعت يكمرتبه تعويض كردد. | »ا 

صفحه 8:
۱ el ۱ ‏ا‎ ie ‏اد لت رس ز لا سل ل مر تلس رب رب‎ ‏از اينته بم زدییر با سود تيتره ميتساييم ر با رت استاندارد‎ ‏ستایسد سي تنيى, سيس, 3 عيلي ليتر از ثرمالين (التدرصد‎ ‏أضافه نموده و يس از لااقل يك دقيقه تا بدست آمدن رنك كلى‎ ‏مس ساره برد تسرد میس سل رسای سرد‎ ‏مصرف شده عیار بروتتین شیر را نشان. یدسد.‎ 

صفحه 9:
دقت ازسایش: ”اين آزمايش تا203/0 درصد بروتئين را نشان مي دهد. آزمايش فوق العاده سريع بوده و در مورد تعداد زياد نمونه جنانجه با يكدستكاه 2 نفر كار كنند هر آزمايش بيش از 2 ادقيقه بطول نخواهد انجاميد. ‎cee Bee ae OS Oy ese Te‏ لت در ‎ly Sea cl ey‏ قري باردة بتر كرف ‎pe WENN Ss 3) Sa IIE Sy‏ یک تردام) دقت زیادی ندارد 

صفحه 10:
علل اصلی اشتباه در عمل: ‎wer) per yee Ice OMe ole ae‏ ۱ عبارتند از؛ 1520000 مثلاً با جذب اتيدريد كربنيك موجود در هوا. < استعمال فتل فتالئینی که کاملاً خنثی نباشد. 7 کندی یا سرعت زیاد در تیتراسیون. > 8 2 وجود کف در نمونه شیر. 

صفحه 11:
۱ لا روشی است که در حال حاضر برای سنجش يروتئين هاى شير تعداد زيادى نمونه (جندين صدتا جند هزار در روز) مورد ا را رات رم کارخاند سائیست ند روزانه ستدار زیادی شیر برای تویید بشیر دریلات سای را ره لطر براك راو فر ر برد ترل د (از نقطه نظر كميت و كيفيت) بكار ميرود. 

صفحه 12:
اصول آزمایش: 7 اساس این روش عبارتست از نصب رنگیهای آنیلین بر روی پر 027 اله شن وى دو فب عداو امار بن ابيا میت رخاف را ار ار لبن اسيل به سار سنجش يروتئينهاى شير استفاده نموده اند. ‎alae ag ot tale‏ را كه داراى بار التتروتى مخالف باشند بخود جذب مينمايند. بروتئينهاى شير يائين تر از ‎as‏ 0 بار التتریتی سثبت نشان داده و بنران تاتيوتها 

صفحه 13:
حر بات سل درسررتت بت لد رن مره بر لس را ۱ ‎BSS) PBS oo) ee‏ رسوب يرونئين كامل كردذ مقدار بيش إز انذازه رنك لازم أست. ‎Ble)‏ ا ات Sr ‏ا ال‎ TD) ‏وسیله اندازه گیری دانسبته اویتیک مایع باقیمانده اندازه گیری‎ ‏سیشوود.‎ 

صفحه 14:
رنگهای مورد استفاده: SS ee ee wel aie ‏میگیرند عبارتند از:‎ (Cee eee QUO ‏ار‎ ‎sees) JUS NNN] ALO Slog es rir 

صفحه 15:
Owide Clack (OB ی ۲ 

صفحه 16:


صفحه 17:
۱6۳/۰۱6۵۰۰ 2A (ies 

صفحه 18:
7 در اروپا آزمايشگاههايي که برای سنجش پروتئینهای شیر از روش نصب رنگ استفاده مینمایند سیاه آمیدو 1(616) مخصوص ‎partes aera Men yeC yee]‏ 1۱ ‎Ces as ee Nucor ices‏ اله ‎JVs Gye each ls ger galls‏ اردص لد ۳ 

صفحه 19:
sales) ales) Lal < نگهداری نمونه هاء سواد نتندارئده سعولى مائند بيترمات دربتاس يا ترسل بر سل ند دس[ در این مورد باید از بی کلرور دومرکور وم 9راستفاده نمود(ولی در استعمال این ماده باید احتباط کامل رعابت كردد). نمونه ها را بايد در حرارت 2نا 4 درجه سانتى كرات نكيدارى نمود. ۳۹ ط 

صفحه 20:
روشهاى ازمايش: 6 ل ا 0 وسائل لازم براى ازمايش: اسپکتروفوتومتر. ۱ epee mee mecye پیپت 20 میلی لیتری. ‎UPC NII O LORY on re gee] or)‏ rir 

صفحه 21:
۹ كميانى دانماركى-290د|2) بوص *). 0 09/08. استفاده نمود با اين دستكاه ميتوان در هر ساعت 50 تا 60 نمونه شير را مورد ‎calli‏ قرار داد. معرفهای لازم برای آزمایش: ‎lure‏ ا ل ال ا ا ا ‎(CRO‏ ‏آلمان ‏-محلول تامپون 7/1۲35/2 ‎Fee‏ ا ا ‎Frere‏ ‎EO ere Creme cern‏ ‎ow‏ ل ل ‎poe bese On ETee‏ rir 

صفحه 22:
محلول رنك و تاميون: ۳ 440 گرم سیاه آمیدو 96100 را بیک لیتر از محلول تامپون سیترات ‏ فسفات اضافه نموده خوب بهمزده و مدث 24 ساعت به حال خود میگذاريم و سپس آنرا با طول موج اانا ۳ دانسیته اوپتیک این محلول (به رقت 100/1) با اسیکتروفوتومتر ی ‎eee‏ evs DOO) =U) 

صفحه 23:
طرز عمل؛ 2 آزمایش را در حرارت آزمایشگاه گرم نموده و ”7 جندین سرتبد شوب تتان سیدسییم تا جتربی سطعی با شیر تابار مخلوط كردد. 7 با سرنگ مخصوص به دقت 5/0 ميلي لیتر از نمونه آزمایش ‎bh yy bn‏ ستیسر سر بایت بت ‎inert ee)‏ 0 رنگ و تامیون بان اضافه نموده مدت لاقل 

صفحه 24:
و تردندز بعد لوله ضا را در داخل سانتریفورژ ترارداده مدت 3 تا 0 سيل ليتر از ماين فزقائى داخل لوله سائترينوز برداشت تمده با 5 ميلي ليتر آب مقطر رقيق مينماييمو دانسيته اويتيك آنرا در یک طشتک یک ميلي لیتری با طول موج نسبت به آب الخكر لحار ‎eb a Se pa es‏ ازربتيت و ستدار بروتتيده! سلوم ترديد, ستون سدرب كلريستر را سیتران ستتيساً برحسب كرم بروتنين در تيلوترم شير هدري 00 2 رم 60222222 

صفحه 25:
معرفهای لازم برای آزمایش: 06000 ee 7 برای تهیه این محلول یک گرم 6 , 60 - ۵۶() گرم اه سیرک وال سای لعر از مرن (#لترسد تال رکه براى نكهدارى بكار برده ميشود) را در آب حل كرده و حجم آن را به يك ليتر ميرسانيم. | »ا 

صفحه 26:
ور ‎eh haya‏ لا در سر را 0 - ص0 ريخته و دهانه آن را بسته و تقريبا 15 ثانيه ‎orn ene Reever cere lG el‏ ا ‎eee‏ ‎cere ees Ay is rls‏ سر یکدستگاه اسیکتروفوتومتر با طول موح اندازه گیری مینماییم. rir 

صفحه 27:
تنظیم رابطه بین دانسیته اوپتیک محلول و مقدار بروتكينها: برد دربرب بو سر سرح مرب سمل ود برای انداژد تیری مربی شیر بتتر برده میشوند براساس سثایسد با نتایی حاصله از یت روش سرت سنایسه ستار روش رز 7 بر تسم دی سح ر رت بس سامت رت ‎Sy‏ ‏پروتئینها نیز باید با استفاده از یک روش مرجع مقایسه ( که در ا را گردد. برای ابتکار باید مقدار بروتتین ‎ee‏ ‎oto)‏ تال رز كب رت تراط فين ‎5h a8‏ ان رل تب ز بر تبیر نیت اس درد استفاده قرار داد. 

صفحه 28:
‎ta‏ محلول رنگی-غلظت رنگ در مایع تامیون ‎Se‏ 1210110101 ‎ee Mee ia‏ ‎re ‏ا‎ reser oe) ‏کر مقدار رنگ بر حسب میلی گرم‎ Se ۹ ‎rir 

صفحه 29:
۶ که در آن <90) دانسیته اوپتیک محلول 100/1 رنگ ‎cele)‏ سار( ۲ سانتریفورژ و <*0.4) فاکتور رقت. دار پروتتین! بطرید تیلدال از رابطد زیر بدست میاید؛ 30 ا را تست در بررت ۲ ‎jy typ top Sd‏ نسوند < ستدار پروتتیتبا بر حسب ‏كرم. 

صفحه 30:
ظرفیت نصب رنگ از رابطه زير بدست میاید لت رس را مر مقدار پروتئین ها بر حسب گرم 

صفحه 31:
مقایسه روشهای سیاه آمیدو و ظ) - مر ”روش سياه آميدو از روش 13)- ص00 حساس تر است. ‎eed oes Len‏ ا ل | جون دانسيته كميلكس رنك و يروتئين حاصله بيشتر است در ل ا ل | | »ا 

صفحه 32:
تعيين مقدار كازئين شير(روش استاندارد بين المللى): (۱ < ‏الاين ار یر ار‎ ۱۱۱۱۱۱۲۱ ۰ see) TT Pew ey TTT 1 ‏ات‎ ولاخنک!انگهداری !11111111 

صفحه 33:
اصول آزمایش: * منظور از مقدار كازئين شير نسبت درصد وزنى مقدار بروتئين ات 0 اين ازمايش عبارت از اين است كه ابتدا مقدار ازت كلى شير را ‎Se‏ شبن نمردد ز سس دز زابرس بت رز لت ات رسد سرد رح ستیسر سس ) ل مد ار رس سر( ستدار کازتین را از رزی این دز ستعش ‎sprites tebe‏ 

صفحه 34:
وسائل لازم برای آزمایش(رسوب دادن کازئین): ‎ ,۵(‏ و10 ی ترس ‏* ييمانه استوانه اى مدرج به كنجايش 100 ميلى ليتر. 7 بالن ژوژه به گنجایش 100 ميلي لیتر ‏و ‎ 

صفحه 35:
معرفهاى لازم براى آزمايش (رسوب دادن كازئين) 0 محلول نرمال استات دوسود طرز عمل: بطوریکه قبلاً نيز ذكر كرديد, ابتدا مقدار ازت ‎(Ca Fas‏ شیر مورد ازمايش را به روش كيلدال تعيين نموده و سيس كازئين را به ترتيب زير 

صفحه 36:
7 مينماييم سپس یک ميلي لیتر تز محلول استات دوسود به بالن اضافه نموده و مجدداً بهم ميزنيم. محئوی بالن را تقریباً 20 ‎OE STON eee celecne tS SD esl ea‏ سيلي ليتر سيرسائيم ن بازارونه تردن بالن ائرا سوب تان ار و رد انرا ررق بك ماقي ‎Cleans ees elec‏ تر و دايع ‎OS pls Sb SS‏ ‎a) le‏ درز سرتبه سیشوییی بسد ستدار ازت سایت ‎Be‏ ‏ری 70 سیلرٍ لیتر به طریته تيلدال تسیین ‎probe‏ 

صفحه 37:
ارمایس ناهد: < علاوه بر آزمایش شاهدی که در مورد سنجش مقدار ازت کلی شير به روش كيلدال ذكر كرديد براى كنترل معرفهاى لازم ار رل ‎oe) ley SiO) gy See flv‏ از ‎By Sanh Sle) IME,‏ 1 | »ا 

صفحه 38:
نتیجه گیری: ري لك د در مایع ال اا داده میشود محاسبه نموده رقمی را که برای ‎ews (BOO)‏ میآید برحسب حجم رسد با خر کرت ‎US‏ ده سب سس سر ‎Te 3)‏ ا ره ار 042 | »ا 

صفحه 39:
دقت آزمایش: مر ی ۱ ‎IATA AIAN OSA‏ تعیین مقدار آلبومین: ا ا اه 0 درصد را 0 ميلي ليتر اسيد ا و اذ حرارت اف اائكة آلبومين كاملاً رسوب نمايد ‎Ins OCU T PU per yy‏ 1 1 سرد میشوییم و سپس مقدار ازت موجود در آنرا بطریقه کیلدال اندازه كيرى مينماييم اكر > مقدار ازت موجود در رسوب باشد مقدار آلبومين از رابطه زير بدست خواهد امد: ل 0 ۳ 

صفحه 40:
سار سر ار رز شير بكاهيم مقدار ازت غير بروتئينى شير يدست خواهد آمد يا بعبارت ديكر: 7 (آلبومین و گلوبولین + ()کازئین) - ازت كلى - ازت غير ‎Sy‏ rir 

صفحه 41:
See or rn ea ern 020010002 

صفحه 42:


عنوان ارائه : روش تیتراسیون فرمل ارائه دهنده : زیر نظر استاد راهنما : تعريف عیار پروتئين:  اسيدينه ای را که در واکنش فوق ظاهر ميگردد ميتوان در مجاورت فنل فتالئين با سود تيتره نموده و از روی عبارت پروتئين به نسبت درصد پروتئينهای موجود در شير پی برد. عيار پروتئين که به ( )Eiweisstiter=Etنشان داده ميشود عبارتست از تعداد ميلي ليترهای سودکه برای 25ميلي ليتر شير الزم است تا پس از اضافه کردن فرمالدئيد در مجاورت فنل فتالئين رنگ استاندارد بدست آيد عيار پروتئين در شيرهای تازه نسبت درصد مقدار پروتئين را نشان ميدهد. وسائل الزم برای آزمايش: يک بورت مدرج (تا 01/0ميلي ليتر). 2 بشر 250تا 400ميلي ليتری يک پيپت 25ميلي ليتری. يک پيپت 5/0ميلي ليتری درصورت امکان می توان از دستگاه سنجش پروتئينهای شير ساخت ژربر استفاده نمود .اين دستگاه شامل بورتيست که ستون مدرج آن نسبت درصد پروتئينها را مستقيمًا در 25ميلي ليتر شير نشان ميدهد. معرف های الزم برای آزمايش: ‏ ‏ ‏ ‏ ‏ محلول سود ) N/7 (n143/0عاری ازCO2 محلول الکلی فنل فتالئين(2گرم فنل فتالئين را با الکل 96 درجه به 100ميلي ليتر ميرسانيم). محلول اکساالت دو پتاس ( 28گرم اکساالت دوپتاس خنثی را با آب مقطر به 100ميلي ليتر ميرسانيم). محلول تجارتی فرمالين 40درصد محلول سولفات دوکوبالت ( 25گرم سولفات دوکوبالت را با آب مقطر به 100ميلي ليتر ميرسانيم). مشخصات نمونه مورد آزمايش: شير مورد آزمايش نبايد حاوی مواد نگهدارنده مانند بی کرمات دوپتاس يا فرمل باشد نمونه را قبل از آزمايش بحرارت 20 درجه سانتيگراد رسانده و بدون اينکه کف کند خوب بهم ميزنيم. طرز عمل: الف)تهيه رنگ استاندارد: در يکی از بشرها 25ميلي ليتر شير ,يک ميلي ليتر از محلول اکساالت دوپتاس و 5/0ميلي ليتر از محلول 5درصد سولفات کوبالت ميريزيم رنگ استاندارد بايد هر ساعت يکمرتبه تعويض گردد.  ب)تيتراسيون: در بشر ديگر 25ميلي ليتر شير ,يک ميلي ليتر از محلول اکساالت دوپتاس و 25/0ميلي ليتر فنل فتالئين ريخته و پس از اينکه بهم زديم با سود تيتره مينماييم و با رنگ استاندارد مقايسه مي کنيم .سپس 5ميلي ليتر از فرمالين 40درصد اضافه نموده و پس از الاقل يک دقيقه تا بدست آمدن رنگ گلی مشابه استاندارد باسود تيتره مينماييم .ميلي لژترهای سود مصرف شده عيار پروتئين شير را نشان ميدهد. دقت آزمايش: اين آزمايش تا 03/0درصد پروتئين را نشان مي دهد. آزمايش فوق العاده سريع بوده و در مورد تعداد زياد نمونه چنانچه با يکدستگاه 2نفر کار کنند هر آزمايش بيش از 2 دقيقه بطول نخواهد انجاميد. روش تيتراسيون فرمل در عمل بيشتر برای سنجش نسبت درصد پروتئين شيرهای مخلوط و اندازه گيري با زده پنيرسازی مورد استفاده قرار ميگيرد و در مورد شيرهای انفرادی(يا شير يک سر دام) دقت زيادی ندارد علل اصلی اشتباه در عمل: علل اصلی که ممکن است موجب اشتباه در عمل گردند عبارتند از: تغيير عيار سود مثًال با جذب اتيدريد کربنيک موجود در هوا. استعمال فنل فتالئينی که کامًال خنثی نباشد. کندی يا سرعت زياد در تيتراسيون. وجود کف در نمونه شير. ترشی شير روش نصب رنگ: اهميت و موارد استعمال آزمايش :روش نصب رنگ سريعترين روشی است که در حال حاضر برای سنجش پروتئين های شير تعداد زيادی نمونه (چندين صدتا چند هزار در روز) مورد استفاده قرار ميگيرد .اين روش مخصوص آزمايشگاههای بزرگ و کارخانه هائيست که روزانه مقدار زيادی شير برای تهيه پنير دريافت مينمايند و به منظور پرداخت بهای شير و بهبود توليد شير (از نقطه نظر کميت و کيفيت) بکار ميرود. اصول آزمايش: اساس اين روش عبارتست از نصب رنگهای آنيلين بر روی پروتئين ها که ابتدا بوسيله Fraenkel-Conratو Cooperمطالعه شده و سپس دو شيميدان آلمانی به نامهای Udy , Hetzel , Schoberآمريکايي از اين اصل به منظور سنجش پروتئينهای شير استفاده نموده اند. عاملهای قطبی پروتئينها رنگهايي را که دارای بار الکتريکی مخالف باشند بخود جذب مينمايند .پروتئينهای شير پائين تر از نقطه ايزوالکتريک يا بعبارت ديگر در سمت اسيدی اين نقطه بار الکتريکی مثبت نشان داده و بعنوان کاتيونها عمل مينمايند .حال درصورتيکه يک ماده رنگی حاوی بار الکتريکی منفی در محلول داخل نماييم با پروتئين تشکيل کمپلکس غير محلولی از پروتئين و رنگ ميدهد .برای اينکه رسوب پروتئين کامل گردد مقدار بيش از اندازه رنگ الزم است. مقدار پروتئين از روی مقدار آزاد رنگ (که بر روی پروتئينها نصب نگرديده است) سنجيده شده و به وسيله اندازه گيری دانسيته اوپتيک مايع باقيمانده اندازه گيری ميشود. رنگهای مورد استفاده: رنگهايي که معموًال در اين روش مورد استفاده قرار ميگيرند عبارتند از: سياه آميدو B10, Orange Gو Acid orange 12 که فرمول ساختمانی آنها بقرار ذيل است: Amido Black 10B NH2OH O2 N N N NaO3S N N SO3Na Orange G NaO3S NaO3S N N Acid Orange 12 SO3Na HO N N  در اروپا آزمايشگاههايي که برای سنجش پروتئينهای شير از روش نصب رنگ استفاده مينمايند سياه آميدو B10مخصوص الکترو فورز ساخت کارخانه EMerckآلمان را بکار ميبرند سياه اميدو ساخت ساير کارخانه ها نيز در بازاريافت ميشود ولی از نقطه نظر خلوص چندان مطلوب نيست .بهترين نوع سياه آميدو نوعيست که درجه خلوص آن 86درصد است. شرائط انجام آزمايش: نگهداری نمونه ها: مواد نگهدارنده معمولی مانند بيکرمات دوپتاس يا فرمل برای نگهداری نمونه جهت اين آزمايش مناسب نيستند و در اين مورد بايد از بی کلرور دومرکور cl2Hgاستفاده نمود(ولی در استعمال اين ماده بايد احتياط کامل رعايت گردد) .نمونه ها را بايد در حرارت 2تا 4درجه سانتی گراد نگهداری نمود. روشهای آزمايش: الف)سياه آميدو(طريقه .)Raadsveld وسائل الزم برای آزمايش: اسپکتروفوتومتر. سرنگ يک ميلي ليتری(. )Cornwall پيپت 20ميلی ليتری. سانتريفوژ با دور 2500در دقيقه.  در صورت امکان ميتوان از دستگاه Pro –Milk MK IIساخت کمپانی دانمارکی .A/S N.Foss Electricاستفاده نمود با اين دستگاه ميتوان در هر ساعت 50تا 60نمونه شير را مورد آزمايش قرار داد. معرفهای الزم برای آزمايش: سياه آميدو B10مخصوص الکتروفورز ساخت کارخانه E.Merckآلمان محلول تامپون pH=35/2(اتيدر) و برای تهيه اين محلول 674/1گرم Na2HPO4 371/17گرم اسيدسيتريک را درآب حل کرده و حجم انرا به يک ليتر ميرسانيم و pHآنرا بدقت در 35/2تنظيم مينماييم. محلول رنگ و تامپون: 44/0 گرم سياه آميدو B10را بيک ليتر از محلول تامپون سيترات – فسفات اضافه نموده خوب بهمزده و مدت 24ساعت به 615m حال خود ميگذاريم و سپس آنرا با طول موج با اسپکتروفوتومتر استاندارد مينماييم. دانسيته اوپتيک اين محلول ( به رقت )100/1با اسپکتروفوتومتر coleman Junior 68معادل 320/0  005/0ميباشد. طرز عمل: نمونه های مورد آزمايش را در حرارت آزمايشگاه گرم نموده و چندين مرتبه خوب تکان ميدهيم تا چربی سطحی با شير کامًال مخلوط گردد. با سرنگ مخصوص به دقت 5/0ميلي ليتر از نمونه آزمايش برداشته و در لوله سانتريفورژ وارد مينماييم ,سپس با يک پيپت 20ميلي ليتری معمولی يا خودکاردقيقًا 20ميلي ليتر از محلول رنگ و تامپون بآن اضافه نموده مدت الاقل 30 ثانيه بهم ميزنيم تا شير و رنگ کامًال با يکديگر مخلوط گردندو بعد لوله ها را در داخل سانتريفورژ قرارداده مدت 5تا 10دقيقه با دور 2500در دقيقه سانتريفوژ ميکنيم سپس يک ميلي ليتر از مايع فوقانی داخل لوله سانتريفوژ برداشت نموده با 25ميلي ليتر آب مقطر رقيق مينماييمو دانسيته اوپتيک آنرا در يک طشتک يک ميلي ليتری با طول موج نسبت به آب مقطر اندازه گيری مينماييم .پس از اينکه رابطه بين دانسيته اوپتيک و مقدار پروتئينها معلوم گرديد ,ستون مدرج کلريمتر را ميتوان مستقيمًا برحسب گرم پروتئين در کيلوگرم شير مدرج نمود. ب)( Orange – Gطريقه ) Ashworth معرفهای الزم برای آزمايش: محلول :Orange – G برای تهيه اين محلول يک گرم Orange – G , 26گرم اسيد سيتريک و 5/2ميلي ليتر از محلول 10درصد تيمول(که برای نگهداری بکار برده ميشود) را در آب حل کرده و حجم آن را به يک ليتر ميرسانيم. طرز عمل در يک ارلن مير 50ميلي ليتری شير و 5/2ميلی ليتر از محلول Orange – Gريخته و دهانه آن را بسته و تقريبًا 15 ثانيه تکان ميدهيم سپس مدت نيم ساعت بحال خود گذاشته روی کاغذ صافی صاف ميکنيم و دانسيته اوپتيک مایع صافی را در يکدستگاه اسپکتروفوتومتر با طول موج اندازه گيری مينماييم. تنظيم رابطه بين دانسيته اوپتيک محلول و مقدار پروتئينها: همانطور که در درجه بندی ستون مدرج چربي سنجهايط که برای اندازه گيری چربی شير بکار برده ميشوند براساس مقايسه با نتايج حاصله از يک روش مرجع مقايسه مثًال روش رز – گوتليب انجام گرديده است ,رابطه بين داتسيته اوپتيک و مقدار پروتئينها نيز باید با استفاده از يک روش مرجع مقايسه ( که در اين مورد روش کيلدال است) و مقايسه نتايج حاصله تنظيم گردد .برای اينکار بايد مقدار پروتئين تعدادی نمونه شير را (شيرهای انفرادی) به طريقه کيلدال و نصب رنگ توامًا تعيين نمود واز مقايسه آنها جدولی تهيه و در تعبير نتايج حاصله مورد استفاده قرار داد. محاسبه ظرفيت نصب رنگ: ‏ ‏ محلول رنگی-غلظت رنگ در مايع تامپون مقدار رنگی را که در مايع فوقانی لوله سانترژفوژ باقی ميماند, ميتوان از رابطه زير برحسب ميلي گرم محاسبه نمود: محلول رنگی – غلظت رنگ در مایع تامپون ‏E2 مقدار رنگ بر حسب میلی گرم × D.Fــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ × ‏E1 100  ‏ ‏ ‏ رنگ که در آن = E1دانسيته اوپتيک محلول 100/1 و تامپون=, E2دانسيته اوپتيک مايع فوقانی لوله سانتريفورژ و = D.Fفاکتور رقت. مقدار پروتئينها بطريقه کيلدال از رابطه زير بدست ميايد: (* 38/6نسبت درصد ازت غير پروتئينی – ازت کلی) = نسبت درصد پروتئينها نسبت درصد پروتئين*وزن نمونه = مقدار پروتئينها بر حسب گرم. ظرفيت نصب رنگ از رابطه زير بدست ميايد مقدار رنگ بر حسب ميلي گرم/مقدار پروتئينها بر حسب گرم= مقدار رنگ باقیمانده در مایع – مقدار رنگ در 20میلی لیتر محلول فوقانی لوله سانتریفوژ – رنگ و تامپون بر حسب گرم ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ = ظرفیت نصب رنگ مقدار پروتئین ها بر حسب گرم مقايسه روشهای سياه آميدو و :Orange – G روش سياه آميدو از روش Orange –Gحساس تر است. بعالوه سياه آميدو با پروتئينها سريعتر واکنش نشان داده و چون دانسيته کمپلکس رنگ و پروتئين حاصله بيشتر است در اثر نيروی گريز از مرکز بهتر و ساده تر برداشته ميشود. تعيين مقدار کازئين شير(روش استاندارد بين المللی): موارداستعمالآزمايش ‏اينآزمايشبايددرموردشيرتازهانجامشو دچنانچهآزمايششيردرفاصلهساعتام کانپذيرنباشدبهنسبتدرفرملب هآناضافهنمودهودرجایخنکنگهداریمي نماييم اصول آزمايش: منظور از مقدار کازئين شير نسبت درصد وزنی مقدار پروتئين است که بعد از رسوب دادن در pH=6/4بدست ميآيد .اساس اين ازمايش عبارت از اين است که ابتدا مقدار ازت کلی شير را بطريقه کيلدال تعيين نموده و سپس کازئين را بوسيله يک تامپون اسيد استيک و استات رسوب داده و صاف مينماييم .بعد مقدار ازت کلی مايع صافی را نيز بهمين روش تعيين نموده و مقدار کازئين را از روی اين دو سنجش محاسبه مينماييم. وسائل الزم برای آزمايش(رسوب دادن کازئين): پيپت 1 ,5/0و 10ميلی ليتری پيمانه استوانه ای مدرج به گنجايش 100ميلي ليتر. بالن ژوژه به گنجايش 100ميلي ليتر کاغذ صافی و قيف معرفهای الزم برای آزمايش (رسوب دادن کازئين) محلول 10درصد اسيد استيک. محلول نرمال استات دوسود طرز عمل: بطوريکه قبًال نيز ذکر گرديد ,ابتدا مقدار ازت کلی( )ATشير مورد ازمايش را به روش کيلدال تعيين نموده و سپس کازئين را به ترتيب زير رسوب ميدهيم: با يک پيپت 10ميلي ليتری 10ميلي ليتر از نمونه شير را برداشته و در ييک بالن ژوژه 40تا 42درجه سانتی گراد و يک ميلي ليتر از محلول اسيداستيک بآن اضافه نموده محتوی بالن را به ماليمت بهم زده و مدت 10دقيقه صبر  مينماييم سپس يک ميلي ليتر تز محلول استات دوسود به بالن اضافه نموده و مجددًا بهم ميزنيم .محتوی بالن را تقريبًا 20 درجه سانتي گراد سرد مينماييم و با آب حجم آن را به 100 ميلي ليتر ميرسانيم و باوارونه کردن بالن انرا خوب تکان ميدهيم وقتی رسوب کازئين و چربی تشکيل گرديد آنرا روی يک صافی که با اسيد شسته شده باشد صاف کرده و مايع صافی را در يک ظرف خشک و تميز دريافت مينماييم کاغذ صافی را يکی دو مرتبه ميشوييم بعد مقدار ازت مايع صافی را روی 50ميلي ليتر به طريقه کيلدال تعيين مينماييم. آزمايش شاهد: عالوه بر آزمايش شاهدی که در مورد سنجش مقدار ازت کلی شير به روش کيلدال ذکر گرديد برای کنترل معرفهای الزم جهت رسوب دادن کازئين نيز بايد با 50ميلي ليتر از محلول اسيداستيک و 5/0ميلي ليتر از محلول استات دوسود يک ازمايش شاهد انجام داد. نتيجه گيری: نسبت درصد وزنی مقدار ازت کلی شير( )ATو ازت موجود در مايع صافی را که به ( )ANCنشان داده ميشود محاسبه نموده رقمی را که برای ( )ANCبدست ميآيد برحسب حجم رسوب با ضرب کردن در 994/0اصالح مينماييم و سپس مقدار کازئين را از رابطه زير محاسبه مينماييم. (38/6)ANC-AT دقت آزمايش: اشتبهدرعملبيندوسنجشنبايدازدرصد کازئينتجاوزنمايد تعيين مقدار آلبومين: مايع صافی را که در آزمايش قبلی بدست آمده است با محلول 10درصد سود دقيقًا خنثی نموده 3/0ميلي ليتر اسيد استيک يک در ده بآن اضافه کرده و در حمام آب حرارت ميدهيم تا اينکه آلبومين کامًال رسوب نمايد رسوب را روي يک کاغذ صافی که با اسيد شسته شده باشد برده با آب سرد ميشوييم و سپس مقدار ازت موجود در آنرا بطريقه کيلدال اندازه گيری مينماييم اگر nمقدار ازت موجود در رسوب باشد مقدار آلبومين از رابطه زير بدست خواهد آمد: = n*38/6مقدار آلبومين تعيين مقدار ازت غير پروتئينی: چنانچه مقدار ازت موجود در پروتئيدها را از مقدار ازت کلی شير بکاهيم مقدار ازت غير پروتئينی شير بدست خواهد آمد يا بعبارت ديگر: ‏n( آلبومين و گلوبولين N +کازئين) – ازت کلی – ازت غير پروتئيني با تشكر از شما دوستان كه حوصله به خرج داده و اينجانب را همراهي نموديد . پايان