صفحه 1:
کشت بافت رزماری
ارائه:
صفحه 2:
* علاقه جهلنی به استفاده از گیاهان دارویی در حال افزلیش است و مفید بودن و اثرا ت آنها برای توسعه داروهای جدید
می باشد. گیاهان دارویی. گیاهانی هستند که حاوی ماده موثره اند. بیماریهای عفونی نوظهور به یک مشکل بزرگ
چهنی در بهداشت عمومی تبلیل شدهاند. را دی ترپن کار تقو ل:طیتعی:داراج: طیف گسترده خواص ضد باکتربایی و
ضد ویروسی است و به عنوان یک مهارکننده نظری COVID-19 Moro در نظر گرفته می شود. این ترکیب در
خانواده 310136636 در مقادیر کم وجود دارد.
رزماری با نام علمی (. 1 0۴161۳5 5لا8۵5۳۵۲[۲) گیاهی با بوته های چندساله. هميشه سبز و خوش
عطرء متعلق به خانواده نعنائیان(۱81۳186686) که در ایران کشت می شود. 0۴۴61۳115 ٩05۳۱۵۲۱0۱156
-) یکی از ae as cu! Rosmarinus «3» cba f کارل لینائوس نامگذاری شده است. رزماری بو:
نواحی مدیترلنه ای می باشد. پرورش دهندگان اصلی تن در ایران استان مازندران و گلستان. کرمان و اصفهان می باشد.
رزماری (اکلیل کوهی) علاوه بر خاصیت فراوان دارویی به عنوان گیهزیتی در فضای سبز کاربردفراواتی دارد. دارای
خاصیت ضدمیکروبی و منبع طيحي آنتی اکسیدان است و به عنوان گیاه دارویی باارزش مطرح است. اين خاصيت به
دلیل کمیت و کیفیت ترکیبات پلی فنولی موجود در ن می باشد. از مهمترین لین ترکیبات می توان به رز ریک اسید.
کارنوسیک اسید. کافئیک اسید. تیمول و کارنوسول اشاره نمود. اندام دارویی رزماری برگ و سرشاخه های گلدار گیاه
است. رزماری گیاهی مقاوم به خشکی و شوری. نسبت به اکثر آفات و بیماری های گیاهی نیز مقاوم است. اگرچه در
لب و هوای مرطوب به برخی از عفونت های قارچی مانند سفیدک پودری حساس است. رزماری به دلیل داشتن مقدار
زیادی ویتامین ها و مواد معدنی ارزش غذایی بالایی دارد و در تهیه محصولات غذایی مورد استفاده قرار می گیرد.
صفحه 3:
* رزماری دارای برگ هایی به رنگ سبزء باریک. چرم مانند و بدون دمبرگ به صورت متقابل
برروی ساقه قرار می گيرند.
* كل هاى لين كياه به رنگ سفید. صورتی. بنفش یا آبی است. ساقه لین گیاه به صورت مستقیم
با لشعابات فراوان می باشد. دارای سیستم ريشه ای رشته ای به رنگ سفید و قهوه ای است "
صفحه 4:
تکنیر
* تکثیر گیاه رزماری از طریق کشت بذر. خوابانیدن وقلمه صورت می
گیرد که روش قلمه معمولتر است. ازدیاد رزماری از طریق بذر
زیاد موردتوجه نمی باشد. با توجه به اینکه تکثیر با این روشها
تعداد ی پایه های مادری اولیه تولید می شود. کمیت و
يفيت مواد موثره كياهان كشت شده در مزرعه يكنواخات
تیست (9 1,99 al, غ© 0©1!3603553).استفاده از تكنيكهاى
کشت بافت میتواند راه حسل کارآمد و مفیدی برای غلبه بر
مشکلات تکئیراین گیاه باشد. تکثیر لین گیاه از طریق تکنیک کشت
بافت و دستکاری ژنتیکی باعث افزایش تعداد انبوه و میزان تولید
متابولیتهای ثانویه گردیده اسست (قاسمی بزدی و رمضانی مقدم.
Ya)
صفحه 5:
؟ کشت بافت گیاهی برای نخستین بار در سال ۱۹۰۲ توسط هابرلنت مطرح گردید. کشت بافت
عموما با یک قطعه از بافت گیاه زنده به نام ریز نمونه شروع می شود. ریزنمونه از بافت های
مختلف از جمله برگ. ساقه, ريشه. هیپوکوتیل کوتیلدون. جنین یا مریستم انتخاب می گردد و
در یک محیط غذلیی مصنوعی تحت شرلیط استریل کشت می شوند و تبلیل به گیاه جلید و
کامل می شوند.
* عوامل متعددی در رشد ریزنمونه در شرلیط درون شیشه ای مثر است که از جمله آنها میتوان
به عوامل محیطی و مواد غذایی اشاره کرد. ترکیب محیط غذایی شامل: نمک های معلنی قند
به عنوان منبع تامین کننده کربن و ویتامین ها برای تداوم نگهداری میزان رشد بالا می باشد.
فیتوهورمون ها (هورمون هایی گیاهی) از قبیل اکسین و سیتوکنین ها جهت کنترل رشد و
تقسیمات سلولی ممکن است به محیط غذایی در زمان مناسب اضافه شوند.
صفحه 6:
محيط موراسيت و
اسکوک يا محيط كشت
*محیط کشت ۷5 توسط كياه شناسانى به نام ا ۲ اختراع شد. لين محيط
کشت بیشترین محیط کشت مورد استفاده در أزمايشكاءها برای کشت سلولهای گیاهی است.
* در مطالعه ای به تأثیر تنظیمکنندههای رشد بر روی تشکیل کالوس آزمایشگاهی كياه Rosmarinus) 5 sle55
عااه۵۲۴010) پرداحته شد. دراین مطالعه با استفاده از روش کشت بافت در گیاه رزماری (.05۳3۲1۲۱15
icinalis L © ویرنمونه هی از برك جوان و تولید کالوس انجام شد. برگ هابه طول تصادفی (۱.۵-۰.۵ سانتی
متر) برداشته شدند.
* برای استریل ریزنمونه ها ازضدعفونی کننده های شیمیایی اتانول با ده تکرار تصادفی (0۳۷ ۲5 2 کلرید
جیوه (۲۱۵2) و سدیم pa eget L355 (NAOCI) cals gas تیماراستفاده شد. نشان
داد استفاده از هیپوکاریت سدیم در غلظت ۷9. میلی گرم در لیتربه مدت ۱۵ دقیقه بیشترین تأثیر را داشت. بالاترین
اندازه پینه ( وزن تر و خشک پینه (گرم) در غلظت ۲.۰ میلی گرم در 3 BA 5 ۱.۵ میلی گرم در لیتر ۱1۵۸۸ مشاهده
شاه رید جیوه (۳۱۵6/2) بالانریسن تعداد برگ رزماری در غلظت ۰.۰ میلی گرم در لیتر نشان داده شد با
افرایش غلظت ۳۱06/12 تعداد برگهای سوخته یا مرده افزایش (AL MASOODY et al, 2014) ca
صفحه 7:
پینه رزعاری تولید شده تحت درمان 8۸ و ۱18۵. تشکیل کالوس رزماری پس از فر آیند استربلیزاسیون
صفحه 8:
* در مطالعه صورت گرفته در یک سیستم غوطه وری موقت تأ
Jb ge 5 بر دو فیتوهورمون بر رشد گیاه و تولید
كارنوسول در شرايط آزمايشكاهى !ا Qo» 2 Rosmarinus officinalis 13 35
در اين يزوهش ریز نمونه هایی از بخش های میانگره از گیاهان بالغ 8057۳2۲1۲5
01161۳05 برداشته شد و با استفاده از یک محیط جامد و یک سیستم غوطه وری موقت
(115). در كشت يايه 1/15 كشت داده شدند.
محبط 5 با -بنزیلامینپورین (6/۸۳-7) یا 0-نفتالین استیک اسید (/۷۸) در غلظت های
مختلف برای القای کالوس تکمیل شد. برای جداسازی و شناسایی کارنوسول از دستگاه ۳۱۳1۲ که
شامل یک سیستم کروماتوگرافی مایع با کارايي بالا آشکارساز (0۸10]-۳۱۳) استفاده شد. نتایج
نشان داد که پس از ۳۰ روز کشت, سیستم 115 عملکرد بهتری در تعداد شاخساره نسبت به محیط
جامد دارد. حداکثر تعداد شاخساره در محیط ملیع حاوی ٩۳-7 در ۵.۰ میلی گرم در ليتربه دست
آمد. کشت ۷۱۲۲0 10 رزماری اجازه می دهد تا مقادیر زیادی جوانه و کارنوسول به دست آید که
نشان دهنده یک ابزاری کارآمد در تولید و بیوستتز آنتی اکسیدان های طبیعی با ارزش افزوده است
.(Villegas-Sanchez et al., 2021)
صفحه 9:
* مطالعه اى براى ارزيلبى سه رقم كياه رزمارى . | 0۴616105 056۳0۵۲105 شكل 0
Js: R. officinalis L. Pyramidalis “Upright Rosemary © "
tak ol SOS esl Mcofficinalis L. Angustifolius "Pine scented
ریزنمونه برگ از قلمههای انتهایی گیاهان مادری برداشته شدند.
صفحه 10:
۴ ۷ 1
Rosemarinus officinalis L .-) js:
R. officinalis L. Pyramidalis “Upright Rosemary " -۲ خکل
R. officinalis L. Angustifolius "Pine scented" -r js:
صفحه 11:
القای کالرس برروی ریزنمونه های برگ به دست آمده از هر رقم )6.01 5 C3).
صفحه 12:
* با دو روش مختلف استریل می شود: روش اول با استفاده از ۳۱2602 و لب لیمی در حالی كه روش دوم
توسط محلول نلنو ذرات نقره «AgNo3) nsp »پس از لن ریزنمونه ها بر زوق مخيط كشت 19 gt
یک نوع ]۳۵ به عنوان فورکلرفنورون کاشته شدند.
Thidizuron (TDZ).(2.4-D) ۳۳۵۰ کینتین () به تنهایبی با در ترکیب با 2-۲
( 5۸۵۳۴-6) 6۳۱2۷۱۵۲۱۱۵0۱۲۱6 استفاده شد. بهترین تتايج استریلیزاسیون از ۳۱2602 و لیمو
يدتبت آمدتايع ريشه زايى نشان داد.1© و 2 میتوانند مستقیماً پس 3 4 یله در متحیط MS
دهند در حللی که بهترین محیط ريشه زلبی بای 3 لصاف g MB ميلى ثاليه تكميل ده پا 1
بو 1 ۱ فتالن استیک ۱ يد (NAIA) ترین درضد اسانس ۸۹1 در ددر رقع ,روماو 63و
جزء اصلی به دست آمد ۷۵۳۵6۳0۳6 به دنبال لن ۰.۲/ از رقم 2) و جزء اصلی کافور بوه سپس
. ۰ از رقم 1)و جزء اصلی ۷6۲0606 بود.نتایج تفاوت رایحه نشان داد که گیاه رزماری رقم Ry
sbi .officinalis L رايحه معمولی گیاه رزماری" 5دا[1۴0۱ونا۸۳9 با 15ا۵۲۲61۴.ظ
0 ۱6" بیشتررایحه نزدیک به کاج داشت. اگرچه هر دو جزء اصلی Verbenone
بودند .اما دیگر اجزای آنها با هم متفاوت هستند )2618 al., 6 51۲ .5 61۵
صفحه 13:
شکل ۱
شاخه های ريشه دار ۳۵ به دست آمده از 1۷/5 کامل محیط حاوی ۱,۰ میلی گرم در لیتر 1۸۵۸
شاخه های ريشه دار ۳۵ به دست آمده از نیمه ۷18 محیط حاوی ۱,۰ میلی گرم در لیتر NAA
صفحه 14:
805103111115 ( منابع نيتروزنى بر در كياه رزمارى poll gp Sa tlle
بررسی شد. برای این منظور از سرشاخه ul Chet Oo halt cou (Officinalis L
های انتهایی سبز و جوان گیاه رزماری برای ایجاد ریزنمونه استفاده شد.سپس برای گندزدایی
ریزنمونه هاء ریزنمونه ها استریل ضدعفونی شدند.
۰ ریز نمونه ها در محیط کشت 145 حاری ۱ گرم ساکارز کشت شدند. ریزنمونه های
يافته برام ی انجام آز Sle} 4 تیمار نیت وژنی Fees le پارژین و آمونیوم نیترات در .
oe oes و . بعد از دو ماه ریزنمونه های رشد
يافته بررسی شدند. مقایسه میانگین داده ها نشان داد گلوتامین بر حداکثر باززلیی شاخسار گیاه
رزماری و آسپارژین بر تعداد برگ و رشد تأثیر دارد درحالی که بیشترین میزان ریشه زایی در
غاظت صفر از گلوتامین و آسپاراژین به دست آمد. نوع نیتروژون مورد استفاده روی صفات
مورفولوژیکی ریزنمونه های حاصل تأثیر معنی داری دارد.منلبع نیتروژنی در محیط کشت برای
رشد ساقه یک منبع مهم و کارآمد محسوب می شوند (پوربیرامی هیر و همکاران» ۱۳۹۲).
صفحه 15:
استونهاى که دل ای یک حول مشترک هدنر ری ات (doy ce yt
شكل ا-مقايسه مياكين ناير متي مختلف نيتو ير تعد يرك كي رار
شكل +- مقايسه سياكين اثر متقايل منايع مختلف یرون در فلت بر تاه ریش كياد ماري
صفحه 16:
* مطالعه ای دیگر به بررسی کالوس زلیی رزماری(.] 086610۵15 805۳0۵۲1015 در شرایط کشت
بافت تحت تائيرعوامل هورمونى؛ نوع ريزنمونه وزمان يادداشت بردارى برداخته شد ae زمایش
از دو نسوع ریزنمونه میسانگره و جوانه انتهایی گساه رزماري 5
7 ن ها حاوی ۸ ترکیب هورمونی مختلف شامل 8۳ NAA, 2,4-D,
* سه زمان مختلف در فاصله های ۶۰.۲۰ و 7۰ روز پس از کشت به عنوان زمان های یادداشت برداری در
نظر گرفته شد. جهت سترونسازی ریزنمونه ها از اتانول ۰ درصد بمدت یک دقیقه و سپس هیپوکلریت
سدیم تجاری ۲۵ درصد به مدت 3 ز تن ریزنمونه ها سه بار و هر بار
۵ دقیقه با لب دوبار تقطیر استریل ش یشه های کشت به اتاقک رشد در دمای
۵ درجه سانتیگراد و دوره نوری ۱۳ ساعت روشنایی و ۸ ساعت تاریکی منتقل شلند و هر ۳ هفته
یک بار ریزنمونه ها واکشت شدند. بهترین ریزنمونه جهت کالوسزایی رزماری, میانگره سود و ۶۰ روز
بعد از کشت بر روی محیط کشت ۷/5 حاوی ۲ میلی گرم بر لیتر 9۸۴ و ۵ میلی گرم بسرلبتر ۳
68 بالاترین میزان کالوسزایی مشاهده شد و کمترین درصد کالوسزایی ریزنمونه ها : نیز متعلق به محیط
TE San yn gts رودت yan ch مبحیظ کشت است. از بین سیتوکینینهای
د استفاده. ۳ بهتر از کینتین بود و از ميان اكسينها نيز بكر نقش بهتری نسبت به ,2-۲ داشت
(قاسمى يزدى و همكاراة 394 ).
صفحه 17:
جدول ١ نوع وغلظت تركيبات بدكار رفته در محيط كشتهاى مورد استفاده در تحقيق
آکار ساکارز هورمونها Spe
گر را bane WAR BAP TED Ra AHP کشت معيط:
MS, 000
Ms, ed 15
MS عمرستى 28 05 6
MS; Ms i @ « ve ۶۵ ۵۶
روز Sets ya
MS; 8 ۰ = و
MS, 181 2 2
= ae
شکل ۱- مقایسه کالوسزایی ریزنمونههای رزماری ۶۰ روز پس از کشت شامل: ۱) ریزنمونه میانگره بر روی محیط کشت :145 حاوی ۲
میلیگرم بر لیتر 8۸۳ و ۰/۵ میلیکرم بر لیتر ۱۷۸۸ و 5 و ©) به ترتيب ريزنمونههاى مینگره و جوانه انتهابى بر روى محيط كشت 2056
حاوی ۲ میلیگرم بر ليتر كينتين و ۰/۵ میلیگرم بر ليقر 2/846
صفحه 18:
* در مطالعه ای به بررسی تأثیر هورمونها بر کالوس زایی در گیاه رزماری تحت شرایط درون شیشه ای
پرداخته شد. برای لین منظور از برگهای جوان گیاه رزماری از قسمت سرشاخه انتهایی برای ایجاد کالوس
استفاده شد. به منظور ضدعفونی ریزنمونه ها به مدت ۲۰ دقيقه درب حاوی مایع ظرفشویی غوطه ور
گردیده و سپس به مدت ۲۰ دقیقه زیر لب جاری شهری شسته شدند تا گرد و غبار و مایم ظرفشویی از
سطح آنها شسته شود. و پس از ن نمونه ها در زیرالمینار ایرفلی ابتدا به مدت ۱ دقیقه با الکل ۷۰درصد
حجمی ضدعفونی شدند و بعد از آبکشی با لب مقطر در محلول ۱.۵ درصد حجمی هیپوکلریت سدیم به
مدت ۲۰ دقیقه قرار گرفته و در انتها سه بار به مدت ۵۰۲ و ۱۰ دقيقه با آب مقطر استریل ضدعفونی شدند.
ريز نمونه ها در محیط کشت 5 حاوی ۳۰ گرم ساکارز و ۸ گرم آگار و تنظیم کننده های رشد مختلف
کشت شدند.کلیه مواد و ظروف و محبط های کشت در دمای Sle ex ys Ve اد به مدت ۲۰ دقيقه
اتوکالو گردید. کشت ها در دمای۲۰ درجه سانتیگراد ودر ۱7 ساعت روشنایی و ۸ ساعت تاریکی قرار
گرفت. برگ رزماری پس از لن در محیط 5 حاوی ۶ ترکیب هورمونی مختلف شامل ۰ BAP. TDZ
D-4,2 3 به مدت اماه پززستی شد.دز محیط کشت ۲5 با غلظتهای ۵ میلی گرم بر لیتر از
lisa از هورمونهای 8 و ۵ به همراه ۵۰ گرم بر لیتر ساکارز بهسرین نتیجه را با نسبت
القای کالوس ۸۸/۸ درصد نشان داد. بررسیها : بیشترین مقدار وزن کالوس )1/۵ ميلي گرم( دز
۰ میلی گرم در لیتر ۲102 بود. بیشترین تعداد شاخه های تشکیل شده ۳/۷ شاخه در 11042 در اميلى
گرم در لیتر بود (خسروی مجدر و همکاران ۰
ان داد
صفحه 19:
شكل | تثب غلفظلتهاى مختلف هورمونهاى رشد صفر ٠8
ثیر غلظتهای مختلف هورمنهای رشد صفره ۱۰۰۸ واميلىكرم در
بت ر تاد شاخههای تشکیل شده
ليتر بر وزن تازه كالوس,
مداد عاغدهاى تشكيل ده
انمودار ١ تأثر فلظشهاى مخظف هورمونهاى رشد صفر. .٠. ١ و یی رم ریت بر داد شاخدهاى تشكيل شدة
ای هورمونهاى رشد صقر . ۰۵ أو امل كوم در لبر
۰
3 be 5 ود
5 af
0 1
oo 23
اتموفار ؟ تأثير غلظتهلى مختلف هورمونهلى رشد صفر. + ٠: وميلىكرم در لتر بر ون تازه كالوس
وهای دک زک سیرک زد را ماهتا من مرن رسای رین مکی مر ماج لمارف
صفحه 20:
ناب تشان قاذ فلت ن کلربد جیوه منجر به آلودگی برگها به میزان زیاد و افزایش غلظت
۵2 به دليل اثر سمى آن باعث افزايش تعداد بركهاى سوخته يا مرده مى شود.
بالينى و بالينى به عنوان یک عامل ضد میکروبی جدید. یک روش جایگزین کارآمد
برای به دست آوردن کارنوسول است.هورمون 9/۸۳-1] پرکاربردترین و موثرترین سیتوکینین برای
ریزازدیادی گیاهان مختلف گونه های مورد علاقه اقتصادی, مانند برحی از گونه های نعنائیان است.
* - درصد و اجزای اسانس از نوعی به نوع دیگر تحت | ]۰۵۲۲161۳1 متفاوت است به دلیل
واریانس نوع و شرایط محیطی باشد.
9 5- متلبع ن وژنی معدنی به علت تحرک بیشتر و مصرف انرژی کمتر برای بیوسنتز پروتئین. نسبت به
منلبع نیتروژنی آلی موثرتر واقع می شوند و در ريشه زلیی, تشکیل شاخه و جنین زلیی سوماتیکی برای
گیاهان کارآمدتر هستند.
* 7- توسعه د
صفحه 21:
* - در محیط کشت بدون هورمون کمترین درصد کالوس زایی ریزنمونه ها انجام شد که نشان
دهنده ضرورت منابع هورمونی در محیط کشت است
* "- يكي از مهمترین عوامل در ریزازدیادی گیاهان دارويى؛ تأثیر تنظیم کننده های رشد و اثرات
متقابل آنها بر اين گیاهان است.
*با توجه به لین بررسی ها می توان نتیجه گرفت که 0۴۴101۳03115 ۰ آینده امیدوار کننده ای
به ویژه در درمان و پیشگیری از بیماری های مختلف مانند سرطان ها بیماری های عفونی و
yl CNS joes!
صفحه 22:
منابع
* ۱- پوربیرامی هیر ی. حیدری» ح. نریمانیان ف. چمنی, ۱. ۱۳۹۱. بررسی تأثیر منابع نیتروژنی بر صفات
مورفولوژیکی تحت شرایط درون شیشه ای در گیاه رزماری (] 0۴6610۵115 کنا۵5۳۱۵۲۲٩)
کنفرانس بین المللی و ملی کشاورزی ارگانیک در مقلبل کشاورزی متعارف. صفحه ۷-۱
*- خسروی مجدن م. پوربیرامی هیر ى. جمنى. ا. ترابی گیگلو م. ملکی لجای ح. ۲۰۱۸. بررسی تأثیر
هورمون ها بر کالوس زایی در گیاه رزماری تحت شرایط درون شیشه ای . مقاله کنفرانس بین المللی
کشاورزی ارگانیک و مرسوم. صفحه ۸-۱
*۶- قاسمی بزدی. ک» رمضانی مقدم. م .ر. .۱۳٩۱ راهنمای عملی کشت بافت گیاهی -تالیف.
انتشارات نوروزی, گرگان. ۱۵۲صفحه.
* ۶- قاسمی بزدی ک. حیدری زادی.ح. ربیعی؛ م. ۱۳۹۶.بررسی کالوس زایی رزماری(. 1305۳03۲1۳5
| عاا1»10؟01) در شرایط کشت بافت تحت تاثیرعوامل هورمونی, نوع ریزنمونه وزمان یادداشت
برداری .زیست فناوری گياهان دارویی.۱ :۳-۳۳.
صفحه 23:
۰ 5- AL MASOODY,, M, M, M. STANICA, F. 2015. Effect of Growth
Regulators on In Vitro Callus Formation of Rosemary Plant
(Rosmarinus officinalis L.), Faculty of Horticulture, University of
Agronomic Sciences and Veterinary Medicine of Bucharest.
72(1): 131-137
* 6-Dellacassa, E., Lorenzo, D., Moyna, P, Frizzo, C.D., Atti-
Serafini, L. and Dugo, P. (1999).Rosmarinus officinalis با
(Labiatae) essential oils from the South of Brazil and
Uruguay.Journal of Essential Oils Research, 11: 27-30 .
+ 7-Salwa S. Sakr, Ayman Y. Amin, EL-Mewafy A. EL-Mewafy and
Nevien M. Eid. 2018. In Vitro comparative study on Rosmarinus
officinalis L. cultivars. Middle East Journal of Agriculture Res
CRW, 7(3):703-715.
* 8- Villegas-Sanchez., E. Macias-Alonso., M. Osegueda-Robles.,
S. Herrera-lsidr6én., .ا Nufez- Palenius., H. and Gonzalez-
Marrero., Joaquin .2021. In Vitro Culture of Rosmarinus
صفحه 24:
پایان