طراحی واکسن های ویروسی

طراحی واکسن های ویروسی

اسلاید 1: طراحی واکسن های ویروسیمریم نصراصفهانی

اسلاید 2: مقدمهنظام حاکم بر ایمونولوژي، ریشه در آزمایشات اولیه ادواردجنر و لویی پاستور در زمینه واکسیناسیون دارد.شیوع بیماري هایی از قبیل دیفتري،سرخک، اوریون، سیاه سرفه، سرخچه (سرخک آلمانی)، فلج اطفال و کزاز با متداول شدن واکسیناسیون، به طور واضحی کاهش یافته است

اسلاید 3: واکسیناسیون یک سلاح با ارزش و مؤثردر پیشگیري ازبیماري هامیلیون ها نفر درسراسر جهان به علت مالاریا، سل و ایدزجان خود را از دست می دهند.هر واکسنی که در آزمایشگاه و مطالعات حیوانی با موفقیت همراه بوده الزاماً موجب پیشگیري از بیماري درانسان نمی شود.واکسن هاي زنده یک تهدید ویژه براي افراد مبتلا به نقص ایمنی اولیه یا اکتسابی

اسلاید 4: چالش های مهم در طراحی واکسنشناسائی Agارائه شدهتوانائی سیستم تحویل با تحریک بالا(ایمنی سلولی وهمورال)ایمنی قوی وپایداردر برابر ویروس

اسلاید 5: سازمان بهداشت جهانی (WHO) اعلام کرده که یک واکسن مطلوب باید داراي ویژگی هاي زیر باشد:قابل خرید در سراسر جهانمقاوم به حرارتمؤثر بودن پس از یک دوزقابل استفاده براي تعدادي از بیماري هاقابل تجویز از راه مخاطمناسب براي تجویز در اوایل زندگی

اسلاید 6: روش های بدست آوردن واکسن هاویریون های زنده ضعیف شده وغیر فعالوکتور های ویروسیDNAزیرواحدهای پروتئینی

اسلاید 7: وکتورهای ویروسیپاکس ویروس واکسن ضد HIV-1 آدنوویروسAAVآلفا ویروسسیتومگالوویروسلنتی ویروس

اسلاید 8: وکتور های باکتریائیشیگلاسالمونلاتحویل از طریق مسیر دهان که مسیر طبیعی عفونت است.

اسلاید 9: مشکلات استفاده از وکتورهاایجاد پاسخ ایمنی علیه خود وکتور(افراد در تماس با ویروس)محدود بودن ظرفیت برای ورود ژن مورد نظرخطر ادغام در ژنوم میزبان(آلفا ویروس،AAV)انتقال ژن های هترولوگوس به باکتری های دیگر(وکتور های باکتریایی)

اسلاید 10: واکسن های زنده ضعیف شده ویروسیکنترل بیماری های ویروسیدارای احتمال بیماری زائی به دلایل:بازگشت به فرم ویرولانسنوترکیبی سویه های واکسن با نوع وحشی ویروس پاتوژنتوانائی ژنوم ویروس برای پایداری در بافت ها یا ورود به ژنوم میزبان اختلال در نظم سیستم ایمنی توسط پروتئین های ویروسی

اسلاید 11: واکسن های DNAاولین بار در سال 1993امروزه 2 واکسن دامپزشکیمعایب: نگرانی ادغام اسید نوکلئیک در ژنوم میزبان بعد از تزریقتشدید بیماری به جای حفاظتاثر کم (بزرگ بودن مقدارDNAمورد نیاز برای تزریق وایجاد پاسخ ایمنی قوی)

اسلاید 12: اصلاح واکسن های DNAافزایش جذب پلاسمید (تفنگ ژنی والکتروپوریشن)تحویل Agدر ترکیب با سیتوکین های مختلف تحریک کننده سیستم ایمنیواکسن DNAترکیب شده با ادجوانت یا سیتوکین ها(جذب سطحی زیرواحدهای APCها)

اسلاید 13: ذرات شبه ویروسی(VLPs)متشکل از یک یا چند پروتئین بیان کننده ویروسی نوترکیبساختارهای فوق مولکولی شبیه به ویروس های عفونیاتصال ذرات ریز ویروسی به آنهادارای پروتئین های متراکم وهندسی از واحدهای تکراری(شبیه Ag میکروبی) ایجاد پاسخ ایمنی شدیدتحریک پاسخ ایمنی بواسطه B-Cellتحریک پاسخ های CD4 وسیتوتوکسیک لنفوسیت های T (CTL)

اسلاید 14: واکسن های تولید شده با VLPsهپاتیت B(Recombivax,Energix)ویروس پاپیلومای انسانی(Cervarix,Gardasil)

اسلاید 15: استراتژی های مختلف برای تحویل واکسناستفاده از ویروزوم(لیپوزوم های حمل کننده پروتئین های انولپ ویروسی)واکسن های زیر واحدی بیان شده در گیاهان وحشراتسیستم باکتریوفاژ رشته ای fdسیستم E2

اسلاید 16: سیستم باکتریوفاژ رشته ایFdبر پایه تکنولوژی phage display))F1,M13پپتید های فاژ مشابه اپیتوپ های Ag(کتابخانه های فاژی+آنتی سرم های اختصاصی)توانائی فاژ در نمایش تعداد زیادی کپی در سطح خود کپسید فاژ دارای 5نوع پروتئین پوشش دهنده:III,VI,VII,IX,VIII

اسلاید 17: روش کارابتدا باکتریوفاژ مهندسی شده که حمل کننده یک کپی متفاوت از ژن اصلاح شده ی VIIIاست را تهیه کرده وسپس آن را وارد یک پلاسمید کد کننده ی همین ژن میکنیم .این پلاسمید را وارد باکتری وآن را آلوده میکنیم.ژن VIIIپروتیین اصلی پوشش دهی باکتریوفاژ می باشد که Agمورد نظر ما در سطح آن بیان می شود.این باکتریوفاژ توسط کمپلکس MHCگرفته میشود وتوسط مسیر های کلاسIوIIپردازش میشوند.

اسلاید 18: ارتقاء سیستم تحویل Agامکان نمایش پپتید ها یا توالی هدف روی یکی از پروتئین های جزئی پوشش دهندهدر نتیجه:هدف قرار دادنAPCها وافزایش پاسخ ایمنیجلوگیری از القاء تحملمانند:رسپتور DEC205

اسلاید 19: روش کارایجاد دو ناحیه محدودگر در fdAMPLAY388وکتور باکتریوفاژتوسط SDMاجازه درج پپتید ها وپروتئین ها در Nترمینال ژن PIIIکلون کردن سیگنال قطعات Abزنجیره ای(SCFVs) که آنتی بادی منوکلونال موش(NLDC-145)اتصال به سطح دندریتیک سل های موش وشناسائی DEC-205

اسلاید 20: Figure 1 Selective targeting of antigens to dendritic cells

اسلاید 21: نتیجهخالص سازی ذرات فاژی عملکردیآنالیز وسترن-ایمنوبلاتینگتایید هویت پروتئین ترکیبی بیان شده(SCFV 90KD)ذرات باکتریوفاژی ،Abمنوکلونال موش را درN ترمینال ژن PIIIبیان می کندایجاد پاسخ ایمنی اختصاصی قوی علیهAg(هدف قرار دادن DCsبا ذرات fd)

اسلاید 22: سیستم E2این سیستم بر پایه ی کمپلکس PDH(پیروات دهیدروژناز)باسیلوس استاروترموفیلوس می باشد.این سیستم هر دو سیتم ایمنی همورال وسلولی را فعال می کند.برای تهیه ی واکسن E2را با ذرات شبه ویروسی ترکیب می کنندکه در ECOLI تولید شده است.تولید ذرات E2نسبتا ساده وارزان تر در مقایسه با بکلوویروس یا سلول های پستانداران است.در این زمینه ما آنتی ژن های HIVو دومین های پروتئینی را بررسی کردیم.

اسلاید 23: روش کارکمپلکس PDH:متعلق به خانواده 2OXOاسید دهیدروژنازشامل 3آنزیم متفاوت(E1,E2,E3)E2:دی هیدرولیپویل آسیل ترانسفرازشامل 3دمین جدا که با لینکر به هم متصل اند1)لیپویل(LIP)

اسلاید 24: 2)زیر واحد محیطی اتصالی(PSBD)3)هسته کاتالیتیکی(CD)استیل ترانسفراز:E2با تری مرها ایجاد 60-mer با تقارن 20وجهینیازی به چپرون ها نداردمقاوم به حرارت (باکتری های گرما دوست)ورود الیگونوکلئوتید های اگزوژنی در 5’ژن کدکننده آسیل ترانسفرازایجاد هسته مهندسی شده(E2DISP)توانائی ارائه 60پلی پپتید درNترمینالE2

اسلاید 25: Figure 2 Schematic image of the E2 acetyltransferase display system derived from the Bacillus stearothermophilus pyruvate dehydrogenase complex.

اسلاید 26: نتیجه گیریسیستم های E2وباکتریوفاژFdدر تحویل آنتی ژن SAFE وبی خطر هستند.قابلیت تحریک پاسخ ایمنی همورال وسلولی را حتی در غیاب ادجوانت ها دارند.هر دوی این سیستم ها قابلیت دسترسی به APCها را داشته والقاء پاسخ های سیتوتوکسیک لنفوسیت های T را ایجاد می کنند.

اسلاید 27: با تشکر