آزمایش های کیفی اسیدهای آمینه و پروتئین ها

آزمایش های کیفی اسیدهای آمینه و پروتئین ها

اسلاید 1: آزمايش هاي كيفي اسيدهاي آمينه وپروتئين ها

اسلاید 2: اسيدهاي آمينهتعريف :واحدساختماني پروتئين هابيش از 300 نوع درطبيعت يافت شدهفقط 20 نوع درپروتئين هاي انساني يافت شدهتعداد و نوع وتوالي وارتباط فضائي آنها ساختمان سه بعدي وخواص بيولوژيك پروتئين را مشخص مي كند

اسلاید 3: طبقه بندي اسيدهاي آمينه الف)براساس خواص فيزيكوشيميائي وقطبيت اسيدهاي آمينه خنثي (بدون بار) اسيدهاي آمينه باردارّّب ) براساس ريشه اسيدآمينه (ريشه R) اسيدهاي آمينه خطي ( گليسين......) اسيدهاي آمينه حلقوي (تيروزين،تريپتوفان،.......)

اسلاید 4: روش هاي تشخيص افتراقي اسيدهاي آمينه وپروتئين ها :روش هاي شيمياييروش هاي فيزيكي : الف) كروماتوگرافي ب ) الكتروفورز

اسلاید 5: آزمايش هاي شيميايي اسيدهاي آمينه :1- آزمايش نين هيدرينNinhydrin شناسايي كليه اسيدهاي آمينه

اسلاید 6: .....آزمايش نين هيدرين:هدف :شناسايي قسمت مشترك همه اسيدهاي آمينهاساس:نين هيدرين باعث دزآمينه ودكربوكسيله شدن اسيدآمينه شدهودرانتها كمپلكس رومان (Rhoman) به رنگ بنفشتشكيل مي شود.

اسلاید 7: واكنش نين هيدرين

اسلاید 8: نكات مورد توجه :ايجاد گاز CO2 دليل بروجوداسيدآمينه است .اسيدهاي آمينه پرولين وهيدروكسي پرولين به علت ساختمان خاص درپايان اين واكنش رنگ ديگري ايجاد مي كنند.

اسلاید 9: روش كار :به 2 ميلي ليتراز محلول مجهول 1 ميلي ليتراز معرفنين هيدرين اضافه نموده و 5 دقيقه در بن ماري جوشبگذاريد.جواب مثبت : رنگ بنفشجواب مثبت براي پرولينوهيدروكسي پرولين : رنگ زرد

اسلاید 10: 2- آزمايش زانتو پروتئيك Xantho proteic هد ف : شناسايي اسيدهاي آمينه حلقوي ازخطي از طريق تشخيص حلقه بنزني اساس: اسيدنيتريك غليظ باحلقه بنزني ايجاد مشتقات نيتره حلقه بنزن (زردرنگ) رامي دهد.ادامه واكنش باسود40 درصد وايجاد رنگ نارنجي است.

اسلاید 11: روش كار :به 2 ميلي ليتر از اسيدآمينه مجهول 2ميلي ليتر اسيدنيتريك غليظ (توسط پي پتور) اضافه نموده وبه مدت 5دقيقه در بن ماري جوش قراردهيد.جواب مثبت : رنگ زردادامه واكنش :پس ازسردنمودن لوله حدود 5-3 ميلي ليترسود40 درصداضافه نمائيد.جواب مثبت : رنگ نارنجي

اسلاید 12: 3- آزمايش ميلونMilon هدف : شناسايي اختصاصي اسيدآمينه تيروزين(تشخيص حلقه فنلي)اساس: معرف ميلون (شامل نيترات ونيتريت جيوه) با حلقه فنلي تركيب خاصي بوجود مي آورد.

اسلاید 13: روش كار :به 2 ميلي ليتر اسيد آمينه تيروزين 2 ميلي ليتر معرف ميلون اضافه نموده ولوله را به مدت 5-2 دقيقه در بن ماري جوش قراردهيد. جواب مثبت : رنگ قرمز

اسلاید 14: 3- آزمايش هاپكينزكول Hopikins-Coleهدف : اختصاصي شناسايي اسيدآمينه تريپتوفان ( تشخيص حلقه اندولي)اساس: نمك منيزيم اسيد گلي اگزاليك درمحيط اسيدي قوي با حلقه اندولي كمپلكس رنگي ايجادمي كند.

اسلاید 15: روش كار :به 2 ميلي ليتر ازاسيد آمينه تريپتوفان 2 ميلي ليتر معرف هاپكينزكول اضافه نموده بعد ازمخلوط نمودن حدود 2-1 ميلي ليتر اسيدسولفوريك غليظ به آرامي واز جدار لوله وارد كنيد.جواب مثبت : ايجاد حلقه بنفش رنگ درحدفاصل دوفاز

اسلاید 16: آزمايش هاي پروتئين ها آزمايش هاي اختصاصي اسيدهاي آمينه تاحدودي به محلول پروتئين ها نيز جواب مثبت مي دهند ولي با شدت رنگ كمتر. آزمايش هاي پروتئين ها اختصاصي براي آنهاست.

اسلاید 17: 1- آزمايش بيورهBiuret هدف : شناسايي محلول پروتئيني از محلول هاي ديگراساس: براساس پيوند پپتيدي است . پيوندهاي پپتيدي در محيط هاي قليايي املاح مس دار كمپلكس رنگي ايجاد مي كنند.

اسلاید 18: روش كار :به 2 ميلي ليتر محلول پروتئين 2 ميلي ليتر سود %10اضافه نموده پس از مخلوط نمودن 1 ميلي ليتر سولفات مس %1 به آرامي ازجدارلوله بروي آن بريزيد به طوري كه مخلوط نشود.جواب مثبت : تشكيل حلقه بنفش رنگ درميان دوفاز

اسلاید 19: 2- آزمايش رسوبي پروتئينهدف : شناسايي محلول پروتئيني( روش تكميلي ) اساس: پروتئين ها باايجاد پيونديوني بااسيدها دناتوره شده وايجاد رسوب ميكنند.

اسلاید 20: روش كار:2 ميلي ليتر محلول اسيدي( اسيدتري كلرواستيك يااسيد سولفوساليسيليك) رادرلوله ريخته و 1 ميلي ليتر ازمحلول پروتئيني رابه آرامي وازجدارلوله به آن بيفزاييد.جواب مثبت : ايجاد حلقه سفيدرنگ درحد فاصل دوفاز