کنترل کیفی در سیتولوژی سرویکوواژینال

صفحه 1:
در سیتولوژی سرویکوواژینال 

صفحه 2:
يكي از مژش‌ترین روش هاي بيماريابي در تاریخچه پزشکي ابه شرط حفظ کیفیت 

صفحه 3:
تثبيت يك روش استاندارد براى كنترل كيفيت سيتولوزى سرويكووازينال ؟!! 

صفحه 4:
00 Quality Assurance program 

صفحه 5:


صفحه 6:
بهترین زمان انجام نمونه گیری روز 06 سیکل است ( از یک هفته قبل بیمار نباید از انواع کرم های واژینال استفاده نموده باشد ‎prema ono)‏ 31 ‎PRPC TG EIS Tet Ss Sw cae‏ إدد. مقاربت از 06 ساعت قبل از نمونه كيرى نبايد صورت كيريد. 

صفحه 7:
نمونه برداری صحیح Perey Celeron erperc rn Cire eis fee ere Cyer ere tre sme Rete Be Eas ar) ۱29 core \camir mrrerre corr cs) قبل از نمونه بردارى نبايد سرويكس با سالين شسته شود ‎as‏ ل ل ل لك ‎۱ ‏ل ل‎ SPS ye ron ‏يذيرى سلولها را مختل مى كنند ) ‎ 

صفحه 8:
اه بررسى سرويكس ان نظر هركونه ضايعه ارزيابى محل ©2013 13 (وابسته به 4اط واذن - 0 وضعيت هورمونال - حاملكى - يائسكى- درمان هاى قبلى - آناتومى فرد ) پاک کردن خون- موکوس یا ترشحات بیش از حد از 3 

صفحه 9:
انواع وسایل نمونه برداری Plastic spatula 0 Extended tip spatula Cervical brush Cervical broom Cotton swab Unicum 

صفحه 10:
انتخاب وسيله ‎Ai ga‏ گیری سا و TES TTS Sern te er cee ere ee) "۲ 206 ‏در نظر گرفتن شرایط فرد و محل‎ ‏انجام مى شود.‎ 

صفحه 11:
Be ‏ا‎ 

صفحه 12:
Figure 4, Sampling of the Cervix with Three Different Instruments: Spatula, Brush, and “Broom.”| 

صفحه 13:
انتقال نمونه از وسيله نمونه بردارى بر روى اسلايد شيشه اى به ابعا 5/7 61/5/2176 وضخامت 1 530 

صفحه 14:


صفحه 15:
محل انتقال نمونه اندوسرويكس و اكتوسرويكس بر روى اسلايد شيشه اى 

صفحه 16:


صفحه 17:
50 ۳ بخش كردن يكنواخت سلولها به صورت يك لايه نازك بر روى اسلايد شيشه اى ‏ | اسمير خيلى نازك : ‎yee Se Teese PPD)‏ تعداد سلولها کم و پراکنده 00 فیکساتیو به آن نفوذ نمی کند رنگ به آن نفوذ نمی کند 

صفحه 18:
روش های خاص نمونه گیری لا لك نمونه توسط اسپاچولا از. اپی تلیوم ثلث ‎Ss Seb Pee TTS Pere?)‏ 1۱ 

صفحه 19:
۱ نمونه توسط انتهای پهن تر. اسپاچولا از فورنیکس خلفی واژن گرفته مى شود. 

صفحه 20:
نمونه جهت بیماریابی زنانی که در معرض 2۴65 كم نمونه توسط اسپاچولا از چهار ربع واژن - از ثلث فوقانی ‎OBE)‏ ۳ ۱ ل ‎ee eae‏ نوشته شده باشد, 

صفحه 21:
كرفتن اسمير سرویکو واژینال توسط خود فرد 5 30111111177 0-1 

صفحه 22:
فیکساسیون منأسب ‎Were ers Bs moe]‏ و در اليكد تمرنه نور حرس اسك الجام امن شود. 71 ‏انواع فيكساتيوها: فيكساتيوهاى بوشانندهء سطح ((©©5101126 601109 عن اتانول ©9609 ‎ 

صفحه 23:
فیکساتیوهای پوشاننده ‎ating-Surface Fixative‏ ترکیب الکل و پلی اتیلن گلیکول (کربوواکس) توسط اسپری به سطح اسمیر پاشیده می شوند. RYT ES BE nee Doe Loy bots) 

صفحه 24:
Fats eet PU) ‏حدوداً 00 سانتی متر یا طبق دستور سازنده‎ ‏ا‎ ‏ایجاد آرتیفکت‎ ‏رت دا‎ Te ert ecd 0 0 er) ‏ل يه‎ ‏خشک شدن اسلاید و فیکساسیون نامناسب‎ ‏پخش نامنظم فیکساتیو در سطح اسلاید‎ 

صفحه 25:
0 Be SY ee we ne 0 1 ‎a Ber ee vars ecb et‏ اسمير برداشته شود ( قراردادن اسمیرها درالکل 20 بمدت 000 تقیقه ‏با ۱ در غیر این صورت؛ سیتو پلاسم آبی کمرنگ»؛ و رنك بذيرى نامنظم مى شود ‎ 

صفحه 26:
اتانل وم 0 ‎KER Try Cee Ten EV YE Ot HONE CEC)‏ ۱ سریعا به داخل آن غوطه ور می گردد 010 

صفحه 27:
سس ‎Pap Helin‏ ۳ ما هم 

صفحه 28:
اسلایدهای غیر قابل قبول ۱۹ ance ‏ل‎ tb re اسلايدى كه مشخصات يا شماره مربوط به بيمار روى 0 رد اسلايدى كه بركه درخواست همراه آن فاقد مشخصات و ات 0 مشخصات ثبت شده ریوی اسلاید همخوانی ندارد اسلایدی که برگه درخواست همراه ندارد 

صفحه 29:
‎icy‏ سس ‎ ‏رنك آميزى بايا نيكولائو ‎eee 5‏ آمیزی مورد قبول برای نمونه های سیتولوژ که 0 3 ‎١ 46 0‏ 5 ‎20 y 2 ‏حاوى‎ ‏و دو رنگ متقابل برای سیتوپلاسم می باشد ‎ 

صفحه 30:
Pere eee eee هماتوکسیلین : برای رنگ آمیزی هسته ‎OG-6‏ برلیرنگآمیزی‌سیتوپاهم .متشکل‌از رنگ6 0۲۵۳9 ۱ ۱ 71 کراتین اگر در سلولهای سنگفرشی موجود باشد آنرا برنگ نارنجی در می آورد. ‎EA:‏ برای رنگ آمیزی سیتوپلاسم يك رنك بلى كروم و تركيبى از 515 سبز مايل به زرد و -1101 1805 0 ‏ا ا ل‎ per ene Wnt) gf ‏را »لكوسيتها‎ 0 ۱۳ ey) YTS YTD 1 CEs Pe Tec Dy Se elec D IO Oe ee Yer Ler) 

صفحه 31:
۱۳ ی وس ‎ee Ce Es et TEE EC‏ تيت ‎CBs Cr wer nen gre Resbyrip yn ee tures Sey‏ ‎See ass er rete awe a‏ مرحله رنگ آمیزی هسته )قرار دادن اسميرها در هماتوكسيلين و محلول آبى كننده كه رنك هماتوكسيلين را تثبيت مى كند ( Bb Qe ‏ال‎ Toe erie STC mere ern ery دادن اسمیرها در ظروف متوالی الکل با غظت رو به افزایش ( Bryer ‏مرحله رنى آميزى ا‎ 1 3 gallos oalde ey gsalclipuna lad ala yy 1۳: eye CENCE GPE 1 Gp 59 yaad ols LAC syed es Sle lit ala, BV ete Pee ey 

صفحه 32:
در رنك آميزى بايانيكولائو لع لاك ا 000 50 رنك آميزى يايانيكولاثو به دو متد : ع /ا١‏ 5 6غ تارع /ا١|١‏ 18855 006]] مانجام مى شود. تفاوت اين دو روش در مرحله رنگ آمیزی هسته با هماتوکسیلین است . 

صفحه 33:


صفحه 34:
در متد 6 60۲655۷ هسته توسط هماتوکسیلین غیراسیدی ‎Serr rere Sere et eB warner)‏ | بعد » رنگ اضافه با ۲۷6۷ رقیق رنگبری می گردد و سپس نمونه در آب جاری شسته می شود. در متد 6 ۳۲۳۵0۲655۷ اسمیر تا زمانی در هماتوکسیلین می ماند كه شدت رنك هسته بحد مطلوب برسد (رنكبرى با 14 و شستشودرآب جاری لازم نیست ) در مرحله بعد» اسمیر درون یک ماده آبی کننده (206101 8۱0619 ) مثل هیدروکسید ‎Tol‏ ۱۳۳ 

صفحه 35:
LS. Apes |) PROGRESSIVE ss NCCLS جون شدت رنك هسته آسانتر قابل كنترل است و تكرار يذيرى | ‎by gS GT Ala yay od Ce Gas 1 oi‏ 0000 ‎kor)‏ ۱ در هر آزمایشگاه تغییرات مختصر: ‎eee ape rer‏ ‎tyyy yee)‏ 7۷ شود تا نگ 0 آل بدست بیید" مهم اپشست که در مر ‎Sop ere‏ و وي سك ماري عر ارد 1 

صفحه 36:
مزایای پاپانیکولائو 3 جزئيات هسته مشخص است. كروماتين به خوبى رنك مى كيرد ‎١‏ ‏شفافیت سیتوپلاسم حتی وقتی سلولها روی هم می 00 حفظ می شود انواع سلولها از یکدیگر قابل افتراقند ۱ Ove Opes rene ee Toe ‏فعالیت متابولیک آنهاست‎ رنك براى مدت طولانى ثابت مى ماند و نتايج تكراريذير مى دهد 

صفحه 37:
نکاتی در مورد رنگ آمیزی پاپانیکولائو اکسید شدن رنگها در معرض نور 10 فیلتر کردن رنگها تعویض رأ 0 توجه به كلر آب لوله كشى توجه به زمان هاى رنك آميزى د کردن نمونه ۱ ‎JA‏ الكل در از بين بردن ردنك ‎ae‏ صورت مجاور شدن طولانی ‎Sew ec ty‏ ۱ ‎0 ic ‏عدم استفاده از هماتوكسيلين حاوى جيوه ‎ ‎ 

صفحه 38:
Beer ase ety بعد از اتمام مراحل رنگ آمیزی» سلولها باید دهیدراته شوند و ‎Ten ce Toe EE Eee Tew Ren‏ م مجاور گردند تا سیتوپلاسم سلول شفاف شود عامل شفاف كننده بايد بى ردك باشد 0 as Wee rerpresmy yatta re ys As ‏مونته کننده باشد‎ 

صفحه 39:
1 stp Dp ob NSE OTN ait استفاده مى شود . گزیان باید روزی یک بار فیلتر شود. 0 eas ‏ا‎ By) ‏تعویض گردد.‎ 

صفحه 40:
نکات ایمنی کار بار گزیان BB ye ‏ل ا‎ 5 I ewe تهویه مناسب انجام شود . _از تماس گزیان با پوست اجتناب شود . ‎a‏ ‏1 شدن بخار آن كه توكسيك و قابل اشتعال است ( 2 WSR SN ea نزدیک شعله آتش باشد . 

صفحه 41:
مونته كردن لام ويزكى هاى ماده اى كه براى مونته كردن استفاده مى شود : _بايد با عامل شفاف كننده )كزيلن ( قابل امتزاج باشد . _بايد ترانس بارت باشد. _ضريب انكسار آن مساوى ضريب انكسار لام و لامل باشد . ‎TeSys kee ae‏ ا ات ‎aN IY TSI SLE Rea er Tee Beer‏ _آن خنتی باشد . 0 ere Te) ee cn ore oa 

صفحه 42:
aes ‏ام و‎ 0 ‏ا ل‎ eee ee ‏رت سا‎ eee Ce oe oe 

صفحه 43:
۵ دبس _لامل باید شيشه شفاف درجه یک با ضخامت .10۳0-02 17. _بايد تمام سطح اسمير را بيوشاند) معمولاً (62© 1213 60 26 _بايد مسطح باشد و ناصافى نداشته باشد. _باید مقاوم باشد . ضريب انكسار آن مساوى ماده مونته كننده و لام باشد . 

صفحه 44:


صفحه 45:
requirement Education 515 Training 

صفحه 46:
lab. ۱۳20 تست سس سس _:WHO Consensus panel Recommended at least 20,000 specimens ‏ادعلا‎ to maintain acceptable skills CAP review : Screening Error Rate is greatest in labs processing less than 5000 specimen / Yr 

صفحه 47:
7 een | ‏دوو‎ ‎Slides /‏ 100 و۱۵ 1 ۲ ‎Australia : 10 slides / hr 70 Slides /‏ لاهم ‎U.K : Maximum 4 hr 30 Slides /‏ 12 ‎Consensus : 60 Slides / Day 

صفحه 48:


صفحه 49:
SS FS oe 71 Should be Standard & Clear 

صفحه 50:
(eee - Quality Assurance مانيتورينك سيستماتيك روند انجام كار به منظور 71 ‎Cre meer)‏ ا ‎ESE EB‏ از آماده سازی بیمارو جمع آوری نمونه تا مرحله دریافت نتیجه توسط پزشک 

صفحه 51:
Staining Quality Check | Random checking of staining quality of smear 

صفحه 52:
smear -—ntethe-daily workload Evaluation of screener competence 

صفحه 53:
Crtween 0.9% ۰ 9۵ iP di swears ww reported ‏جد‎ ucsutsPuriory 

صفحه 54:
Hierarchic Review all of reactive changes & epithelial abnormalities evaluating the discrepancies (CLIA & Recommendation ) Oot wore thos OP % oP sides reported as oboe | Dot lees hoa 0.9% oP sides reporied ux WGIL | 

صفحه 55:
ae 2 ‏ع"‎ a = i Rescreening of negative slides Detection of FN results & Performance Sensitivit Oct wore ‏بح‎ 9916 ۰۴ sides reported us ‏حشح‎ larious Method ndom Rescreening of 10% of negative-d slides Selective Rescreening of high risk cases-C Rescreening of negative slides 100% -O Rapid Rescreening (30 sec obj. 10 )-& 

صفحه 56:
Causes of false negative ‏دنو‎ | ampling error: Sampling or Spreading of ‏وااعء ع‎ Screening error: Detection or Interpretation Slide preparation error : Fixation, Staining, mounting 

صفحه 57:
false Neg. proportion ۳0 . ‏سمحي مزع‎ PO + DE FNP Ideally less than 5- 10% 

صفحه 58:
Seen of ee Neg. 22۳۰ ۳ screening Sensitivity FNR = FNP FN due to sampling error + FN due to Slide preparation + error FNR usually more than 20% Sensitivity of pap test usually 60-80% 

صفحه 59:
وت aes 50661۲1611۷ ۴ Screening : Discrepancies may be due to Surgical Sampling test OS% oP Wigk wade Cpihetd Cbuwrwdlies Chol ‏ملس‎ oo Wisco 

صفحه 60:
و و سا ‎Retrospective Review‏ When a new rer grade epithelial abnormality : detected by cytology or pathology PMs aN ‏يي ا ل ل‎ eo ed Should be reviewed Ont wore that CO% of vases should have cells coosisteot wit Ligh grade epithet oboercotiy On review oP cexaiive previvus slides 

صفحه 61:
performance Number of epithelial abnormality ASC , LSIL , HSIL , Carcinoma ASC / SIL ratio = 2-3 1 

صفحه 62:
Proper Archiving ——__of_the-slides & Reports 7 All Slides (Neg. & Pos.) : 5 ‏زو‎ All Reports’ : ۱۱۱/7 Requisition Form: 2 yrs 

صفحه 63:
Turn around time 0 At least 90% of smears should be reported within 5 working days 

کيفی کنترل کيفی کنترل سرويکوواژينال سيتولوژی سرويکوواژينال در سيتولوژی در يكي از مؤثرترين روش هاي بيماريابي در #تار#يخچه پزشكي !به شرط حفظ كيفيت تثبيت يک روش استاندارد برای کنترل کيفيت سيتولوژی سرويکوواژينال ؟!! Implementation Implementation of of Quality Quality Assurance Assurance program program Pre-analytical Quality of smear Analytical Interpretation & Quality of Performance Post- Analytical Reporting Proper Sampling Proper spreading Quality Fixation Sampling Device of Preparation of patient Smear Staining رعایت نکات ضروری قبل از نمونه گیری بهتر#ین زمان انجام نمونه گیر#ی روز 14سیکل است ‏از یک هفته قبل بیمار نباید از انواع کرم های واژ#ینال استفاده نموده باشد ‏از 48ساعت قبل استفاده از انواع روشهای واژینال جلوگيری از باردار#ی و دوش واژینال توصیه نمی گردد. ‏مقاربت از 24ساعت قبل از نمونه گیری نباید صورت گیر#د. #حيح برداری ص صحيح نمونه برداری نمونه قبل از نمونه برداری نبايد معاينه سرويکس با انگشت انجام شود قبل از نمونه برداری نبايد اسيد استيک به سرويکس ماليده شود ( کاهش رنگ پذيری سلول و کاهش محتوای سلولی ) قبل از نمونه برداری نبايد سرويکس با سالين شسته شود از اسپکولوم استريل با اندازه مناسب استفاده شود اسپکولوم فقط با کمی آب يا سالين روان شود (لوبريکانت ها رنگ پذيری سلولها را مختل می کنند ) مشاهده مشاهده ‏بررسی سرويکس از #نظر #هر#گونه ضايعه ‏ارزيابی محل ( T zoneوابسته به PHواژن – وضعيت هورمونال -حاملگی -يائسگی -درمان های قبلی - آناتومی فرد ) ‏پاک کردن خون -موکوس يا ترشحات بيش از حد از# سطح سر#ويکس برداری نمونه برداری وسايل نمونه انواع وسايل انواع Plastic spatula Extended tip spatula Cervical brush Cervical broom Cotton swab Unicum …. گيری نمونه گ#يری وسيله نمونه انتخاب وسيله انتخاب ‏انتخاب وسيله و تکنيک نمونه گير#ی در #هر فرد با در نظر گرفتن شرايط فر#د و محل T zone انجام می شود. توصیه NCCLS: استفاده توا م از اسپاچوال و سيتوبراش برداری نمونه برداری نحوه نمونه نحوه روی بر روی برداری بر نمونه برداری وسيله نمونه از وسيله نمونه از انتقال نمونه انتقال ای شيشه ای اساليد شيشه اساليد ‏CM5/2 ‏CM5/2x ‏x 55/7 ابعاد /7 به ابعاد به ‏mm وضخامت mm 11 وضخامت اندوسرويکس وو نمونه اندوسرويکس انتقال نمونه محل انتقال محل ای شيشه ای اساليد شيشه روی اساليد بر روی اکتوسرويکس بر اکتوسرويکس هدف : پخش کردن يکنواخت سلولها به صورت يک اليه نازک بر روی اساليد شيشه ای اسمير خيلی نازک : آرتيفکت ناشی از خشک شدن در معرض هوا تعداد سلولها کم و پراکنده اسمير ضخيم : فيکساتيو به آن نفوذ نمی کند رنگ به آن نفوذ نمی کند گيری خاص نم #ونه گيری نمونه های خاص روش های روش ‏بررسی هورمونی: نمونه توسط اسـپاچوال از #اپی تليوم ثلث فوقانی دیواره های طرفی واژن گرفته می شود. نمونه ازvaginal pool : نمونه توسط انتهای پهن تر #اسپاچوال از فورنیکس خلفی واژن گرفته می شود. نمونه جهت بيماريابی زنانی که در معرض DES بوده اند: نمونه توسط اسپاچوال از چهار ربع واژن – از ثلث فوقانی دیواره ها – گرفته می شود. شناسايی آدنوز ويا ca clear cellاست. ‏هدف ِ ‏تهيه چهار اساليد که روی برچسب آن محل ربع مربوطه نوشته شده باشد. گرفتن اسمیر سرويکو واژینال توسط خود فرد توصيه نمی شود چون اغلب نمونه فاقد کفايت است. مناسب فیکساسيون مناسب فیکساسيون ‏پس از تهیه اسمير فیکساسيون ظرف چند ثانيه در حالیکه نمونه هنوز خيس است انجام می شود. ‏انواع فيکساتيوها: فيکساتيوهای پوشانندهء سطح ((coating surface .F اتانول %95 پوشاننده فیکساتيوهای پوشاننده فیکساتيوهای ‏Coating ‏Coating Surface ‏Surface Fixative ‏Fixative ترکیب الکل و پلی اتيلن گليکول (کربوواکس) ‏توسط اسپری به سطح اسمير پاشيده می شوند. ‏توسط قطر#ه چکان روی اساليد ريخته می شود.  ‏ ‏ فاصله اسپری تا اساليد: حدوداً 30سانتی متر يا طبق دستور سازنده نزديک بودن اسپری به اساليد: ايجاد آرتيفکت جاری شدن مايع فيکساتيو در سطح الم شسته شدن سلولها کنده و پرتاب شدن سلولها دور بودن اسپری از اساليد: خشک شدن اساليد و فيکساسيون نامناسب پخش نامنظم فيکساتيو در سطح اساليد  استفاده از فيکساتورهای مو توصيه نمی شود فيکساتيو ها (بجز الکل ) هماتوکسيلين را آلوده و خراب می کنند قبل از رنگ آميزی ،بايد کربوواکس از سطح اسمير برداشته شود ( قراردادن اسميرها درالکل 95بمدت 10دقيقه ) در غير اين صورت هسته ها کدر و نا مشخص، سيتو پالسم آبی کمرنگ، و رنگ پذيری نامنظم می شود % %95 اتانل 95 اتانل ‏WET ‏WET FIXATION ‏FIXATION ‏در يک محفظه مناسب ريخته میشود،اسمير تهيه شده سريعا به داخل آن غوطه ور می گردد ‏فيکساسيون ظرف 5تا 30دقیقه انجام ميشود قبول قابل قبول غير قابل اساليدهای غير اساليدهای ‏اساليدهای شکسته غير #قابل ترميم ‏اساليدی که مشخصات يا شماره مربوط به بيمار روی آن ثبت نشده ‏اساليدی که برگه درخواست همراه آن فاقد مشخصات و يا اطالعات بالينی کافی باشد يا مشخصات روی آن با مشخصات ثبت شده ر#وی اساليد همخوانی ندارد ‏اساليدی که برگه درخواست همراه ندارد صحيح آميزی صحيح رنگ آميزی رنگ ‏رنگ آميزی پاپا نيکوالئو ر#نگ آميزی مور#د قبول بر#ای نمونه های سيتولوژی و بويژ#ه سيتولوژ#ی سر#ويکوواژينال در تمام دنيا ، يک رنگ برای هسته، حاوی و دو رنگ متقابل برای سيتوپالسم می باشد پاپانيکوالئو آميزی پاپانيکوالئو رنگ آميزی رنگ رنگ های مورد استفاده : هماتوکسيلين :برای رنگ آميزی هسته رنگ#ميزیس##يتوپالسم. #متشکلاز رنگorange- ب###را#ی آ ‏OG-6 #وتنگستيک#سید در ا#تانل%95 ا ‏Gب###عالوه #ف###سف کراتين اگر در سلولهای سنگفرشی موجود باشد آنرا برنگ نارنجی در می آورد. برای رنگ آميزی سیتوپالسم ‏EA : يک رنگ پلی کروم و ترکيبی از SFسبز مايل به زرد و EOSINE- ‏Y ‏SFموجود در EAس##لوله#ايیک###ه #از ن##ظر متابوليکف###ع#ا##لند را ب###ه #رنگس##بز در میآورد ) ش##املس##لوله#ایا#ينترمديتو پ###ارا#بازا##ل،هيستيوسيته#ا ،ل##کوسيته#ا وسلوله#ایب###دخيم( # هنگامی که در اسمير رنگ سبز کم رنگ می شود EA،بايد عوض شود. #يزی رنگ آم آميزی مراحل رنگ مراحل .1 .2 .3 .4 .5 .6 .7 .8 اول بايد فيکساتيو که روی سطح اسمير است پاک شود)قرار دادن اسمير درالکل )%95 مرحله هيدراتاسيون که سلولها برای رنگ پذيری هسته آماده می شوند)قرار دادن اسميرها در ظروف متوالی الکل با غلظت رو به کاهش ( مرحله رنگ آمیزی هسته )قرار دادن اسميرها در هماتوکسيلين و محلول آبی کننده که رنگ هماتوکسيلين را تثبيت می کند ( مرحله دهيدراتاسيون ،آماده کردن اسميرها برای رنگ آميزی سيتوپالسم )قرار دادن اسميرها در ظروف متوالی الکل با غلظت رو به افزایش ( مرحله رنگ آميزی سيتوپالسم )قرار دادن اسميرها در،OGآب کشی در الکل ،EA،آب کشی در الکل( مرحله نهايی دهيدراتاسيون ،آماده کردن اسميرها برای مرحله شفاف سازی )قراردادن اسميرها در الکل مطلق ( مرحله شفاف سازی اسمير )قرار دادن اسميرها در ظرف گزيلن ( مونته کردن اساليدها. در رنگ آميزی پاپانيکوالئو ‏HYDRATION س##لوله#ا را ب###را#یج#ذبهسته# ‏DEHYDRATION س##لوله#ا را ب###را#یج#ذبدر س##يتوپالسم #آ#ماده #می ک###ند. رنگ آميزی پاپانيکوالئو به دو متد : ‏REGRESSIVEوPROGRESSIVEانجام می شود. تفاوت اين دو روش در مرحله رنگ آميزی هسته با هماتوکسيلين است .  در متد Regressiveهسته توسط هماتوکسيلين غيراسيدی (هماتوکسيلين هاريس)بيش از حد رنگ می شود و در مرحله بعد ،رنگ اضافه با Hclرقيق رنگبری می گردد و سپس نمونه در آب جاری شسته می شود. در متد Progressiveاسمير تا زمانی در هماتوکسيلين می ماند که شدت رنگ هسته بحد مطلوب برسد (رنگبری با Hcl و شستشودرآب جاری الزم نيست ) در مرحله بعد ،اسمير درون يک ماده آبی کننده ( ) Blueing agentمثل هيدروکسيد آمونيوم قرارمی گيرد که رنگ هسته را تثبيت می نمايد.  NCCLS متد PROGRESSIVEرا ت###وصيه #میک###ند. چون شدت رنگ هسته آسانتر قابل کنترل است و تکرار پذيری بهتری را سبب می شود ومرحله آب کشی با آب جاری که باعث از دست رفتن سلولها می شود را ندارد . در هر آزمايشگاه تغييرات مختصری ممکن است در تکنيک و زمان های رنگ آميزی داده شود تا رنگ ايده آل بدست بيايد، مهم اينست که در هر آزما يشگاه روش انجام کار با ذکر جزئيات هر مرحله ،مکتوب شده و مجاور محل رنگ آمیزی نصب گردد . پاپانيکوالئو مزايای پاپانيکوالئو مزايای جزئيات هسته مشخص است .کروماتين به خوبی رنگ می گيرد شفافيت سيتوپالسم حتی وقتی سلولها روی هم می افتند،بخوبی حفظ می شود انواع سلولها از يکديگر قابل افتراقند تفاوت در رنگ سيتوپالسم سلولهای مختلف نشانگر ميزان بلوغ و فعاليت متابوليک آنهاست رنگ برای مدت طوالنی ثابت می ماند و نتايج تکرارپذير می دهد پاپانيکوالئو آميزی پاپانيکوالئو رنگ آميزی مورد رنگ در مورد نکاتی در نکاتی اکسيد شدن رنگها در معرض نور تبخير رنگها فيلتر کردن رنگها تعويض رنگها استفاده از آب لوله کشی به جای آب مقطر توجه به کلر آب لوله کشی توجه به زمان های رنگ آميزی نحوه DIPکردن نمونه انتقال نمونه از يک ظرف به ظرف بعدی اثر الکل در از بين بردن رنگ سيتوپالسم)در صورت مجاور شدن طوالنی مدت پس از مرحله رنگ آميزی سيتوپالسم( بنزن عدم استفاده از الکل حاوی ِ عدم استفاده از هماتوکسيلين حاوی جيوه اسمير کردن اسمير شفاف کردن شفاف بعد از اتمام مراحل رنگ آميزی ،سلولها بايد دهيدراته شوند و الکل از درونشان خارج شود و سپس با يک عامل شفاف کننده مجاور گردند تا سيتوپالسم سلول شفاف شود عامل شفاف کننده بايد بی رنگ باشد عامل شفاف کننده بايد ضريب انکسار مشابه الم ،المل و ماده مونته کننده باشد  گزيلن )دی متيل بنزن( رايج ترين عامل شفاف کننده است که استفاده می شود . گزيلن بايد روزی يک بار فيلتر شود. درصورتيکه محلول گزيلن حبابدار شيری يا صورتی شود ،بايد تعويض گردد. گزيلن بار گزيلن کار بار ايمنی کار نکات ايمنی نکات _بخار گزيلن توکسيک است .کار با گزيلن بايد زير تهويه مناسب انجام شود . _از تماس گزيلن با پوست اجتناب شود . _گزيلن را نبايد در دستشويی خالی کرد )بدليل متصاعد شدن بخار آن که توکسيک و قابل اشتعال است ( _گزيلن قابل اشتعال است .محل کار با گزيلن نبايد نز#ديک شعله آتش باشد . الم کردن الم مونته کردن مونته ويژگی های ماده ای که برای مونته کردن استفاده می شود : _بايد با عامل شفاف کننده )گزيلن ( قابل امتزاج باشد . _بايد ترانس پارنت باشد. _ضريب انکسار آن مساوی ضريب انکسار الم و المل باشد . _ ضريب انکسار آن طوری باشد که ايجاد آشفتگی در ميدان ديد نکند. _ويسکوزيتی آن کم باشد تا حباب هوا زير المل گير نکند . _ PHآن خنثی باشد . _حاوی ماده آنتی اکسيدان باشد تا به مرور زمان اسمير زرد يا محو نشود . مونته کردن الم : _ هنگام مونته کردن سطح الم مرطوب باشد تا آرتيفکتهای قهوه ای ناشی از خشک شدن ايجاد نشوند . _حباب های هوا که ايجاد می شوند بايد خارج شوند. المل المل ‏cover ‏cover ship ‏ship _المل بايد شيشه شفاف درجه يک با ضخامت 0.17mm-0.13 باشد. _بايد تمام سطح اسمير را بپوشاند) معموالً (X 60 mm 24 _بايد مسطح باشد و ناصافی نداشته باشد. _باید مقاوم باشد . ضريب انکسار آن مساوی ماده مونته کننده و الم باشد . Analytical Phase Personnel Personnel requirement requirement Education Skills Training Number Number of of Specimen Specimen processed processed in in aa lab. lab. Per Per Year Year : WHO Consensus panel Recommended at least 20,000 specimens yearly to maintain acceptable skills CAP review : Screening Error Rate is greatest in labs processing less than 5000 specimen / Yr Workload Workload CLIA : Day assessment assessment 12 slides / hr Australia : 10 slides / hr Day U.K Day : Maximum 4 hr 100 Slides / 70 Slides / 30 Slides / Consensus : 60 Slides / Day Post-Analytical Phase Reporting Should be Standard & Clear Quality Assurance مانيتورينگ سيستماتيک روند انجام کار به منظور شناسايی ،کنترل وپيشگيری از بروز خطا از آماده سازی بيمارو جمع آوری نمونه تا مرحله دريافت نتيجه توسط پزشک Staining Staining Quality Quality Check Check Random checking of staining quality of smear Seeding Seeding of of known known abnormal abnormal smear smear in in to to the the daily daily workload workload Evaluation of screener competence Specimen Specimen Adequacy Adequacy Monitor Monitor Between 0.5% to 5% of all smears may reported as unsatisfactory Review Review Of Of Positive Positive Slides Slides Hierarchic Review all of reactive changes & epithelial abnormalities evaluating the discrepancies (CLIA & Recommendation ) Not more than 14% of slides reported as abnormal Not less than 0.5% of slides reported as HSIL Rescreening Rescreening Detection Detection of of Sensitivity Sensitivity of of negative negative slides slides FN FN results results & & Performance Performance Not more than 96% of slides reported as negative : Various Method Random Rescreening of 10% of negative-1 slides Selective Rescreening of high risk cases-2 Rescreening of negative slides 100% -3 Rapid Rescreening (30 sec obj. 10 )-4 Causes Causes of of false false negative negative :: results results Sampling error : the cells Sampling or Spreading of Screening error : Detection or Interpretation Slide preparation error : Fixation, Staining, mounting false false Neg. Neg. proportion proportion = FNP FN FN + TP FNP Ideally less than 510% Estimation Estimation of of false false Neg. Neg. Rate Rate Screening Screening Sensitivity Sensitivity =FNR FN All of Screened Smear FNR = FNP FN due to sampling error + FN due to Slide preparation + error FNR usually more than 20% Sensitivity of pap test usually 60-80% Cytologic Cytologic -- Histologic Histologic Correlation Correlation Evaluating Specificity of Screening : Discrepancies may be due to Surgical Sampling Regression of lesion At least 65% of High grade Epithelial Abnormalities Should confirm on Histology Retrospective Retrospective Review Review When a new High grade epithelial abnormality : detected by cytology or pathology All negative cytology obtained within last 5 yrs Should be reviewed Not more than 20% of cases should have cells consistent with High grade epithelial abnormality On review of negative previous slides Monitoring Monitoring of of the the performance performance Number of epithelial abnormality ASC , LSIL , HSIL , Carcinoma ASC / SIL ratio = 2-3 Proper Proper Archiving Archiving of of the the slides slides & & Reports Reports All Slides ( Neg. & Pos. ) yrs All Reports : Requisition Form : 10 yrs 2 yrs : 5 Turn Turn around around time time At least 90% of smears should be reported within 5 working days